Beurteilung der Wirksamkeit einer antiviralen Testsubstanz durch einen Virusinaktivierungsassay
JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Immunologie
0 Aufrufe • 3:41 Min. • July 8th, 2025
Nehmen Sie Röhrchen mit einem rekombinanten Hepatitis-C-Virus oder einer HCV-Suspension, die RNA enthält, die für einen sezernierten Luciferase-Reporter kodiert.
Geben Sie eine antivirale Testverbindung und ein Lösungsmittel in die Test- und Negativkontrollröhrchen.
Die Testverbindungen binden an HCV-Glykoproteine und inaktivieren das Virus.
Verdünnen Sie die Mischungen nach der Inkubation, um Wechselwirkungen zwischen Verbindungen und Zellen in den nachfolgenden Schritten zu verhindern.
Geben Sie diese verdünnten Mischungen auf HCV-Replikations-unterstützende Hepatom-Monoschichten. Ausbrüten.
Das compound-inaktivierte HCV kann nicht an spezifische Zelloberflächenrezeptoren binden, während aktive HCV-Glykoproteine an diese Rezeptoren binden und so die zelluläre Bindung erleichtern.
Nicht adsorbierte HCVs entfernen. Mit Puffer waschen und Medien hinzufügen. Inkubieren Sie über einen längeren Zeitraum.
Das gebundene HCV wird internalisiert, setzt virale RNA frei und führt zur Synthese viraler Proteine und Luciferase, die von der Zelle sezerniert werden.
Sammeln Sie die Luciferase-haltigen Kulturüberstände. Zentrifugieren Sie und geben Sie ein Luziferase-Substrat zu den Überständen.
L
Sehen Sie sich das vollständige Transkript an und erhalten Sie Zugang zu Tausenden wissenschaftlicher Videos