Name: Chemisch-Antikörper blockiert Microarray für Multiplex-High-Throughput-Profiling von spezifischen Protein-Glykosylierung bei Complex Samples (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-05-04T13:00:00.000+00:00
Duration: 13 min 21 s
Description: Erfahren Sie ein verbessertes Protokoll für das Glykosylierungsprofiling spezifischer Proteine mittels chemisch blockiertem Antikörper-Microarray. Diese Methode reduziert Zeit, Kosten und Geräteanforderungen erheblich.

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Diese Arbeit wurde durch das Institut für Hepatitis-Virus und Forschung gefördert.

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<li>Sevecka, M., Wolf-Yadlin, A., MacBeath, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lysate+Microarrays+Enable+High-throughput%2C+Quantitative+Investigations+of+Cellular+Signaling%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+%26+Cellular+Proteomics%22%5BJournal%5D)">Lysate Microarrays Enable High-throughput, Quantitative Investigations of Cellular Signaling.</a> Molecular & Cellular Proteomics. 10, (2011).</li>
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Die Autoren haben nichts zu offenbaren.

1. Zielprotein und Fängerantikörper Auswahl Vor der Antikörper-Mikroarray-Test werden einige Reagenzien und Materialien benötigt, um in Betracht gezogen werden und vorbereitet. Um einen Antikörper Microarray-Profiling für Glykan oder Glykan Biomarker-Screening, ein Gremium von spezifischen Antikörpern gegen Glykoprotein Kandidaten entwerfen sollte nach der Literatur oder von früheren Ergebnissen festgestellt werden. Diese Antikörper wurden in der Regel von verschiedenen Anbietern wie R &amp; D ...

