Name: Erstellen Zweidimensionale Patterned Substrate für Protein-und Zell-Confinement (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-09-06T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 36 s
Description: Erfahren Sie die Herstellung zweidimensionaler Substrate zur kontrollierten Proteinadsorption und Zellwachstumsmusterung mittels Mikrokontaktdruck. Diese Methode ermöglicht präzise Untersuchungen zellulärer Verhaltensweisen.

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Wir möchten die gesamte Maurer Gruppe an der Washington University, deren kollektives Wissen hat dieses Protokoll möglich anzuerkennen. Die Finanzierung dieser Arbeit wird durch das National Institute of Mental Health (1R01MH085495) zur Verfügung gestellt.

1. Vorbereitung der Patterned Master (Abbildung 1) <ol><li> Zentrum der Silizium-Wafer auf dem Spin-Coater und spülen Sie die Wafer mit Aceton in der ersten Stufe des zweistufigen Spin-Programm in Tabelle 1. Das Aceton wird im zweiten Schritt des Spin-Programm hinterlässt eine saubere, trockene Wafer verdampfen. </li><li> Wenden Sie ca. 1 mL AZ9245 Fotolack / in (im Durchmesser) auf den Wafer-und Spin-Mantel mit den in Tabelle 1 beschrieben. </li><li> Soft-backen der Fotolack beschichtete Wafer bei 110 ° C für 2 m mit einem High-Uniformität Kochplatte. </li><li> Photopattern das Substrat entweder mit einem direkten Schreib-Photolithographie-System oder ein Mask Aligner und geeignete Maske. Masken können aus einer Reihe von kommerziellen Quellen bezogen werden. Darüber hinaus können Folien mit UV-absorbierenden Druckfarbe, mit Klebeband an eine optische flache, gedruckte verwendet, um Muster mit großen Zügen zu produzieren. </li><li> Entwickeln Sie die strukturierten Wafer in 1:2 400K Entwickler: Halbleiter-grade VE-Wasser für 1 m 45 s unter leichtem Schütteln. Gründlich mit Halbleiter-grade deionisiertem Wasser abspülen und mit einem Strom von Stickstoff (N 2) Gas. Pattern Entwicklung kann mit Hilfe eines Mikroskops mit einem UV-Filter sein. Wenn das Muster nicht vollständig entwickelt ist, kann der Wafer in die Entwicklungsländer für zusätzliche Zeit zurückgegeben werden. </li></ol> Hinweis: Für beste Ergebnisse Photostrukturierungsverfahren sollte in einem Reinraum durchgeführt werden. 2. Vorbereitung der PDMS-Stempel (Abbildung 2) <ol><li> Bereiten Sie eine 10:1 Gewichtsteile Harz: Härter Mischung aus Sylgard 182 (PDMS) und vollständig zu bedecken den Master (photostrukturierten Wafer) mit der Mischung in einem Einweg Petrischale. </li><li> De-gas die PDMS-bedeckten Master in einem Vakuumexsikkator bis keine Luftblasen mehr sichtbar sind und lassen Sie den Stempel, um in einem Ofen bei 65 ° C aushärten für 1,5 h. Vor dem Härten, ist es wichtig sicherzustellen, dass der Meister ist an der Unterseite der Schale, wie sie an der Oberfläche während der Entgasung Schritt ansteigen kann. </li><li> Schneiden Sie die PDMS-Stempel aus dem Master-und trimmen, um die richtige Größe. Bewahren Sie den Stempel in einen Behälter (Feature Seite nach oben), um sie vor Staub und Schmutz zu schützen. </li></ol> 3. Vorbereitung der Patterned Gold-Substrat (Abbildung 3) <ol><li> Bereiten 25 mm nicht. 