Hochauflösende Messung von Odor-Driven Behavior in Drosophila-Larven

Hallo, mein Name ist Matt Lui. Ich bin Postdoktorand im Labor von Leslie Sal an der Rockefeller University. Und heute möchte ich Ihnen von den Experimenten erzählen, die wir durchgeführt haben, um die Chemotaxis von Larven zu untersuchen.

Das Problem, an dem wir interessiert sind, ist ziemlich einfach. Es ist hier tatsächlich in diesem Setup vertreten. Ich habe gerade eine Gruppe von Joseph-Larven auf diese Oberfläche von Agros übertragen.

Diese Umgebung ist ziemlich feindlich und sie sind dem Hungertod nahe. Irgendwie müssen diese Tiere ihren Weg zur nächstgelegenen Nahrungsquelle finden, und hier ist ein Bananengeruch, der die Larven anlockt. Diese Umgebung ist nicht ideal, um das Verhalten der Chemotaxis zu untersuchen, daher besteht die erste Verbesserung darin, die Banane durch eine Chemikalie zu ersetzen.

Diese Chemikalie ist Isoacetat und gehört zu den Aromen, die in Bananen vorherrschen. Das ist also unser künstlicher Geschmack, und indem wir ihn verwenden, haben wir eine viel bessere Kontrolle über den olfaktorischen Reiz. Die nächste Verbesserung besteht darin, eine geschlossene Umgebung zu verwenden und zu versuchen, auf diese Weise die Fluktuation in der anderen Verteilung zu verhindern.

Hier ist also der Assay, den wir schon seit geraumer Zeit im Labor verwenden. Dies ist eine Petrischale mit einer Oberfläche aus Agarro am Boden. Agarro ist ideal für Larven bis hin zu Chemo-Angriffen, da es sie mit Feuchtigkeit versorgt.

Auf den beiden Seiten der Platte befindet sich eine andere Kappe, die aus Teflon besteht, und was wir jetzt tun werden, ist, auf der einen Seite Isam-Acetat einzuführen und auf der anderen Seite keine Bestellung. Sobald dies erledigt ist, besteht die Idee darin, die Petroschale zu schließen, eine Weile zu warten, bis der Theodor sich ausgebreitet hat, und dann die Schale zu öffnen. Stellen wir hier ein Tier vor, und wir lassen das Tier für eine bestimmte Zeit bewegen.

Dieser Assay beruht auf der Annahme, dass durch das Einbringen von Theodor auf einer Seite der Schale ein Gradient entsteht, der sich ziemlich schnell etabliert und für den Zeitraum des Tests stabil bleibt. Das Hauptproblem besteht nun darin, dass noch nie jemand bewiesen hat, dass der Gradient in der Platte vorhanden ist. Es könnte sehr gut sein, dass man sehr schnell nach der Zugabe von Theodor eine homogene Verteilung von Theodor in der Platte hat, so dass der Gradient sehr flach wäre, oder es könnte sein, dass mehrere Minuten benötigt werden, bis sich der Gradient etabliert hat.

Dies hängt natürlich hauptsächlich vom Dampfdruck des verwendeten Theodors ab. Das zweite Problem bezieht sich auf das, was während des Experiments quantifiziert wird. Stellen Sie sich vor, dass ein Tier von hier aus startet, das X und nach drei Minuten an dieser Endplatte gefunden wird, das rote X.Nun gibt es zwei mögliche Ansätze.

Eine Sache, die Sie tun können, ist, die endgültige Position des Tieres erst nach einer bestimmten Zeitspanne, drei oder fünf Minuten, aufzuzeichnen. Dann ist die einzige Information, die Sie erfassen würden, die Position des Starts, und wir glauben, dass es wichtig ist, eine gute Auflösung über das Verhalten des Tieres im Laufe der Zeit zu haben. Zum Beispiel könnte sich ein Tier wie hier kaum von der Ausgangs- in die Endposition bewegt haben, oder es könnte sehr gut die Region um Theodor für einen signifikanten Teil der Zeit besucht und vor dem Ende des Versuchs wieder zurückgebracht haben.

Die Schlussfolgerung, die wir aus diesen beiden Situationen ziehen würden, ist sehr unterschiedlich. In einem Fall kann es sein, dass das Tier nicht auf den Reiz reagiert hat, während es im anderen Fall sicherlich reagiert hat. Die beiden Verbesserungen, die wir zu erreichen versuchen, sind erstens, die Form und Stabilität des anderen Gradienten in der Arena zu kontrollieren.

