Modellierung der Aeromonas-Pathogenese bei C. elegans mit einem Überlebenstest

Beginnen Sie mit einer Kultur eines Aeromonas-Stamms , eines bakteriellen Erregers, der in einem nährstoffreichen Medium gezogen wird.

Missen Sie die optische Dichte der Kultur und passen Sie die Bakterienkonzentration an, um eine konstante Infektionslast zu gewährleisten.

Die Kultur auf Nematodenwachstumsmedium oder NGM-Agar plattieren und inkubieren, um eine gleichmäßige Bakterienschicht zu bilden.

Bereite entwicklungssynchronisierte C. elegans-Larven vor – einen bakterivoren Nematoden, der auf einem angereicherten Medium gehalten wird.

Übertragen die Larven auf die Bakterienschicht und inkubieren, um die orale Aufnahme von Aeromonas zu ermöglichen und die Darmbesiedlung zu ermöglichen.

Im Wirt vermehren sich die Bakterien und setzen Zytotoxine frei, die die Darmepithelzellen schädigen und zum Tod führen.

Übertrage überlebende Nematoden auf frische Bakterienplatten und zähle täglich die Anzahl der lebenden, toten und nicht ansprechbaren Würmer, bis der letzte Wurm stirbt.

Schließlich erstellen Sie eine Überlebenskurve, um die Lebensfähigkeit des Wirts über die Zeit zu bewerten.

Wählen Sie zunächst eine einzelne Kolonie jeder der vier Aeromonas-Stämme aus und kultivieren Sie sie gemäß dem Textprotokoll. Dann missen Sie die_{OD-600-Absorption} der bakteriellen Brühe und passen sie an, bis die Absorptionsfähigkeit bei 2,0 liegt.

Anschließend gibt es 30 Mikroliter Bakterienbrühe aus jedem Stamm auf NGM-Platten.

Wählen Sie die zuvor vorbereiteten L4-Würmer zufällig aus und übertragen Sie sie auf die NGM-Platten mit den Aeromonas-Stämmen. Dann werden die Platten bei 20 Grad Celsius inkubiert, bis der Test abgeschlossen ist.

Jeden Tag übertrage alle lebenden Würmer auf eine neue NGM-Platte mit Bakterien. Zähle jeden Tag die Anzahl der lebenden, toten und sensorischen Würmer, bis der letzte Wurm tot ist.