1 Runde Deckgläser für die Metallabscheidung durch Behandlung mit Sauerstoff-Plasma für 10 m. Spülen Sie zweimal mit 18,2 MOhm entionisiertes Wasser durch zweimal mit Ethanol, Trocknen mit einem Strom von N 2-Gas zwischen jedem Schritt. </li><li> Mit einer Multi-Pocket-Elektronenstrahl-Abscheidung System, gefolgt Anzahlung 50 Å Titan von 150 Å Gold. Nicht vent des Verdampfers zwischen Abscheidung der Titan-Schicht und Goldschicht. Alternativ, gold-beschichtete Deckgläser aus einer Vielzahl von Anbietern erworben werden kann, ist es jedoch wichtig, dass die Metallschichten durch Elektronenstrahl-Verdampfung und nicht thermische Verdampfung vorbereitet sind. 11 vor Gebrauch: Wenn aus einer externen Quelle erworben haben, können Goldsubstraten durch Plasma-Oxidation oder "piranha" (. 30% H 2 O 2 7.03 Conc H 2 SO 4) gereinigt werden. </li></ol> Hinweis: "Piranha"-Lösung ist explosiv in der Gegenwart von organischen Verbindungen. <ol start="3"><li> Bereiten Sie die Stanz-Lösung, 10 mM Hexadecanthiol in absolutem Ethanol, und die Verfüllung Lösung, 1 mM Glykol-terminierten Thiol in absolutem Ethanol. </li><li> Spülen Sie den Stempel mit Ethanol und gründlich trocknen mit N 2-Gas. Bewerben Stanzen Lösung für die PDMS-Stempel tropfenweise bis zur vollständigen beschichtet. Trocknen Sie die Stempel gründlich mit N 2-Gas. Fahren Sie mit 5a oder 5b gegebenenfalls auf die Eigenschaften des PDMS-Stempel auf. </li><li><ol class="lalpha"><li> Drücken Sie den Stempel auf die Gold-Substrat und ermöglichen die Monoschicht für 15 bilden s. </li><li> Legen Sie die Gold-Substrat in eine Petrischale mit 18,2 MOhm entionisiertes Wasser, wodurch das Substrat eingetaucht ist. Drücken Sie den Stempel auf die Gold-Substrat und ermöglichen die Monoschicht für 15 bilden s. </li></ol></li><li> Spülen Sie den Stempel Substrat zweimal mit Ethanol, Trocknen mit N 2-Gas nach jedem Spülen und Ort des Substrats in einer Petrischale. </li><li> Abdeckung des Substrats mit Verfüllung Lösung und Dichtung die Schale mit Parafilm, um Verdunstung zu verhindern. </li><li> Lassen Sie den Hintergrund Monoschicht im Dunkeln für 12-14 h. Form </li><li> Entfernen Sie die gemusterten Deckglas aus der Verfüllung und spülen Sie zweimal mit Ethanol, Trocknen mit N 2-Gas nach jedem spülen. </li></ol> 4. Anwenden von Protein und Zellen, um das strukturierte Substrat <ol><li> Legen Sie die gemusterten Deckglas in einer kleinen Petrischale oder Zellkulturkammer und decken mit 500 ul zu 1 ml Dulbecco Phosphate Buffered Saline (DPBS). Die DPBS muss vollständig bedecken das Substrat während Protein Inkubation auch Protein Abdeckung zu gewährleisten. </li><li> Fügen Sie eine konzentrierte Lösung von Protein an die DPBS und mischen Sie die Lösung durch das Rohrting mehrmals. Inkubieren Sie die Protein-Mischung mit dem Substrat bei 37 ° C für 1 h. Endkonzentrationen für Laminin und Fibronektin sind in der Regel 12 ug / ml und 20 pg / ml. Protein kann mit einem Amin reaktiven Fluoreszenzfarbstoff markiert werden, um für die einfache Muster Visualisierung zu ermöglichen. Allerdings sollte markierten Proteins 1:1 gemischt mit unmarkiertem Protein-Protein Beschriftung kann mit biologischer Aktivität beeinträchtigt wird. </li><li> Nach der Inkubation spülen Sie das Substrat gründlich mit DPBS (4-5x), um ungebundene Protein zu entfernen, dabei nicht auf das Substrat trocken oder bringen Sie es durch die Luft-Wasser-Grenzfläche. Nach den ersten drei Spülungen, fügen Sie etwa 500 ul von kompletten Zellwachstum Medien zu einem nassen Untergrund zu erhalten. </li><li> Ersetzen Sie den Nährmedien verwendet werden, um das Substrat mit frischem Medium spülen. </li><li> Distanzieren und Zählen von Zellen für die Beschichtung auf das Substrat. Entweder dissoziiert primäre Zellen, wie Neuronen im Hippocampus oder immortalisierten Zelllinien, wie CHO-K1-Zellen, verwendet