Vorbereitung einer hämolytischen Staphylococcus aureus-Kultur für Studien zur Wirts-Pathogen-Interaktion

Beginnen Sie mit einer selektiven Nähragarplatte, die mit Blut gefüllten roten Blutkörpern ergänzt wird.

Streak Staphylococcus aureus (S. aureus), ein gram-positives pathogenes Bakterium, auf den Agar und inkubiert.

Während der Brutzeit nutzen Bakterien Nährstoffe, wachsen und bilden Kolonien.

S. aureus sekretiert Hämolysin, ein porenbildendes Toxin, das die roten Blutkörperchen im Agar lysiert und klare, transparente Zonen um die Kolonien erzeugt, was auf eine Hämolyse hinweist.

Wählen Sie eine hämolytische Kolonie aus, inokulieren Sie sie in eine Nährbrühe und inkubieren Sie unter rotierenden Bedingungen, um das Bakterienwachstum zu unterstützen.

Mit einem Spektrophotometer wird die optische Dichte (OD) gemessen, um die bakterielle Konzentration zu bestimmen.

Basierend auf der OD-Messung wird ein Aliquot in eine frische Nährbrühe übertragen, um die Zellen zu verdünnen, und in einem Wasserbad mit Schütteln inkubiert.

Messen Sie den OD in regelmäßigen Abständen.

Ein OD nahe 0,8 zeigt, dass das Bakterium die exponentielle Wachstumsphase mit einheitlicher Physiologie erreicht hat.

Diese hämolytische S. aureus ist bereit für Wirts-Pathogen-Interaktionsstudien.

Fang damit an, S zu streichen. Aureus-Stämme von Interesse auf Blutagarplatten aus einem gefrorenen Glycerolbestand und inkubieren die Platten bei 37 Grad Celsius für 16 bis 24 Stunden, um ihre hämolytischen Phänotypen basierend auf ihrer Fähigkeit zu bestätigen, rote Blutkörperchen zu lysieren und klare transparente Zonen zu bilden.

Inokulieren Sie einzelne Kolonieisolate jedes Stamms in 4 Millilitern tryptischer Sojabrühe (TSB) in sterilen Glasröhren und drehen Sie die Röhren bei 37 Grad Celsius für 16 bis 24 Stunden in einer Röhrenrolle in einem etwa 70-Grad-Winkel und 70 Umdrehungen pro Minute. Am nächsten Morgen missen Sie die optische Dichte der Kulturen bei 600 Nanometern oder OD₆₀₀ mit einem Spektrophotometer und verdünnen Sie die Zellen auf einen OD₆₀₀ von 0,05 in 25 Millilitern steriler TSB bei einem 5-zu-1-Flaschen-zu-Volumen-Verhältnis in 125-Milliliter-DeLong-Kolben. Inkubieren Sie die Kulturen in einem Wasserbad bei 37 Grad Celsius bei 280 Umdrehungen pro Minute.