Überwachung Plasmid-Replikation in lebenden Säugerzellen über mehrere Generationen durch Fluoreszenz-Mikroskopie

Das übergeordnete Ziel dieses Verfahrens ist es, die Partitionierung viraler Genome in sich teilenden Zellen zu beobachten. Dazu wird zunächst ein Plasmid hergestellt, das durch Fluoreszenzmikroskopie sichtbar gemacht werden kann. Hier wird ein Plasmid so konstruiert, dass es Tandem-Wiederholungen der Laktose-Operator-Sequenz oder LAC O enthält.Der zweite Schritt besteht darin, das Plasmid in sich teilende Zellen einzuführen, gefolgt von einer Infektion der Zellen mit einem Retrovirus, das für den Laktose-Repressor oder das Lac-Auge kodiert, das mit einem fluoreszierenden Protein fusioniert ist.

Die Laktose-Repressor-Fusionsproteine binden spezifisch an die Laktose-Operatorsequenzen im Plasmidsub. Die Zellen werden durch Fluoreszenzmikroskopie überwacht, um einzelne Plasmide über mehrere Zellzyklen hinweg zu verfolgen. Letztendlich werden die aufgenommenen Bilder verarbeitet, um zu bestimmen, wie die viralen Genome in sich teilenden Zellen erhalten bleiben.