werden können. </li><li> Platte dissoziierten Zellen auf das Substrat. In der Regel 30 bis 200 Zellen / mm 2 verwendet werden. </li></ol> 5. Repräsentative Ergebnisse: <img src="/files/ftp_upload/3164/3164fig1.jpg" alt="Abbildung 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Abbildung 1"> Abbildung 1. Allgemeine schematische für die Photolithographie Vorbereitung eines strukturierten Master. In diesem Prozess wird ein Silizium-Wafer mit Aceton gereinigt, beschichtet mit Fotolack, ausgesetzt, um das Muster des Interesses, und das Muster entwickelt. <img src="/files/ftp_upload/3164/3164fig2.jpg" alt="Abbildung 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Abbildung 2"> Abbildung 2. Allgemeine schematische für PDMS-Stempel Vorbereitung. In diesem Prozess, der gemusterten Master mit Sylgard (10:1 Harz: Härter) abgedeckt ist, in einem Vakuum-Exsikkator, in einem Ofen bei 60 ° C gehärtet entgast und auf Maß geschnitten. <img src="/files/ftp_upload/3164/3164fig3.jpg" alt="Abbildung 3" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Abbildung 3"> Abbildung 3. Allgemeine schematische für Substrat Musterung. In diesem Prozess werden Glassubstrate mit Titan (50a) und Gold (150a) beschichtet mit einem Elektronenstrahl Verdampfer, durch Mikrokontaktdrucken Hexadecanthiol mit einem PDMS-Stempel gemustert, mit Glykol beendet Alkanthiole verfüllt und beschichtet mit fluoreszenzmarkierten Protein. <img src="/files/ftp_upload/3164/3164fig4.jpg" alt="Abbildung 4" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Abbildung 4"> Abbildung 4. Patterned-Master (A) und PDMS-Stempel (B) unter Verwendung der beschriebenen Methoden. Scale-Bars sind 100 um. <img src="/files/ftp_upload/3164/3164fig5.jpg" alt="Abbildung 5" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Abbildung 5"> Abbildung 5. Gemusterte SAMs visualisiert AlexaFluor 647-markiertem Fibronektin (A) und CHO-K1 Zellen Entbindung (B). Scale-Bars sind 100 um. <img src="/files/ftp_upload/3164/3164fig6.jpg" alt="Abbildung 6" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Abbildung 6"> Abbildung 6. Patterned Laminin ausgesät mit E18 Maus Hippocampus-Neuronen an 4 Tagen in vitro. AlexaFluor 350-konjugierten anti-Laminin-Antikörper ist für Muster-Visualisierung (A) verwendet und E18 Maus Hippocampus-Neuronen sind mit MitoTracker Red 580 (B) gefärbt. Scale-Bars sind 100 um. <img src="/files/ftp_upload/3164/3164fig7.jpg" alt="Abbildung 7" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Abbildung 7"> Abbildung 7. Potenzielle Fallstricke in strukturierten Substrat Vorbereitung visualisiert AlexaFluor 647-konjugierten Fibronektin Adsorption. (A) Unzureichende Durchmischung führt zu einer ungleichmäßigen Proteinadsorption. (B) Ungleiche Anwendung von Druck beim Stanzen führt zu teilweiser Patten übertragen. (C) Übermäßiger Druck beim Stanzen kann zum Zusammenbruch führen Stempel. (D) Belichtung der strukturierten Oberfläche, die Luft-Wasser-Schnittstelle beim Spülen kann im Hintergrund Proteinadsorption führen. Scale-Bars sind 100 um. <img src="/files/ftp_upload/3164/3164fig8.jpg" alt="Abbildung 8" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Abbildung 8"> Abbildung 8. Submerged Strukturierung kann Muster mit kleinen Features, die nur schwer mit herkömmlichen Mikrokontaktdrucken in Luft gedruckt werden produzieren. Bilder (A) und (B) zeigen unterschiedliche Regionen des gleichen Muster, mit dem gleichen PDMS-Stempel in Luft (A) oder VE-Wasser (B) gedruckt. 