Visualisierung der Harnwegsinfektion in einem Mausmodell mittels Biolumineszenz

Beginnen Sie mit einer betäubten Maus und spritzen Sie mit einem Katheter eine Suspension pathogener Bakterien in die Harnblase.

Diese Bakterien tragen ein biolumineszentes Operon, das eine autonome Lichterzeugung ermöglicht, um die Infektion zu verfolgen.

Die innere Auskleidung der Blase ist ein spezialisiertes Epithel, das das Lumen vom darunterliegenden Gewebe trennt.

Die bakteriellen Adhäsionsproteine binden an die Glykoproteinrezeptoren auf der epithelialen Oberfläche des Wirts und lösen rezeptorvermittelte Endozytose aus.

Die internalisierten Bakterien replizieren sich und bilden dichte intrazelluläre Bakteriengemeinschaften.

Die Bakterien exprimieren das biolumineszente Operon, wodurch ein Luciferase-Enzym und ein Enzymkomplex produziert werden, die das Luziferasesubstrat synthetisieren.

Luciferase oxidiert das Substrat, um sichtbares Licht abzugeben.

Positioniere die Maus in der Bildgebungskammer und fange das biolumineszente Signal auf.

Wählen Sie eine interessante Region aus und quantifizieren Sie die Intensität der Biolumineszenz.

Überwachen Sie dieses Signal über die Zeit als Echtzeitindikator für Bakterienlast und Infektionsverlauf.

Öffnen Sie die BLI-Aufnahmesoftware und klicken Sie im Bildgerät auf Initialisieren, um die Kamera und das Stage-Controller-System zu testen und die geladene Gerätekamera auf minus 90 Grad Celsius zu kühlen. Klicken Sie auf Erwerbung, AutoSave to. Wähle Lumineszenz und Foto. Überprüfe die Standard-Lumineszenzeinstellungen, indem du den Anregungsfilter auf Block und den Emissionsfilter auf Open stellst.

Stellen Sie die Belichtungszeit beim ersten Bild auf Auto. Für In-vivo-Messungen und helle Signale stellen Sie die Belichtungszeit auf etwa 30 Sekunden ein. Verkürze die Belichtungszeit, wenn aufgrund eines gesättigten Bildes eine Warnung erscheint.

Wählen Sie das mittlere Binning, F/Stop eins und wählen Sie das richtige Sichtfeld. Stellen Sie die Höhe des Motivs beim Fotografieren von Mäusen auf 1 Zentimeter ein. Bilde bis zu 5 Mäuse gleichzeitig ab und trenne die Tiere mithilfe der Lichtschutz, um Reflexionen zu verhindern.

Schließen Sie die Tür und klicken Sie auf Erfassen, um die Bildbearbeitungssequenz zu starten. Dann füllen Sie detaillierte Informationen zum Experiment ein. Entfernen Sie die Mäuse aus der Bildaufnahmekammer und bringen Sie sie zurück in ihren Käfig. Überprüfen Sie die vollständige Genesung nach der Anästhesie. Dann werden die Käfige zurück in die belüfteten Regale gelegt, bis zum nächsten Bildgebungszyklus.

Starten Sie die Bildbearbeitungssoftware und laden Sie die experimentelle Datei, indem Sie auf Browse klicken. Verwenden Sie die Werkzeugpalette, um die Farbskala des Bildes anzupassen. Verwenden Sie die ROI-Werkzeuge, um einen Bereich von Interesse auf dem Bild zu zeichnen, damit dieser groß genug ist, um die gesamte Fläche abzudecken, und verwenden Sie für alle Bilder die gleichen Maße. Klicken Sie dann auf ROI-Messung, um die Lichtintensität zu quantifizieren.