Zirkulierende miRNA-Extraktion: Eine Methode zur Isolierung von miRNA aus Plasmaproben durch organische Extraktion und Anreicherung kleiner RNA

- MicroRNAs oder miRNAs sind kleine nicht-kodierende RNAs, die die Genexpression regulieren, indem sie mRNA abbauen oder ihre Translation in funktionelle Proteine blockieren. Zirkulierende miRNAs sind potenzielle Krebs-Biomarker und können aus Körperflüssigkeiten wie Plasma extrahiert werden. Mischen Sie zunächst das Plasma mit einer denaturierenden Lösung, die gleichzeitig die Probe homogenisiert und RNA-abbauende Ribonukleasen hemmt.

Mit saurem Phenol-Chloroform behandeln und zentrifugieren, um die Probe in zwei Phasen zu unterteilen, eine untere organische Phase, die DNA und Proteine enthält, und eine obere wässrige Phase, die RNA enthält. Die wässrige Phase wird wiederhergestellt. Fügen Sie absolutes Ethanol hinzu, um RNA aus der Lösung auszufällen.

Bringen Sie die Ethanolkonzentration der Probe auf 25 %, um eine Anfangsbedingung zu schaffen, die für eine große RNA-Trennung förderlich ist. Das Gemisch in eine vormontierte Filterpatrone und Zentrifuge umfüllen. Große RNAs immobilisieren selektiv auf dem Filter, während sich kleinere miRNAs im Filtrat sammeln.

Erhöhen Sie anschließend die Ethanolkonzentration auf 55 %, um die miRNA-Isolierung zu begünstigen. Übertragen Sie das Fi