<table border="1"><tbody><tr><td> Identifikation </td><td> Name des Reagenzes </td><td> Abkürzung </td><td> Firma </td><td> Katalog # </td></tr><tr><td> L1 </td><td> Biotinyliertes Concanavalin A </td><td> ConA </td><td> Vector Laboratories </td><td> BK-1000 </td></tr><tr><td> L2 </td><td> Biotinyliertes Sambucus nigra-Lectin </td><td> SNA </td><td> Vector Laboratories </td><td> B-1305 </td></tr><tr><td> L3 </td><td> Biotinyliertes Lens culinaris Agglutinin </td><td> LCA </td><td> Vector Laboratories </td><td> BK-2000 </td></tr><tr><td> L4 </td><td> Biotinylierte Ricinus communis-Agglutinin I </td><td> RCA </td><td> Vector Laboratories </td><td> BK-1000 </td></tr><tr><td> L5 </td><td> Biotinyliertes Aleuria aurantia-Lectin </td><td> AAL </td><td> Vector Laboratories </td><td> B-1395 </td></tr><tr><td> L6 </td><td> Biotinyliertes Erythrina cristagalli Lektin </td><td> ECL </td><td> Vector Laboratories </td><td> BK-3000 </td></tr><tr><td> L7 </td><td> Biotinyliertes Griffonia (Bandeiraea) simplicifolia Lektin II </td><td> GSL II </td><td> Vector Laboratories </td><td> BK-3000 </td></tr><tr><td> L8 </td><td> Biotinyliertes Weizenkeim-Agglutinin </td><td> WGA </td><td> Vector Laboratories </td><td> BK-1000 </td></tr><tr><td> L9 </td><td> Biotinyliertes Phaseolus vulgaris Erythroagglutinin </td><td> PHA-E </td><td> Vector Laboratories </td><td> BK-2000 </td></tr><tr><td> L10 </td><td> Biotinyliertes Phaseolus vulgaris Leucoagglutinin </td><td> PHA-L </td><td> Vector Laboratories </td><td> BK-2000 </td></tr><tr><td> L11 </td><td> Biotinyliertes Erdnußagglutinin </td><td> PNA </td><td> Vector Laboratories </td><td> BK-1000 </td></tr><tr><td> L12 </td><td> Biotinylierte Pisum sativum Agglutinin </td><td> PSA </td><td> Vector Laboratories </td><td> BK-2000 </td></tr><tr><td> L13 </td><td> Biotinyliertes Dolichos biflorus Agglutinin </td><td> DBA </td><td> Vector Laboratories </td><td> BK-1000 </td></tr><tr><td> L14 </td><td> Biotinyliertes Datura Stramonium Lektin </td><td> DSL </td><td> Vector Laboratories </td><td> BK-3000 </td></tr><tr><td> L15 </td><td> Biotinyliertes Sophora Japonica Agglutinin </td><td> SJA </td><td> Vector Laboratories </td><td> BK-2000 </td></tr><tr><td> L16 </td><td> Biotinyliertes Sojabohnen Agglutinin </td><td> SBA </td><td> Vector Laboratories </td><td> BK-1000 </td></tr><tr><td> L17 </td><td> Biotinyliertes Solanum tuberosum (Kartoffel) Lektin </td><td> STL </td><td> Vector Laboratories </td><td> BK-3000 </td></tr><tr><td> L18 </td><td> Biotinyliertes Griffonia (Bandeiraea) simplicifolia Lektin I </td><td> GSL ich </td><td> Vector Laboratories </td><td> BK-2000 </td></tr><tr><td> L19 </td><td> Biotinylierte Vicia villosa-Lectin </td><td> VVL </td><td> Vector Laboratories </td><td> BK-2000 </td></tr><tr><td> L20 </td><td> Biotinyliertes Lycopersicon esculentum (Tomate) Lektin </td><td> UEG </td><td> Vector Laboratories </td><td> BK-3000 </td></tr><tr><td> L21 </td><td> Biotinyliertes Ulex europaeus Agglutinin I </td><td> UEA I </td><td> Vector Laboratories </td><td> BK-1000 </td></tr><tr><td> L22 </td><td> Biotinyliertes Jacalin </td><td> Jacalin </td><td> Vector Laboratories </td><td> BK-3000 </td></tr><tr><td> A1 </td><td> Ziegen-F (ab &#39;) 2 Fragment