Bildgebung morphologischer Veränderungen bei Bakterien mittels lebender Zellfluoreszenzmikroskopie
JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Mikrobiologie
0 Aufrufe • 3:15 Min. • March 31st, 2026
Beginnen Sie mit einer Bakterienkultur, die unter einer Agaroseplatte in einer Glasbodenschale immobilisiert ist.
Die bakteriellen Zellmembranen sind mit einem fluoreszierenden Farbstoff beschriftet.
Die Bakterien sind außerdem so konstruiert, dass sie eine Antisense-RNA exprimieren, die eine bestimmte mRNA angreift und die Produktion eines essentiellen Zellteilungsproteins hemmt.
Fügen Sie dem Objektiv des invertierten Fluoreszenzmikroskops einen Tropfen Immersionsöl hinzu.
Setze die Schale in ein Metallgehäuse und befestige sie auf der Mikroskopbühne.
Heben Sie das Objektiv an, bis das Öl die Schüssel berührt, und konzentrieren Sie sich dann auf die Zellen.
Verwenden Sie Bildgebungssoftware, um Z-Stacks für die Aufnahme von Bildern in mehreren Tiefen einzustellen.
Beginnen Sie mit der Aufnahme von Fluoreszenz-Zeitrafferbildern.
Da die Zellen auf die Antisense-RNA-Expression reagieren, können sie sich nicht teilen und entwickeln geschwollene Formen.
Die Membranorganisation wird gestört, was zu ungleichmäßiger und fokaler Fluoreszenz führt, die auf eine defekte Zellteilung hinweist.
Um die Probe abzubilden, verwenden Sie den groben Einstellknopf, um sicherzustellen, dass das Objektiv vollstä
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