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DOI: 10.3791/60616-v
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This protocol provides a robust and sensitive method for identifying and quantifying major lipid classes in Saccharomyces cerevisiae using liquid chromatography coupled with tandem mass spectrometry. The method allows for the detection of isobaric and isomeric lipidic species.
Wir präsentieren ein Protokoll mit Flüssigchromatographie gekoppelt mit Tandem-Massenspektrometrie, um wichtige zelluläre Lipide in Saccharomyces cerevisiaezu identifizieren und zu quantifizieren. Die beschriebene Methode zur quantitativen Bewertung wichtiger Lipidklassen innerhalb einer Hefezelle ist vielseitig, robust und empfindlich.
Dieses Protokoll bietet eine genaue und reproduzierbare Methode zur Quantifizierung von zehn verschiedenen Lipidklassen von Saccharomyces cerevisiae mit einer einzigen Extraktionsmethode und einer einzigen LC-MS-Methode. Diese Methode ermöglicht den Nachweis und die Quantifizierung von isobarischen und isomerischen Lipidarten mit unterschiedlichen chemischen und physikalischen Eigenschaften. Für Saccharomyces cerevisiae Kultur, fügen Sie zuerst 5 ml sterile 20%Glukose-Stammlösung zu jedem von zwei Erlenmeyer-Flaschen mit sterilem YNB-Medium bis zu einer Endkonzentration von 2%Glukose.
Dann verwenden Sie eine sterile Pipette, um ein Volumen einer über Nacht Hefekultur mit fünf mal zehn bis siebten Hefezellen in jeden Kolben und Kultur die Kolben für mindestens 24 Stunden bei 30 Grad Celsius mit Rotationsschütteln bei 200 Umdrehungen pro Minute zu übertragen. Für die Lipidextraktion bestimmen Sie die Gesamtzahl der Hefezellen pro Milliliter Kultur und übertragen sie fünfmal zehn in die siebte Zelle in ein 15 ml Zentrifugenrohr. Fügen Sie eiskaltes nanoreines Wasser hinzu, um das Gesamtvolumen auf bis zu 15 ml zu erhöhen und die Zellen durch Zentrifugation zu sammeln.
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