Stimulierung der Differenzierung von Nervenstammzellen durch Behandlung mit kaltem, atmosphärischem Plasma

Beginnen Sie mit Nervenstammzellen, die auf einem mit extrazellulärer Matrix beschichteten Deckglas in einem geeigneten Differenzierungsmedium kultiviert werden.

Nehmen Sie eine Spritze, die ein kaltes Plasma enthält, d. h. einen Materiezustand, der verschiedene reaktive Komponenten enthält, darunter UV-Strahlung und geladene Teilchen.

Positionieren Sie die Düse der Plasmaspritze in einer bestimmten Höhe über der Nervenzellkultur.

Starten Sie den Plasmastrahl.

Das Plasma interagiert mit den Nervenstammzellen und aktiviert sie.

Entfernen Sie den alten Nährboden. Fügen Sie ein frisches Nährmedium hinzu und inkubieren Sie.

Im Laufe der Zeit produzieren die aktivierten Nervenstammzellen Fortsätze.

Entsorgen Sie das Medium.

Unter einem inversen Phasenkontrastlichtmikroskop deutet das Vorhandensein von länglichen Projektionen auf den Zellen, die denen einer Nervenzelle ähneln, auf eine Differenzierung hin.

Um die neuralen Stammzellen mit Plasma zu behandeln, stellen Sie den Abstand zwischen der Spritzendüse und der ersten Vertiefung der Zellen auf 15 Millimeter ein. Ersetzen Sie die Überstände in den neuralen Stammzellkulturen durch 800 Mikroliter frisches Differenzierungsmedium und platzieren Sie die Platte unter den Plasmastrahlen.

Stellen Sie sicher, dass die Spritzendüse über der Mitte jeder Vertiefung befestigt ist, und erstellen Sie drei Vertiefungen mit Plasma für 60 Sekunden pro Behandlung und drei Vertiefungen mit 1 % Helium und Sauerstoffgas für 60 Sekunden pro Behandlung, wobei drei Vertiefungen als Kontrollen unbehandelt bleiben. Ersetzen Sie dann die Überstände durch einen Milliliter frisches Differenzierungsmedium und stellen Sie die Zellen für sechs Tage in den Inkubator zurück. Überprüfen Sie täglich den Differenzierungsstatus der verschiedenen Gruppen unter einem inversen Phasenkontrastlichtmikroskop.

Lassen Sie die Zellen nach der Behandlung etwa eine Stunde lang in dem konditionierten Medium vollständig äquilibrieren, bevor Sie den Überstand durch ein frisches Differenzierungsmedium ersetzen.