Der Nachweis von IgE-Wahre exprimierenden Maus B Lineage Cells

Das übergeordnete Ziel des folgenden Experiments ist es, echte IgE-exprimierende B-Zellen von B-Zellen zu unterscheiden, wobei andere IgE-Isotypen exprimierendes IgE exprimieren. Während des In-vitro-Klassenwechsels binden Assays an B-Zell-Oberflächenproteine, was die Fähigkeit verschleiert, den Klassenwechsel zu IgE zu messen. Das Ziel wird erreicht, indem zunächst rezeptorgebundene IgE-Moleküle vor der Analyse mit Hilfe von Trypsin entfernt werden, das Zelloberflächenproteine nicht spezifisch spaltet, während endogen produzierte intrazelluläre Immunglobulinmoleküle intakt bleiben.

Zweitens werden intrazelluläre Proteine freigelegt, indem die B-Zellen mit Formin fixiert und die Zellen mit Methanol permiert werden. Anschließend werden die Zellen mit fluoreszenzmarkierten Antikörpern gefärbt, um intrazelluläre Immunglobuline freizulegen. Die Ergebnisse zeigen eine ausgeprägte IgE-positive B-Zell-Population.