Anti-Human-IgM, Antikörper Fc5μ </td><td> IgM </td><td> Jackson Immuno Research </td><td> 109-006-129 </td></tr><tr><td> A2 </td><td> Esel F (ab &#39;) 2 Frag Anti-Human-IgG (H + L) einkörper- </td><td> AB1 </td><td> Jackson Immuno Research </td><td> 709-006-149 </td></tr><tr><td> A3 </td><td> Maus Anti-Human-IgG F (ab &#39;) 2-Antikörpers </td><td> AB3 </td><td> Jackson Immuno Research </td><td> 209-005-097 </td></tr><tr><td> A4 </td><td> Anti-Human-Alpha-2-Makroglobulin polyklonalen Antikörper </td><td> A2M </td><td> GeneTex </td><td> GTX62924 </td></tr><tr><td> A5 </td><td> Kaninchen anti-Human-alpha-1-Antitrypsin polyklonaler Antikörper </td><td> A1AT </td><td> Lee Biosiences </td><td> CA1T-80A </td></tr><tr><td> A6 </td><td> Maus Anti-Human-alpha-1-Antitrypsin monoklonalen Antikörper </td><td> A1AT </td><td> Sigma Aldrich </td><td> SAB4200198 </td></tr><tr><td> A7 </td><td> Kaninchen anti-Human-alpha-1-Antitrypsin polyklonaler Antikörper </td><td> HANDELN </td><td> NeoMarkers </td><td> RB-367-A1 </td></tr><tr><td> A8 </td><td> Kaninchen anti-humanAlpha-1-Antichymotrypsin polyklonaler Antikörper </td><td> HANDELN </td><td> Fisher Scientific </td><td> RB9213R7 </td></tr><tr><td> A9 </td><td> Maus Anti-Human-Transferrin monoklonalen Antikörper </td><td> Transferrin </td><td> GeneTex </td><td> GTX101035 </td></tr><tr><td> A10 </td><td> Kaninchen anti-Human-Transferrin polyklonaler Antikörper </td><td> Transferrin </td><td> GeneTex </td><td> GTX77130 </td></tr><tr><td> A11 </td><td> Anti-Human-Apolipoprotein J polyklonaler Antikörper </td><td> ApoJ </td><td> Abcam </td><td> ab7610 </td></tr><tr><td> A12 </td><td> Maus Anti-Human-GP73 monoklonalen Antikörper </td><td> GP73 </td><td> Abbott </td><td> 14H4-23 </td></tr><tr><td> A13 </td><td> Maus Anti-Human-GP73 monoklonalen Antikörper </td><td> GP73 </td><td> Santa Cruz Biotechnology INC </td><td> sc-101275 </td></tr><tr><td> A14 </td><td> Kaninchen anti-human alpha-1 fetoprotein polyklonaler Antikörper </td><td> AFP </td><td> Genway </td><td> GWB-41C966 </td></tr><tr><td> A15 </td><td> Maus Anti-Human-alpha-1 Fetoprotein monoklonalen Antikörper </td><td> AFP </td><td> Fitzgerald </td><td> 10-A05A </td></tr><tr><td> A16 </td><td> Maus Anti-Human-Hämopexin monoklonalen Antikörper </td><td> Hämopexin </td><td> Assaypro </td><td> 60190-05011 </td></tr><tr><td> A17 </td><td> Maus Anti-Human-Glypican-3 (1G12) monoklonaler Antikörper </td><td> GPL3 </td><td> Santa Cruz Bio </td><td> sc-65443 </td></tr><tr><td> A18 </td><td> Maus Anti-Human-Kininogen (LMW) monoklonaler Antikörper </td><td> Kininogen </td><td> Assaypro </td><td> 20333-05011 </td></tr><tr><td> A19 </td><td> Kaninchen anti-Human-MMP-21 monoklonalen Antikörpers </td><td> MMP21 </td><td> Epitomic </td><td> 1955-1 </td></tr><tr><td> A20 </td><td> Maus Anti-Human-CEACAM-1-monoklonalen Antiköry </td><td> CEACAM </td><td> R &amp; D Systems </td><td> MAB1180 </td></tr><tr><td> A21 </td><td> Ratten-Anti-Human-DPPIV/CD26 monoklonalen Antikörper </td><td> DPPIV </td><td> R &amp; D Systems </td><td> MAB22441 </td></tr><tr><td> A22 </td><td> Maus Anti-Human-PIVKA-II-monoklonalen Antikörpers </td><td> PIVICA </td><td> Kristall-chem </td><td> 8040 </td></tr><tr><td> A23 </td><td> Maus