JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Immunologie
0 Aufrufe • 3:31 Min. • July 8th, 2025
Beginnen Sie mit einer Kulturschale mit formalinfixierten, mit Gelatine gefüllten Maus-Jejunum-Kryosektionen mit Büschelzellen mit apikalen Mikrovilli und spulenförmigem Soma.
Mit einem waschmittelhaltigen Puffer waschen, um die Zellmembranen zu permeabilisieren.
Fügen Sie eine alkalische Antigen-Rückgewinnungslösung hinzu. Inkubieren, um fixierungsinduzierte Proteinvernetzungen aufzubrechen und die Proteine für die Färbung freizulegen.
Tragen Sie eine Blockierungslösung auf, um eine unspezifische Antikörperbindung zu verhindern.
Overlay mit primären Antikörpern, die auf ein Aktin-bindendes Protein abzielen, das spezifisch in Büschelzellen phosphoryliert ist.
Entfernen Sie ungebundene Antikörper. Einführung einer Mischung aus Fluorophor-konjugierten Sekundärantikörpern, DNA-bindendem Farbstoff und Phalloidin-Fluoreszenz-Farbstoff-Konjugat.
Die Sekundärantikörper binden an Primärantikörper, das Phalloidin-Fluoreszenzfarbstoff-Konjugat markiert Aktin und der DNA-bindende Farbstoff markiert Zellkerne.
Entfernen Sie ungebundene Bestandteile und fügen Sie einen reinigungsmittelfreien Puffer hinzu.
Übertragen Sie den Abschnitt auf einen mit Klebstoff beschichteten Glasobjektträger und be
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