Zweitens, verfolgen Sie das Verhalten des Tieres in Echtzeit und bewahren Sie all diese Informationen auf. In der nächsten Sequenz wird Sylvia Ihnen vorstellen, wie wir die Auftragsverdünnung vorbereiten. Mein Name ist S ti.

Ich bin wissenschaftliche Mitarbeiterin im Labor der VA und arbeite für Material lui. Heute zeige ich Ihnen, wie Sie die Materialien für das Kammersystem vorbereiten, mit dem wir Tiere verfolgen. Das Hauptproblem bei unserem Kammersystem besteht darin, dass wir Gerüche in der Luft verteilen

Das bedeutet, dass es zum Beispiel, wenn die von uns verwendeten Agros-Platten nicht flach sind, zwischen den Experimenten zu Schwankungen und Konzentrationen kommen kann, die zu Lärm in das System führen. Also zeige ich Ihnen und gebe Ihnen kleine Tipps, um zu versuchen, den Lärm im System zu reduzieren. Die Materialien für die Vorbereitung Ihrer Geruchsverdünnung sind also ein Glasgefäß, vorzugsweise abgedunkeltes Glas, falls Sie leichte reaktive Gerüche mit einem Aliquot des Geruchs verwenden, an dem Sie interessiert sind.

Glaspipetten zur Vorbereitung dieses Aliquots und eine adäquate mechanische Pipettenhilfe. Dann Paraffinöl-Pipettenspitzen, Ihren Standard-Pipettenmann und kleine Fläschchen für die Verdünnung. Auch diese müssen aus Glas bestehen und vorzugsweise abgedunkelt werden, und dann eine Waage, um genaue Messungen durchzuführen und das Rauschen zwischen den Experimenten zu reduzieren.

Da Gerüche sehr flüchtig und einige von ihnen giftig sind, werden sie in einer Haube behandelt. Der erste Schritt zur Reparatur einer Geruchsverdünnung besteht darin, den Geruch, den Sie verdünnen werden, zu aliquotieren. Um genaue Verdünnungen vorzubereiten und die Schwankungen zwischen den Experimenten zu minimieren, ist es notwendig, alles zu wiegen.

Beginnen Sie also mit der Beschriftung und stellen Sie eine einmolare Konzentration von Ethylbutyrat her. Zuerst bereitest du das Paraffinöl vor. Paraffinöl ist sehr zähflüssig, daher ist es wichtig, zu versuchen, die Pipettenspitze so wenig wie möglich in das Paraffinöl einzutauchen, gerade genug, um das Paraffinöl aufsaugen zu können, ohne Blasen zu erzeugen.

Dann ist es gut, das überschüssige Parenöl an der Seite der Flasche abzuwischen. Da Parenöl viskos ist, ist es sehr wichtig, es langsam in das Fläschchen abzulassen. Sobald Sie das Para-Öl in Ihre Flasche pipettiert haben, werfen Sie die Spitze nicht sofort weg, da sich am unteren Ende der Spitze mehr ansammelt.

Es ist gut, ein Blatt mit Berechnungen vorzubereiten, bevor Sie mit dem Verdünnen beginnen, bei dem Sie bereits das Volumen des Parenöls, das Sie hinzufügen werden, und auch das Gewicht abgemessen haben, und dann dasselbe auch für Ihren Geruch mit dem Gewicht zu tun. Auf diese Weise können Sie die Waage, die Sie haben, das gesamte Paraffinöl, das Sie benötigen, und auch den ganzen Geruch überprüfen. Bei Bedarf gießt du mehr Parenöl hinein und misst nach, bis du das richtige Gewicht hast.

Sobald Sie das richtige Parenölgewicht haben, müssen Sie nur noch Odorant nach den gleichen Prinzipien hinzufügen. Alles klar. Hier zeige ich, wie man Larven für die Verfolgung vorbereitet.

Normalerweise verwenden wir Larven, die sechs Tage alt sind. Wir tun dies, weil sie groß genug sind, dass sie leicht von unserer Software aufgenommen werden können, und sie sind auch immer noch sehr aktiv, um festzustellen, ob Ihre Larven zu alt für die Verfolgung sind, Sie müssen nur überprüfen, ob Larven die Wände hochklettern. Wenn Larven die Wand hochklettern, dann sind sie zu alt und werden nicht besonders aktiv sein.