anti-carcinoembryonales Antigen </td><td> CEA </td><td> US biologischen </td><td> C1300 </td></tr><tr><td> A24 </td><td> Maus anti-CA125 Cancer Antigen </td><td> CA125 </td><td> US biologischen </td><td> C0050-01D </td></tr><tr><td> A25 </td><td> Maus anti-CA19-9 Cancer Antigen </td><td> CA19-9 </td><td> US biologischen </td><td> C0075-18 </td></tr><tr><td> A26 </td><td> Maus Anti-Lewis-x monoklonalen Antikörper </td><td> Lewis-X </td><td> Calbiochem </td><td> 434631 </td></tr><tr><td> Bio </td><td> Biotinyliertes BSA (positive Kontrolle) </td><td> Bio </td><td> Hausgemachte </td><td> N / A </td></tr></tbody></table> Tabelle 1. Liste der Lektine und Antikörper in diesem Protokoll verwendet. <table border="1"><tbody><tr><td> Name des Reagenzes s / Ausrüstungen </td><td> Firma </td><td> Katalog-Nummer </td></tr><tr><td> Berührungslose Microarrayer </td><td> BioDot Inc </td><td> sciFLEXARRAYER </td></tr><tr><td> 384 Mikroplatte </td><td> Fischer </td><td> 14-230-243 </td></tr><tr><td> FoodSaver </td><td> FoodSaver </td><td> V3835 </td></tr><tr><td> Ultradünne Nitrocellulose Coate Microarray-Slides </td><td> Gentel </td><td> PATH </td></tr><tr><td> Slide Imprinter (optional) </td><td> Das Gel Unternehmen </td><td> WSP60-1 </td></tr><tr><td> Shaker </td><td> Fischer </td><td> 15-453-211 </td></tr><tr><td> Zentrifugieren </td><td> Eppendorf </td><td> 5804 000.013 </td></tr><tr><td> Slide Waschbecken / Glaszylinder, Schale mit Wechselrahmen </td><td> Fischer </td><td> 08-812 </td></tr><tr><td> Slide Inkubationskammer / Objektträger-Box </td><td> Fischer </td><td> 03-448-5 </td></tr><tr><td> Brij 35, 30 w / v% igen Lösung in Wasser </td><td> Acros Organics </td><td> AC32958-0025 </td></tr><tr><td> Tween-20 </td><td> Fischer </td><td> P337-100 </td></tr><tr><td> Natriumperiodat (NaIO 4) </td><td> Sigma </td><td> 311448 </td></tr><tr><td> L-Glutaminsäure-γ-hydrazid </td><td> Sigma </td><td> G-7257 </td></tr><tr><td> Natriumacetat wasserfrei (CH 3 COONa) </td><td> Sigma </td><td> S2889 </td></tr><tr><td> Rinderserumalbumin (BSA) </td><td> Lampire Biologische Labs </td> &lt;td&gt; 7500804 </td></tr><tr><td> Phosphatgepufferte Kochsalzlösung (PBS) (10X) </td><td> Scientific Denville </td><td> CP4390-48 </td></tr><tr><td> DyLight 549 konjugierten NeutrAvidin </td><td> Thermo </td><td> 22837 </td></tr><tr><td> Protease Inhibitor Cocktail Tablets </td><td> Roche </td><td> 4693159001 </td></tr><tr><td> ChromPure Human-IgG, Fc-Fragment </td><td> Jackson Immunoresearch </td><td> 009-000-008 </td></tr><tr><td> ChromPure Human-IgG, ganze Molekül </td><td> Jackson Immunoresearch </td><td> 009-000-003 </td></tr><tr><td> ChromPure Maus-IgG, ganze Molekül </td><td> Jackson Immunoresearch </td><td> 015-000-003 </td></tr><tr><td> ChromPure Mouse IgG, Fc-Fragment </td><td> Jackson Immunoresearch </td><td> 015-000-008 </td></tr><tr><td> ChromPure Rabbit IgG, ganze Molekül </td><td> Jackson Immunoresearch </td><td> 011-000-003 </td></tr><tr><td> ChromPure Donkey IgG, ganze Molekül </td><td> Jackson Immunoresearch </td><td> 017-000-003 </td></tr><tr><td> Microarray Scanner </td><td> Tecan </td><td> LS Reloaded </td></tr></tbody></table> Tabelle 2. Liste der Geräte und Reagenzien in diesem Protokoll verwendet.