10 um-breite Unterstützung Linien, die das Muster (hinzugefügt, um zu verhindern Stempel Kollaps) umgeben, sind in (A), aber die kleineren dot Funktionen wie in (B) nicht gesehen wird. Dies zeigt, dass der Druck in der Luft eignet sich gut für größere Features, aber der Druckvorgang in Wasser kann es notwendig sein für Muster mit kleineren Features. Scale-Bars sind 20 um. <table border="1"><tbody><tr><td> Zyklus </td><td> Beschleunigung (rpm / s) </td><td> Endgeschwindigkeit (rpm) </td><td> Time (s) </td></tr><tr><td> 1 </td><td> 500 </td><td> 1000 </td><td> 5 </td></tr><tr><td> 2 </td><td> 3800 </td><td> 3800 </td><td> 30 </td></tr></tbody></table> Tabelle 1.Zwei-Takt-Spin-Programm verwendet, um eine 4,5 um dicke Beschichtung von AZ9245 auf einem Silizium-Wafer zu erzeugen. Zur Vorbereitung PDMS-Stempel für die Bildung von gemusterten Substrate, ein Meister in Fotolack wird zunächst hergestellt (Abb. 1 und 4A). Der Master ist der Kehrwert des Stempels und erstellt entweder mit einem direkten Schreib-Lithographie-System oder ein Mask Aligner. Wenn eine positive Photoresist, wie AZ9245, für Master-Produktion verwendet wird, wird der Resist-beschichteten Wafer, um Licht mit dem gleichen Muster, die auf das endgültige Substrat erscheint ausgesetzt. Zwar ist es nicht immer möglich ist, ist berichtet worden, dass die ideale Seitenverhältnis (Strukturgröße zu Dicke widerstehen) für PDMS-Stempel Meister 1:2 ist. 13 Wir haben festgestellt, dass Seitenverhältnisse von 1:40 möglich sind, abhängig von der Natur des Musters. AZ9245 beschichteten Silizium-Wafern unter den hier beschriebenen Bedingungen geben Photoresist mit einer nominalen Dicke von 4,5 um. Wir haben festgestellt, dass diese Dicke AZ9245 verwendet werden, um PDMS Meister mit Features von&gt; 100 um bis 2 um zu produzieren. PDMS-Stempel sind aus Sylgard 182 (oder Sylgard 184) mit dem Meister aus Fotolack (Abbildung 2) hergestellt gegossen. Photoresist Meister kann mehrfach verwendet werden, um viele Kopien der gleichen Marke zu schaffen. Nach dem Aushärten des PDMS, sind Briefmarken aus der Master mit einer Rasierklinge und der daraus resultierenden Stempel kann unter dem Mikroskop sichtbar gemacht, indem Stempel-Funktion unten auf einem Deckglas (Abbildung 4B) entfernt Proper Stanzen ergibt sich eine scharfe, klare Proteinmuster, die durch Anwendung von fluoreszenzmarkierten Protein (Abb. 3 und 5) sichtbar gemacht werden können. Alternativ kann die Immunhistochemie verwendet werden, um das Proteinmuster nach Zellfixierung (Abbildung 6) zu visualisieren. Das Wachstum der Zellen ist gut mit dem Protein-Muster für beide immortalisierten Zelllinien und Primärzellen (Abbildungen 5 und 6) beschränkt. Während diese Technik leicht zu beherrschen ist, können mehrere gemeinsame Probleme auftreten. Die Anwendung von Protein ohne ausreichende Durchmischung der konzentrierten Proteinlösung in die DPBS kann zu einer ungleichmäßigen Protein-Muster (Abb. 7A) führen. Unsachgemäße Stanzen kann zu einer teilweisen Pattern-Transfer oder Stempel Zusammenbruch (7B-C) führen. Darüber hinaus Freilegung der strukturierten Substrat mit adsorbiertem Protein an der Luft der Monoschicht verursachen verringerte Widerstand in den Hintergrund (Abbildung 7D) stören können. Patterns von sehr kleinen Features (&lt;5 um) und hohen Aspektverhältnissen umfasste erfordern oft den Einsatz von getauchten Mikrokontaktdrucken. In diesem Verfahren (3.5b) Wasser als Barriere zur Verhinderung von Ablagerungen auf dem Substrat außerhalb der Muster (Abbildung 8) Hexadecanthiol verwendet. 14

