Name: Isolierung genomischer DNA aus Maus-Tails (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-07-29T00:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 26 s
Description: Lernen Sie die Isolierung genomischer DNA aus Maus-Schwanzbiopsien. Diese Methode zeigt, wie Sie Kontamination vermeiden und Mäuse eindeutig identifizieren, um zuverlässige genetische Analysen durchzuführen.

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<ol style="margin-top: 0in"><li> Cut Schwanz Stück (3mm) und markieren den Ohren. </li><li> Add 720 m l STE und 30 m l Proteinase K (10 mg / ml Stammlösung). </li><li> Inkubation bei 55 ° C auf Heizblock und Wirbel jede Stunde für 3 Stunden bei Höchstgeschwindigkeit für 10 Sekunden. </li><li> Inactivate Proteinase K bei 70 ° C für 5 Minuten. </li><li> Quench auf Eis für 5 Minuten. </li><li> Centrifuge tail DNA für 10 Minuten bei voller Geschwindigkeit. </li><li> Dekantieren in neue Röhrchen mit 720 m l Isopropanol. &nbsp; </li><li> Niederschlag DNA durch Invertieren des Röhrchens oder Vortexen. </li><li> Spin down DNA für 5 Minuten bei voller Geschwindigkeit. Überstand entfernen. </li><li> Wash-Pellet mit 70% Ethanol. </li><li> Spin down genomische DNA 5 Minuten bei voller Geschwindigkeit. Überstand entfernen. </li><li> Lassen DNA für 1-2 Minuten trocknen lassen. </li><li> Resuspendieren DNA in 100-200 m l je nach Größe der Pellets. </li><li> Das Röhrchen bei 55 ° C für 1 Stunde zu erleichtern Auflösung der DNA. &nbsp; </li></ol>

<table><tbody><tr><td>STE</td><td>Puffer</td><td></td><td></td><td>100 mm Tris; pH 8,5 /5 mM EDTA /0,2 % SDS /200 mM NaCl / in H2O</td></tr><tr><td>TE</td><td>Puffer</td><td></td><td></td><td>100 mM Tris; pH 5,0 /1 mM EDTA /10 mM NaCl</td></tr></tbody></table>

isolierung genomischer dna aus maus-tails

Isolation of Genomic DNA from Mouse Tails

Isolierung genomischer DNA aus Maus-Tails

Das ist also ein zehn Tage altes Mäusejunges, von dem ich eine Schwanzbiopsie entnehmen werde, um anschließend genomische DNA aus dem Schwanz zu isolieren. Ich werde also ein kleines Stück des Schwanzes abschneiden, ungefähr drei Millimeter, und das Schwanzstück in ein Eppendorf-Röhrchen geben, das ich dann auf Trockeneis lege. Um Kontaminationen von einer Maus zur anderen zu vermeiden, markiere ich üblicherweise die Rasierklinge an der Stelle, an der ich den letzten Schnitt gemacht habe.Auf diese Weise stelle ich sicher, dass ich für die nächste Maus ein sauberes Rasierklingenstück für die nächste Schwanzbiopsie verwende. Um die verschiedenen Mäuse in Ihrem Wurf unterscheiden zu können, benötigen Sie eine Möglichkeit, die Mäuse zu kennzeichnen. Eine Möglichkeit besteht darin, mit einem hier gezeigten Ohrlochstecher ein Loch in ihre Ohren zu stanzen.Nehmen Sie die Maus vorsichtig am Nackenfell, drehen Sie sie um und klemmen Sie ihren Schwanz zwischen die Finger. Halten Sie die Ohrlochperforation mit der anderen Hand und machen Sie dort einen schnellen Schnitt in das Ohr der Maus. Sehen Sie, wie schmerzlos das war?Okay, nun können Sie sehen, dass ich einige Schwanzstücke in diesen E

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Research

Forschung

JoVE Journal

Biology

Biologie

Die vollständige Genotypisierung von einer Maus Schwanz Probe, einschließlich Gewebe Verdauung und PCR-Anzeige ist in eineinhalb Stunden mit Sigma SYBR Green Extract-N-Amp Tissue PCR Kit durchgeführt.

Schnelle Genotypisierung von Maus Tissue Mit Sigma Extract-N-Amp Tissue PCR Kit

Wir zeigen eine Chromatin-Immunopräzipitation (ChIP)-Methode, um Wechselwirkungen zwischen Faktoren bei Gewebe-spezifische Gene während oder nach dem Einsetzen der Gewebe-spezifische Gen-Expression in embryonalen Maus-Gewebe zu identifizieren. Dieses Protokoll sollte allgemein anwendbar für die Untersuchung von Gewebe-spezifische Genaktivierung, wie es während der normalen Embryonalentwicklung auftritt.