chemisch-antikörper blockiert microarray für multiplex-high-throughput-profiling von spezifischen protein-glykosylierung bei complex samples

Chemically-blocked Antibody Microarray for Multiplexed High-throughput Profiling of Specific Protein Glycosylation in Complex Samples

In dieser Studie beschreiben wir ein effektives Protokoll für die Verwendung eines multiplexierten, hochdurchsatzfähigen Antikörper-Mikroarrays mit der Detektion glykanbindender Proteine, das eine Glykosylierungsprofilerstellung für spezifische Proteine ermöglicht. Die Glykosylierung von Proteinen ist die häufigste posttranslationale Modifikation, die an Proteinen vorkommt, und führt zu vielfältigen Veränderungen der physikalischen, chemischen und biologischen Eigenschaften von Proteinen. Da die Glykosylierungsmaschinerie besonders anfällig für Krankheitsverläufe und maligne Transformationen ist, wurde abnormale Glykosylierung als Biomarker für die Früherkennung von Krebs und anderen Erkrankungen anerkannt. Aktuelle Methoden zur Untersuchung der Protein-Glykosylierung sind jedoch meist zu kompliziert oder zu teuer für den Einsatz in den meisten normalen Labor- oder klinischen Umgebungen, weshalb eine praktischere Methode benötigt wird. Das hier beschriebene neue Protokoll nutzt einen chemisch blockierten Antikörper-Mikroarray mit der Detektion glykanbindender Proteine (GBPs) und reduziert deutlich den Zeitaufwand, die Kosten sowie den Bedarf an Laborausrüstung zur Untersuchung der Protein-Glykosylierung. Bei dieser Methode werden mehrere immobilisierte, glykoproteinspezifische Antikörper direkt auf die Mikroarray-Objektträger aufgebracht, wobei die N-Glykane auf den Antikörpern blockiert sind. Die blockierten, immobilisierten, glykoproteinspezifischen Antikörper können Glykoproteine aus einer komplexen Probe, die direkt auf die Mikroarray-Objektträger aufgetragen wird, gezielt erfassen und isolieren. Die Glykandetektion kann anschließend durch Zugabe biotinylierter Lektine und anderer GBPs auf den Mikroarray-Objektträger erfolgen, wobei die Bindungsniveaus mittels Dylight 549-Streptavidin bestimmt werden können. Durch die Verwendung eines Antikörper-Panels und die Probenahme mit mehreren biotinylierten Lektinen ermöglicht diese Methode die Erstellung eines effektiven Glykosylierungsprofils der verschiedenen Proteine, die in einer gegebenen humanen oder tierischen Probe enthalten sind.
Einleitung
Die Glykosylierung von Proteinen, die die häufigste posttranslationale Modifikation von Proteinen darstellt, verändert die physikalischen, chemischen und biologischen Eigenschaften eines Proteins und spielt eine grundlegende Rolle in verschiedenen biologischen Prozessen.1-6Da die Glykosylierungsmaschinerie besonders anfällig für den Krankheitsverlauf und maligne Transformationen ist, wurde eine abnormale Glykosylierung als Biomarker für die Früherkennung von Krebs und anderen Erkrankungen anerkannt. 7-12. Tatsächlich sind die meisten derzeitigen Krebsbiomarker, wie beispielsweise die L3-Fraktion von α-1-Fetoprotein (AFP) beim hepatozellulären Karzinom 13-15und CA199 für Pankreaskrebs 16, 17 sind alle abnormen Glykan-Moietäten an Glykoproteinen. Methoden zur Untersuchung der Protein-Glykosylierung waren jedoch kompliziert und nicht für den routinemäßigen Einsatz in Labor- und klinischen Umgebungen geeignet. Chen et al. hat kürzlich ein chemisch blockiertes Antikörper-Mikroarray mit einer Detektionsmethode mittels glykanbindendem Protein (GBP) entwickelt, um die Glykosylierung nativer Glykoproteine in komplexen Proben hochdurchsatzfähig und multiplexiert zu profilieren 18. Bei dieser affinitätsbasierten Mikroarray-Methode erfassen mehrere immobilisierte, glykoproteinspezifische Antikörper und isolieren Glykoproteine direkt auf dem Mikroarray-Slide aus der komplexen Mischung, und die Glykane an jedem einzelnen erfassten Protein werden mittels GBPs gemessen. Da alle normalen Antikörper N-Glykane enthalten, die von den meisten GBPs erkannt werden könnten, ist der entscheidende Schritt dieser Methode die chemische Blockierung der Glykane auf den Antikörpern, um eine Bindung an GBP zu verhindern. In dem Verfahren wird die cisDie Diolgruppen der Glykane auf den Antikörpern wurden zunächst durch Verwendung von NaIO4 zu Aldehydgruppen oxidiert.4 in Natriumacetatpuffer unter Lichtausschluss. Die Aldehydgruppen wurden anschließend an die Hydrazidgruppe eines Crosslinkers, 4-(4-N-Maleimidphenyl)butyrinsäure-Hydrazid-HCl (MPBH), gekoppelt, gefolgt von der Konjugation eines Dipeptids, Cys-Gly, an die Maleimidgruppe des MPBH. Dadurch wurden die cis-Diolgruppen der Glykane von Antikörpern in voluminöse, nicht hydroxylierte Gruppen umgewandelt, die die Bindung von Lektinen und anderen GBPs an die Captur-Antikörper behinderten. Dieses Blockierverfahren sorgt dafür, dass GBPs und Lektine ausschließlich an die Glykane der immobilisierten Proteine binden. Nach dieser chemischen Blockade wurden Serumproben mit dem Antikörpermikroarray inkubiert, gefolgt von der Detektion der Glykane mittels verschiedener biotinylierter Lektine und GBPs und der Visualisierung mit Cy3-Streptavidin. Die parallele Verwendung eines Antikörperpanels und der Untersuchung mit mehreren Lektinen ermöglicht es, differenzierte Glykosylierungsprofile mehrerer Proteine in einer gegebenen Probe zu erhalten. 18-20Diese Methode wurde bereits erfolgreich in mehreren verschiedenen Laboren angewandt. 1, 7, 13, 19-31Allerdings beeinträchtigen die Instabilität von MPBH und Cys-Gly sowie das komplizierte und zeitaufwendige Verfahren dieser Methode die Reproduzierbarkeit, Wirksamkeit und Effizienz. In diesem neuen Protokoll haben wir sowohl MPBH als auch Cys-Gly durch ein wesentlich stabileres Reagenz, Glutaminsäurehydrazid (Glu-Hydrazid), ersetzt, wodurch die Reproduzierbarkeit der Methode deutlich verbessert wurde und das gesamte Verfahren vereinfacht und verkürzt wurde, sodass es innerhalb eines Arbeitstages abgeschlossen werden kann. In diesem neuen Protokoll beschreiben wir detailliert den Ablauf, der von normalen Laboren leicht für routinemäßige Untersuchungen der Protein-Glykosylierung übernommen werden kann, sowie die Techniken, die notwendig sind, um reproduzierbare und wiederholbare Ergebnisse zu erzielen.

