DOI: 10.3791/56358-v
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Dieses Protokoll beschreibt eine Methode zur Erzeugung von kortikalen Interneuron Stammväter und Post-mitotische Interneuron Vorstufen aus embryonalen Stammzellen der Maus mit einer veränderten Embryoid Körper-Monolayer-Methode. Diese Vorfahren/Vorstufen können werden verwendet in-vitro- Eindringmittel sortiert und in Neugeborenen Neokortex für das Studium Schicksal Bestimmung verpflanzt oder in therapeutischen Anwendungen eingesetzt.
Das übergeordnete Ziel dieses Verfahrens ist es, kortikale Interneuron-Vorläuferzellen in postmitotischen Interneuronen-Vorläufern für embryonale Stammzellen der Maus unter Verwendung einer modifizierten Embryoidkörper-Monolayer-Methode zu erzeugen. Diese Methode kann helfen, zentrale Fragen im Bereich der Neurowissenschaften zu beantworten, z. B. wie Subtypen kortikaler Interneurone während der Entwicklung ihr individuelles Schicksal erreichen. Der Hauptvorteil dieser Technik besteht darin, dass sie eine effiziente Generierung von Nkx2.1-exprimierenden Interneuronen-Vorläuferzellen sowie Methoden zur Anreicherung von Parvalbumin- oder Somatostatin-Interneuronen-Untergruppen ermöglicht.
Um dieses Verfahren zu beginnen, werden mitotisch inaktive MEF-Feederzellen in MEF-Medien auf mit Gewebekulturen behandelte Platten aufgefüllt. Lassen Sie sie mindestens 12 Stunden in einem Zellkultur-Inkubator bei 37 Grad Celsius absetzen, bevor Sie die mESCs plattieren. Wenn Sie das MEF-Medium nicht sofort verwenden, tauschen Sie es alle drei Tage aus.
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