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</ol>

Keine Interessenskonflikte erklärt.

Eine Reihe von Fragen kann in die lithographische Herstellung des Masters für PDMS-Stempel-Erstellung verwendet entstehen. Unterbelichtung der Resist beschichteten Wafer Ergebnisse in verschwommen und undeutlich Muster und Überbelichtung der Resist beschichteten Wafer Ergebnisse in einer vergrößerten oder fehlende Funktionen. Im Allgemeinen sind die Meister mit großen Strukturgrößen (&gt; 10 um) relativ leicht zu Muster und entwickeln, während Meister mit kleineren bietet umfangreiche Optimierung der Photostrukturierung...

<table border="1"><tbody><tr><th> Name des Reagenzes </th><th> Firma </th><th> Katalog-Nummer </th><th> Kommentare (optional) </th></tr><tr><td> Silizium-Wafer </td><td> Wafer Reclaim Dienstleistungen </td><td></td><td> 2 Zoll </td></tr><tr><td> Spin Coater / Heizplatte </td><td> Brewer Science </td><td> Cee 200CB Spin-Bake-System </td><td></td></tr><tr><td> AZ9245 Fotolack </td><td> Mays Chemical Company </td><td> 105880034-1160 </td><td></td></tr><tr><td> Direct-schreiben Photolithographie-System </td><td> Microtech srl </td><td> LW325 LaserWriter-System </td><td></td></tr><tr><td> Mask Aligner </td><td> HTG </td><td> 3HR </td><td></td></tr><tr><td> AZ 400K Entwickler </td><td> Mays Chemical Company </td><td> 105880018-1160 </td><td></td></tr><tr><td> Sylgard 182 Silikon-Elastomer-Kit </td><td> Dow Corning </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 25 mm nicht. 1 Runde Deckgläser </td><td> VWR </td><td> 16004-310 </td><td></td></tr><tr><td> Plasma Oxidizer </td><td> Diener </td><td> Femto </td><td></td></tr><tr><td> Titanium Stücke Kamis </td><td> Incorporated </td><td></td><td> 99,95% reinem </td></tr><tr><td> Gold-Pellets </td><td> Kamis Incorporated </td><td></td><td> 99,999% reines </td></tr><tr><td> Elektronenstrahl-Verdampfer </td><td> Kurt J. Lesker </td><td> PVD 75 Thin Film Deposition System </td><td> mit Elektronenstrahl-Zubehör </td></tr><tr><td> Hexadecanthiol </td><td> Alfa Aesar </td><td> A11362 </td><td></td></tr><tr><td> 1-mercaptoundec-11-yl) Tetra (Ethylenglykol) </td><td> Sigma Aldrich </td><td> 674508 </td><td></td></tr><tr><td> Ethanol </td><td> Pharmco-aaper </td><td> 111000200 </td><td> 200 Proof, absolute </td></tr><tr><td> Parafilm </td><td> VWR </td><td> 52858-000 </td><td></td></tr><tr><td> DPBS </td><td> VWR </td><td> 4500-434 </td><td> Ohne Kalzium und Magnesium </td></tr><tr><td> Maus Laminin I </td><td> VWR </td><td> 95036-762 </td><td></td></tr><tr><td> Humanem Plasma Fibronectin </td><td> Invitrogen </td><td> 33016-015 </td><td></td></tr><tr><td> AlexaFluor ® 647 Carbonsäure, Succinimidylester </td><td> Invitrogen </td><td> A-20006 </td><td></td></tr><tr><td> MitoTracker Red 580 </td><td> Invitrogen </td><td> M22425 </td><td></td></tr><tr><td> AlexaFluor ® 350 Carbonsäure, Succinimidylester </td><td> Invitrogen </td><td> A-10168 </td><td></td></tr><tr><td> Anti-Laminin-Antikörper </td><td> Fisher Scientific </td><td> AB2034MI </td><td></td></tr></tbody></table>