In dieser Studie beschreiben wir ein verbessertes Protokoll für eine Multiplex-Hochdurchsatz-Antikörper Mikroarray mit Lektin Detektionsverfahren, das in der Glykosylierung Profilierung spezifischer Proteine ​​verwendet werden können. Dieses Protokoll bietet zuverlässige neue Reagenzien und reduziert den Zeitaufwand, Kosten und Laborgeräte Anforderungen an das vorherige Verfahren verglichen.

Chemisch-Antikörper blockiert Microarray für Multiplex-High-Throughput-Profiling von spezifischen Protein-Glykosylierung bei Complex Samples

In dieser Studie beschreiben wir ein effektives Protokoll für die Verwendung in einem multiplexed High-Throughput-Antikörper-Microarray mit Nachweis von glykanbindenden Proteinen, das ...

Dieser Videoartikel beschreibt ein Verfahren zur Gewinnung von Glykosylierungsprofilen von 20 verschiedenen Glykoproteinen in einer Serumprobe von Patienten mit hepatozellulärem Karzinom unter Verwendung eines chemisch blockierten Antikörper-Mikroarrays. Zunächst werden spezifische Antikörper direkt auf Mikroarray-Objektträger aufgedruckt, und die Glykane der Antikörper werden blockiert, um eine Bindung von Lektinen zu verhindern. Wenn Patientenserumproben aufgebracht werden, werden die Glykoproteine aus der Probe durch die Antikörper gebunden. Anschließend werden biotinylierte Glykan-bindende Proteine hinzugefügt, um die Glykane nachzuweisen, und ein doppelt konjugiertes Neutravidin wird zugegeben, um die biotinylierten Lektine zu markieren.Die Microarray-Platte wird anschließend gescannt, um die Fluoreszenz zu detektieren, und die Analyse der resultierenden Daten offenbart die Glykosylierungsprofile der Probeproteine. Diese Technik weist mehrere Vorteile gegenüber etablierten Methoden wie der HPLC auf. Die Methode ermöglicht die Detektion einzelner Glykoproteine in ihrem nativen Zustand.Es ist schneller und einfacher, Glykosylierungsveränderungen bei mehreren Proteinen gleichzeit

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Research

Forschung

JoVE Journal

Biology

Biologie

Dieses Video demonstriert die gedruckte Glykan-Array-Technologie zur Analyse von zirkulierenden Anti-Glykan-Antikörpern in Mausserum. Die Antikörper im Serum interagieren mit spezifischen Glykanen auf dem Chip, was durch Immunfärbung und anschließende Fluoreszenzuntersuchung bestätigt wird.

