Untersuchung der Alpha-Synuclein-Akkumulation in primären embryonalen Dopamin-Neuronen der Maus

Nehmen Sie Mikroinselkulturen von primären embryonalen Dopaminneuronen der Maus in einer Multi-Well-Platte, die Medien enthält.

Diese Neuronen werden mit vorgeformten Fibrillen (PFFs) vorbehandelt – fehlgefalteten und aggregierten Formen des Alpha-Synuclein-Proteins.

PFFs fungieren als Seeds, die eine weitere Fehlfaltung und Oligomerisierung von endogenem alpha-Synuclein auslösen und phosphorylierte alpha-Synuclein-Fibrillen bilden. Diese Fibrillen bilden schließlich Lewy-Körper.

Ersetzen Sie das Medium durch ein Fixiermittel, um die Zellmorphologie zu erhalten.

Waschen Sie die Zellen mit Puffer.

Führen Sie einen detergenzienhaltigen Puffer ein, um die Zellmembranen zu permeabilisieren.

Fügen Sie eine Blockierungslösung hinzu, um eine unspezifische Antikörperbindung zu verhindern.

Fügen Sie primäre Antikörper hinzu, die auf phosphoryliertes Alpha-Synuclein und ein Referenzprotein abzielen, das ubiquitär in Dopamin-Neuronen exprimiert wird.

Waschen, um ungebundene Antikörper zu entfernen.

Einführung von Fluorophor-konjugierten Sekundärantikörpern, die auf die jeweiligen Primärantikörper abzielen.

Erneut waschen, um ungebundene Antikörper zu entfernen.

Fügen Sie einen DNA-bindenden F