erstellen zweidimensionale patterned substrate für protein-und zell-confinement

Creating Two-Dimensional Patterned Substrates for Protein and Cell Confinement

Mikrokontaktdruck bietet eine schnelle, reproduzierbare Methode für die Schaffung von gut definierten Muster Substraten. 1 Während Mikrokontaktdrucken kann zur direkten Drucken einer großen Anzahl von Molekülen, einschließlich Proteinen, 2 DNA, 3 und Silane, 4 die Bildung von Selbst zu sein Monoschichten (SAMs) aus langkettigen Alkan Thiolen auf Gold bietet eine einfache Möglichkeit, um Proteine ​​und Zellen in bestimmten Mustern mit Klebstoff und beständig Regionen beschränken. Diese Beschränkung kann zur Zellmorphologie zu kontrollieren und ist nützlich für die Prüfung einer Vielzahl von Fragen in Protein-und Zellbiologie. Hier beschreiben wir ein allgemeines Verfahren für die Schaffung von gut definierten Protein-Muster für die zelluläre Studien 5 Dieser Prozess umfasst drei Schritte:. Die Herstellung eines gemusterten Master mittels Photolithographie, die Schaffung eines PDMS-Stempel und Mikrokontaktdrucken einer Gold- beschichteten Substrat. Sobald gemustert, sind diese Zellkultursubstraten der Lage beschränken Proteine ​​und / oder Zellen (primäre Zellen oder Zelllinien), um das Muster. Der Einsatz von selbstorganisierten Monoschicht Chemie ermöglicht eine präzise Kontrolle über die strukturierte Protein / zelladhäsive Regionen und nicht klebend Regionen, dies kann nicht erreicht werden durch direkte Protein Stanzen werden. Hexadecanthiol, die lange Kette Alkanthiol in der Mikrokontaktdrucken Schritt verwendet, erzeugt eine hydrophobe Oberfläche, die leicht adsorbiert Protein aus der Lösung. Der Glykol-terminierten Thiol, zur Verfüllung der nicht bedruckten Bereichen des Substrats verwendet, schafft eine Monoschicht, die resistent gegen Proteinadsorption und damit das Zellwachstum ist. 6 Diese Thiol Monomere produzieren stark strukturierten Monolagen, die genau definieren Bereiche des Substrats, die unterstützen können Proteinadsorption und Zellwachstum. Als Ergebnis werden diese Substrate für eine Vielzahl von Anwendungen nützlich aus dem Studium der interzellulären Verhalten 7 zur Erstellung der Mikroelektronik. 8 Obgleich auch andere Arten von Mono-Chemie für Zellkultur-Studien, darunter Arbeiten aus unserer Gruppe mit Trichlorsilanen um Muster direkt auf Glassubstraten erstellen verwendet wurden, sind 9 gemusterten Monoschichten aus Alkan Thiolen auf Gold gebildet geradlinig, sich vorzubereiten. Darüber hinaus sind die Monomere für Monoschicht Präparation im Handel erhältlich, stabil und erfordern keine Lagerung oder Handhabung unter einer inerten Atmosphäre. Gemusterte Substrate aus Alkanthiole vorbereitet können auch recycelt und mehrfach wiederverwendet werden, die Aufrechterhaltung Zelle Gefangenschaft. 10

