Elektrochemilumineszenz-Assay zur Quantifizierung der Zielproteinspiegel im Gehirnlysat

Für den quantitativen Nachweis eines spezifischen Proteins im Lysat des Mausgehirns unter Verwendung des Elektrochemilumineszenz-Immunoassays (ECL) beginnen Sie mit einer Multi-Well-Assay-Platte.

Die Vertiefungen bestehen aus leitenden Arbeits- und Gegenelektroden, die den elektrischen Stromkreis vervollständigen. Eine dielektrische Schicht trennt die Elektroden und verbessert so die Empfindlichkeit des Assays.

Geben Sie primäre monoklonale Maus-Antikörper gegen das Zielprotein in die Vertiefungen. Die Arbeitselektroden mit größerer Bindungskapazität erleichtern es den Antikörpern, sich auf ihnen zu immobilisieren.

Inkubieren Sie mit einer proteinhaltigen Lösung, die an die verbleibenden Bindungsflächen der Vertiefung bindet, um Hintergrundinterferenzen zu reduzieren.

Fügen Sie das Kernfraktionslysat des Mausgehirns hinzu. Das Zielprotein im Lysat bindet spezifisch an die monoklonalen Antikörper.

Fügen Sie unmarkierte polyklonale Antikörper hinzu, erkennen und binden Sie an Epitope auf dem Protein, das an primäre monoklonale Antikörper auf der Elektrode gebunden ist. Fügen Sie spezifische Sekundärantikörper hinzu, die mit dem Rutheniumkomplex markiert sind und an die unmarkierten A