Analyse der antigenen Beziehung zwischen Viren mit Hilfe eines bildbasierten Mikroneutralisationsassays

Geben Sie Medien und seriell verdünnte, rezeptorzerstörende, enzymbehandelte Antiseren auf Monoschichten von Säugetierzellen, um eine unspezifische Virusbindung zu verhindern.

Fügen Sie eine Influenzavirussuspension hinzu. Antiseren-Antikörper, die spezifisch für virale Proteine sind, binden, neutralisieren Viren und verhindern das Eindringen in die Zelle.

Niedrige neutralisierende Antikörperkonzentrationen oder nicht-neutralisierende Antikörper ermöglichen eine ineffektive Bindung viraler Antigene, die die Virusbindung an Zellrezeptoren ermöglicht.

Medien entsorgen. Tragen Sie zellulosehaltige Medien auf und bilden Sie eine halbfeste Deckschicht.

Das Virus nutzt die Wirtszellmaschinerie, um Viruspartikel zu bilden und eine Zelllyse zu verursachen.

Das Overlay schränkt die Virusbewegung ein, erleichtert eine lokalisierte Infektion und erzeugt Löcher in den Zellmonoschichten.

Entfernen Sie das Overlay. Fixieren und permeabilisieren Sie die Zellen.

Mit Puffer waschen. Fügen Sie Antikörper hinzu, die virale Antigene in permeabilisierten Zellen binden.

Pipettieren Sie Meerrettichperoxidase-konjugierte Sekundärantikörper, die an Primärantikörper binden.

Führen Sie Peroxidasesubstrate un