Selbstorganisierte Monoschichten (SAMs) aus langkettigen Alkan Thiolen auf Gold gebildet ist gut definierten Substraten für die Bildung von Protein-Muster-und Zell-Entbindung. Mikrokontaktdruck von Hexadecanthiol mit einem Polydimethylsiloxan (PDMS)-Stempel durch Verfüllung mit folgten einem Glykol-terminierte Alkanthiol Monomer erzeugt ein Muster, bei dem Protein und Zellen adsorbieren nur den Stempel Hexadecanthiol Region.

Erstellen Zweidimensionale Patterned Substrate für Protein-und Zell-Confinement

Das Mikrokontaktdrucken bietet eine schnelle, hochreproduzierbare Methode zur Erzeugung wohldefinierter gemusterter Substrate.1 Während das Mikrokontaktdrucken ...

Das übergeordnete Ziel des folgenden Experiments besteht darin, ein zweidimensional strukturiertes Substrat zur Steuerung der Proteinadsorption und des Zellwachstums zu entwickeln. Dies wird erreicht, indem mittels Photolithographie eine strukturierte Master-Vorlage hergestellt wird, die zur Herstellung eines A-P-D-M-S-Stempels für das Mikrokontaktdruckverfahren dient. Im zweiten Schritt wird das strukturierte Goldsubstrat vorbereitet, wozu das Mikrokontaktdruckverfahren genutzt wird, um ein Muster mit Bereichen zu erzeugen, die Protein adsorbieren beziehungsweise die Proteinadsorption resistieren.Anschließend werden Protein und Zellen zum Substrat hinzugefügt, um das Muster zu visualisieren und zu untersuchen. Es werden Ergebnisse zum zellulären Wachstum und Verhalten erhalten, die eine gute Protein- und Zellkonfinierung auf diesen strukturierten Substraten mittels Fluoreszenz- und Phasenkontrastmikroskopie zeigen. Der Hauptvorteil dieser Technik gegenüber anderen etablierten Methoden, wie beispielsweise dem MicroContact Printing von Proteinen, liegt darin, dass die glykolterminierte Monoschicht eine unspezifische Protein- und Zelladsorption im Hintergrund des Musters verhindert.I

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Research

Forschung

JoVE Journal

Bioengineering

Biotechnik

Mikrokontaktdruck ausgiebig in die Muster von Proteinen und anderen Molekülen auf Materialoberflächen eingesetzt. Wir zeigen die wichtigsten Schritte dieses Prozesses, Stanz-Muster von Fibronektin auf Glas.

Mikrokontaktdrucken von Proteinen für Zellbiologie

Ein vielseitiges Plasma Lithographie wurde entwickelt, um stabile Oberfläche Muster zur Führung Anheftung der Zellen zu generieren. Diese Technik kann angewendet Cell Networks einschließlich derer, die natürlichen Geweben zu imitieren und hat für das Studium mehrere, unterschiedliche Zelltypen verwendet worden zu erstellen.

Plasma Lithography Oberflächenstrukturierung für die Erzeugung von Cell Networks

Wässriger Zweiphasensysteme wurden gleichzeitig Muster mehrere Populationen von Zellen verwendet. Dieses schnelle und einfache Methode zur Musterbildung Zelle nutzt die Phasentrennung der wässrigen Lösungen von Dextran und Polyethylenglycol und die Grenzflächenspannung zwischen den beiden Polymerlösungen besteht.

