Hochempfindliches Verfahren zur Messung von Arenavirus-Zell-Anlage

Das übergeordnete Ziel dieses Protokolls ist es, die Anheftung von Arenavirus-Partikeln an Wirtszellen quantitativ zu messen. Der Hauptvorteil dieser Technik ist ihre hohe Empfindlichkeit. Es kann auch angepasst werden, um die Virionen-Endozytose sowie die Freisetzung des Genoms in das Zytoplasma nach der Fusion zu messen.

Um vollständiges DMEM herzustellen, fügen Sie zu einer 500-Milliliter-Flasche DMEM 50 Milliliter hitzeinaktiviertes fötales Rinderserum und jeweils fünf Milliliter 100x Penicillin-Streptomycin und 100x HEPES-Puffer hinzu. Am Ende des Tages säen Sie 2,5 mal 10 bis zur 4. Vero E6-Zellen pro Vertiefung, in dreifacher Ausfertigung für jedes Virus, in einer 48-Well-Gewebekulturplatte in einem Endvolumen von 500 Mikrolitern vollständigem DMEM aus. Inkubieren Sie die Platte bei 37 Grad Celsius in einem befeuchteten Inkubator mit 5 % Kohlendioxid für 10 bis 18 Stunden.