Chromatin Immunopräzipitation-Assay für Tissue-spezifische Gene mit Frühzeitige muriner Embryonen

Wir präsentieren ein nicht-invasives Vorgehen bei der Probennahme, um effizient zu sammeln Haarproben von schwer fassbaren kleinen Säugetieren, wie für den amerikanischen pika gezeigt. Wir demonstrieren den Nutzen dieser Methode durch Extraktion von DNA aus Proben Haar und verstärkt verschiedene Arten von molekularen Markern häufig in Studien für Wildtierkunde und Ökologie und Naturschutz eingesetzt.

Ein nicht-invasives Haar Sampling-Technik, um High Quality DNA aus Elusive Kleinsäuger erhalten

In diesem Video demonstrieren wir ein Verfahren zum Schwanzschneiden in einem Mausmodell, um peripheres Blut zu sammeln. Das gesammelte Blut wird anschließend einer Zentrifugation unterzogen, um Plasma zu trennen, das für weitere Experimente verwendet werden kann.

Ein Mausschwanz-Snip-Verfahren zur peripheren Blutentnahme und Plasmaisolierung

Beschreiben wir eine einfache und schnelle experimentelle Verfahren zur Erzeugung von primären Fibroblasten, die aus den Ohren und Schwänze von Mäusen. Das Verfahren erfordert keine spezielle Tiertrainings erfordern und für die Erzeugung von Fibroblastenkulturen von den Ohren bei RT für bis zu 10 Tage gelagert werden.

Erzeugenden Primärfibroblastenkulturen von Maus-Ohr und Schwanz Tissues

Die Mikroinjektion von Maus-Oozyten wird üblicherweise sowohl für die klassische Transgenese ( dh die zufällige Integration von Transgenen) als auch für das CRISPR-vermittelte Gen-Targeting verwendet. Dieses Protokoll überprüft die neuesten Entwicklungen in der Mikroinjektion, mit einem besonderen Schwerpunkt auf Qualitätskontrolle und Genotypisierung Strategien.

Erzeugung von genetisch modifizierten Mäusen durch die Mikroinjektion von Oozyten

Wir beschreiben ein detailliertes Protokoll für Lambda wählen Sie cII Mutation Assay in kultivierten Zellen von transgenen Nagetiere oder die entsprechenden Tiere behandelt mit einem chemisch/physikalische Mittel von Interesse. Dieser Ansatz hat verbreitet zu Testzwecken Mutagenität von Karzinogenen in Säugetierzellen.

Die Lambda wählen Sie cII Mutation-Detection-System

Hier präsentieren wir ein Protokoll, um schnell qualitativ hochwertige Kerne aus dem frischen oder gefrorenen Gewebe für die nachgelagerten massiv parallelen RNA Sequenzierung zu isolieren. Wir enthalten Waschmittel-mechanische und hypotone-mechanische Gewebe Störung und Zelle Lyse Optionen, die für die Isolierung von Kernen verwendet werden können.

Isolierung von Erwachsenen Rückenmark Kerne für massiv parallele Single-Kern-RNA-Sequenzierung

Das vorliegende Protokoll beschreibt eine einzelne M213L-Mutation in Gja1, die die Connexin43-Generation in voller Länge beibehält, aber die Translation der kleineren GJA1-20k-intern übersetzten Isoform verhindert.

Entfernung einer internen translationalen Startstelle aus der mRNA unter Beibehaltung der Expression des Protein in voller Länge

Dieses Protokoll bietet eine einfache, kostengünstige DNA-Isolationsmethode für die Analyse von Veränderungen der Mikrobiota des murinen Darms während der Entwicklung von Autoimmunerkrankungen.

Analyse der Dynamik fäkaler Mikrobiota in Lupus-anfälligen Mäusen mit einer einfachen, kostengünstigen DNA-Isolierungsmethode

Wir haben einen speziesübergreifenden vergleichenden Onkogenomik-Ansatz entwickelt, der genomische Analysen und funktionelle genomische Screenings verwendet, um therapeutische Ziele in Tumoren, die in gentechnisch veränderten Mausmodellen auftreten, und den entsprechenden menschlichen Tumortyp zu identifizieren und zu vergleichen.

Genetisches Profiling und Dropout-Screening im Genommaßstab zur Identifizierung therapeutischer Ziele in Mausmodellen für bösartige periphere Nervenscheidentumoren

Lernen Sie die Isolierung genomischer DNA aus Maus-Schwanzbiopsien. Diese Methode zeigt, wie Sie Kontamination vermeiden und Mäuse eindeutig identifizieren, um zuverlässige genetische Analysen durchzuführen.

Isolierung genomischer DNA aus Maus-Tails

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