Zelle Co-Kultur Strukturierung mit wässrigen Zwei-Phasen-Systeme

Dieses Protokoll beschreibt eine Mikro-kompatible Methode zur Zellstrukturierung auf SiO 2. Eine vordefinierte Parylene-C Design ist fotolithographisch auf SiO 2-Wafer gedruckt. Nach der Inkubation mit Serum (oder andere Aktivierungslösung) Zellen anhaften speziell auf (und wachsen nach der Konformität) zugrunde liegenden Parylene-C, und dabei von SiO 2-Regionen zurückgeschlagen.

Musterbildung auf Photolithographische Definierte Parylene-C: SiO<sub&gt; 2</sub&gt; Substrate

Es wird ein Protokoll zur Herstellung einer großen Fläche von nanostrukturiertem Substrat aus kleinen nanostrukturierten Formen zur Untersuchung der nanotopographischen Modulation des Zellverhaltens vorgestellt.

Der Ausbau nano Substraten Stichtechnik für Nanotopographical Modulation des Zellverhaltens

Wir stellen ein Protokoll Glas mit nanometrischer Proteinflecken von einem Fluid Lipiddoppelschicht umgeben funktionalisieren. Diese Substrate sind kompatibel mit den fortschrittlichen optischen Mikroskopie und sollen als Plattform für die Zelladhäsion und Migration Studien dienen.

Ligand Nano-Cluster-Arrays in einem unterstützten Lipid Bilayer

Dieser Bericht beschreibt eine einfache, leicht durchzuführende Technik, die Niederdruckvakuum verwendet, um mikrofluidische Kanäle mit Zellen und Substraten für die biologische Forschung zu füllen.

Eine vielseitige Methode von Patterning Proteinen und Zellen

Diese Methode soll die Mechanismen veranschaulichen, mit denen extrazelluläre Matrix-Cues wie Substratsteifigkeit, Proteinzusammensetzung und Zellmorphologie Schwann-Zell(SC)-Phänotyp regulieren.

Vorbereitung von tunable Extracellular Matrix Microenvironments zur Bewertung der Schwann Cell Phänotyp Specification

Hier stellen wir ein Protokoll für Mikrostrukturzellen mit Einzelzellauflösung unter Verwendung von DNA-programmierter Adhäsion vor. Dieses Protokoll verwendet eine Benchtop-Photolithographie-Plattform, um Muster von DNA-Oligonukleotiden auf einem Glasobjektträger zu erzeugen und dann Zellmembranen mit kommerziell erhältlichen komplementären Oligonukleotiden zu markieren. Die Hybridisierung der Oligos führt zu einer programmierten Zelladhäsion.

Einfache, erschwingliche und modulare Musterung von Zellen mit DNA

Nah-UV-Lithographie und Zugkraftmikroskopie werden kombiniert, um zelluläre Kräfte auf mikrostrukturierte Hydrogele zu messen. Die gezielte lichtinduzierte Freisetzung einzelner Zellen ermöglicht eine hohe Anzahl von Messungen an derselben Probe.

Kontrolle der Zelladhäsion mit Hydrogel-Patterning-Techniken für Anwendungen in der Zugkraftmikroskopie

Traditionell wird die Zellkultur auf planaren Substraten durchgeführt, die die natürliche Umgebung von Zellen in vivo schlecht nachahmen. Hier beschreiben wir eine Methode zur Herstellung von Zellkultursubstraten mit physiologisch relevanten gekrümmten Geometrien und mikrostrukturierten extrazellulären Proteinen, die systematische Untersuchungen der zellulären Erfassung dieser extrazellulären Hinweise ermöglicht.

Erzeugung von Multicue-Zellmikroumgebungen durch UV-Photostrukturierung von dreidimensionalen Zellkultursubstraten

Erfahren Sie die Herstellung zweidimensionaler Substrate zur kontrollierten Proteinadsorption und Zellwachstumsmusterung mittels Mikrokontaktdruck. Diese Methode ermöglicht präzise Untersuchungen zellulärer Verhaltensweisen.

Erstellen Zweidimensionale Patterned Substrate für Protein-und Zell-Confinement

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