Nachweis von zirkulierenden Anti-Glykan-Antikörpern mit einem gedruckten Glykan-Array

Dieses Video demonstriert eine Technik, die die Peptid-Microarray-Technologie anwendet, um die Spezifität von Antikörpern zu profilieren, die posttranslationale Modifikationen (PTMs) auf Histonpeptiden erkennen. Ein Microarray-Objektträger, der immobilisierte Fluorophor-konjugierte Histonpeptide mit bekannten PTM-Kombinationen enthält, wird mit Ziel-PTM-spezifischen Antikörpern behandelt. Dieser Prozess hilft dabei, die Spezifität des Antikörpers für das Ziel und seine potenzielle...

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Verwendung von Protein-Mikroarrays enthält fast die gesamte S. cerevisiae Proteom ist für schnelle unvoreingenommene Abfragetausende von Protein-Protein-Wechselwirkungen in parallel sondiert. Dieses Verfahren kann für die Protein-Kleinmolekül, posttranslationale Modifikation und andere Assays mit hohem Durchsatz verwendet werden.

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Dieses Protokoll beschreibt die Herstellung eines großflächigen, gemultiplexten zweidimensionalen DNA oder Antikörperarray, mit potentiellen Anwendungen in der Zellsignal Studien und Biomarkern.

Strömungsmuster Guided Herstellung von High-Density-Barcode Antikörper Microarray

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Profiling Anti-Neu5Gc IgG in menschlichen Seren mit einem Sialoglycan-Microarray-Assay

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Gedruckte Glycan Array: Eine sensible Technik für die Analyse des Repertoires der zirkulierenden Antikörper Anti-Kohlenhydrat in Kleintiere

Hier präsentieren wir ein Protokoll zum Bildschirm extrazelluläre Protein Microarrays zur Identifizierung von Roman-Rezeptor-Ligand-Interaktionen in hohem Durchsatz. Wir beschreiben auch eine Methode zur Erkennung von transienten Proteinprotein Interaktionen zu verbessern mithilfe von Protein-Microbead-komplexe.

Extrazelluläre Protein-Microarray-Technologie für hohen Durchsatz-Erkennung von geringe Affinität-Rezeptor-Ligand-Wechselwirkungen

Ein detailliertes Protokoll zur Reinigung und anschließenden Analyse eines monoklonalen Antikörpers aus geernteter Zellkulturflüssigkeit (HCCF) automatisierter Mikrobioreaktoren wurde beschrieben. Die Verwendung von Analysen zur Bestimmung kritischer Qualitätsattribute (CQAs) und zur Maximierung des begrenzten Stichprobenvolumens zum Extrahieren wichtiger Informationen wird ebenfalls vorgestellt.

Reinigung und Analyse eines monoklonalen Antikörpers aus chinesischen Hamster-Ovarialzellen mit einem automatisierten Mikrobioreaktorsystem

Das Microarray-Polymer-Profiling (MAPP) ist eine Hochdurchsatztechnik für die Analyse der Zusammensetzung von Glykanen in biologischen Proben.

Microarray-Polymer-Profiling (MAPP) für die Hochdurchsatz-Glykananalyse

Zuvor wurde ein System zur automatisierten und schnellen Analyse von Glykanen auf Proteinen entwickelt. In diesem Artikel wird das Protokoll für die "glykoqualitative Analyse" vorgestellt, das für ein breites Spektrum von Anwendern optimiert ist, z. B. für diejenigen, die sich mit der Analyse von Glykanstrukturen in Biopharmazeutika und anderen Glykokonjugatmaterialien beschäftigen.

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Erfahren Sie ein verbessertes Protokoll für das Glykosylierungsprofiling spezifischer Proteine mittels chemisch blockiertem Antikörper-Microarray. Diese Methode reduziert Zeit, Kosten und Geräteanforderungen erheblich.

Chemisch-Antikörper blockiert Microarray für Multiplex-High-Throughput-Profiling von spezifischen Protein-Glykosylierung bei Complex Samples (Video) | JoVE Journal

Chemisch-Antikörper blockiert Microarray für Multiplex-High-Throughput-Profiling von spezifischen Protein-Glykosylierung bei Complex Samples

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