Der erste Schritt bei der Vorbereitung Ihrer Larven besteht darin, sie in 15%ige Saccharose zu tauchen. Der Grund, warum wir 15%ige Saccharose verwenden, ist, dass die Larven in dieser Lösung Boyd sind und das Futter sich stattdessen entweder teilweise darin auflöst oder auf den Boden fällt. Du gießt so viel Saccharose ein, dass sie, ich weiß, etwas weniger als einen Zentimeter von der Oberseite deiner Flasche oder deines Fläschchens entfernt ist.

Dann nimmst du einen Spatel. Sie können bereits sehen, wie die Larven nach oben schwimmen, und Sie graben sich vorsichtig in das Futter ein, um alle Tiere zu entfernen, die sich in das Futter eingraben, schwenken es ein wenig, um sie vom Futter zu trennen, und setzen es dann einfach für ein paar Minuten hin. Sobald sich das Futter und die Larven ausreichend getrennt haben, nehmen Sie eine vorbeschriftete Petrischale und gießen Sie sie in den Piepserteil.

Bewahren Sie die Oberseite der Petrischale auf, da Sie diese mit Wasser füllen und als Behälter für verfolgte Larven verwenden werden, damit Sie trennen können, welche Sie aufgespürt haben und welche nicht. Nachdem du die Larven nun in die Petrischale gegossen hast, musst du 30 Minuten warten, bis sie sich an die Saccharose gewöhnt haben und einen Hungerzustand erreichen. Das bedeutet, dass sie sich während der 30 Minuten, an die sich die Larven gewöhnen, in der Tracking-Einrichtung besser verhalten.

Die Saccharose ist ein guter Moment, um die Platten für die Nachverfolgung vorzubereiten. Das sind also die Oberseiten von 96-Well-Platten. Sie können sie separat kaufen und dies ist eine 3%aros-Lösung, die bereits erhitzt wurde.

Wir verwenden 3%, weil es verhindert, dass Larven graben, aber es ist auch dicht genug, damit sie darauf laufen können und auf jeder Plattenplatte befeuchtet bleiben. Sie möchten 25 mil Agros pipettieren. Es ist wichtig zu versuchen, die Bildung großer Blasen im Gel zu vermeiden.

Es ist auch wichtig, die Platten auf eine ebene Fläche zu stellen, da es sonst zu Gelen kommen kann, die sich an einem Hang befinden und das Verhalten der Larven beeinträchtigen können. Nachdem die Aros fest geworden sind, stapeln wir die Oberteile und wickeln sie in Soranfolie ein, damit sie nicht austrocknen. Dies sollte sie mehrere Tage lang in einem guten Zustand für die Verfolgung halten.

In dieser Sequenz werde ich Ihnen unseren Verhaltenstest vorstellen, der sich leicht von dem Benzinschalen-Assay unterscheidet, von dem ich Ihnen vorhin erzählt habe. Was Sie benötigen, sind Leitungen mit 96-Well-Platten sowie solche, die die Agro-Schicht enthalten. Die Assays bestehen aus drei Deckeln, die übereinander gestapelt sind.

Die erste Lippe enthält nichts, ist leer und dient nur dazu, das System von der Oberfläche, auf der es liegt, zu isolieren. Die zweite Schicht enthält Diego agro surface. Hier werden die Tiere auf die Oberfläche gelegt und nun, wie ich euch als nächstes zeigen werde, stellen wir Theodor auf dem Teller vor.

Es ist wichtig, jedes Mal, wenn Sie theodor befüllen, einen frischen und neuen Deckel zu verwenden. Dies soll eine Kontamination von einem Experiment zum anderen verhindern. Sie benötigen auch eine andere Verdünnung.

Normalerweise verwenden wir keine Farbe, um Theodor aufzuladen, aber hier werde ich sie zur Veranschaulichung verwenden. Dies ist eine hohe Konzentration von Theodor. Obwohl dieser sehr verdünnt ist, wird es mein Ziel sein, einen Gradienten entlang einer Linie zu erstellen.

Sagen wir diese Linie, und wir wollen, dass die Konzentration von links nach rechts zunimmt. Um dies zu erreichen, werde ich mehrere Tröpfchen Ordnung verwenden, die mit zunehmender Konzentration in den Kondensationsring gelegt werden. Ich beginne mit der höchsten Konzentration, die an der Extremität platziert wird.

Es ist wichtig, es im Ring zu verteilen. Nun fahre ich mit der nächsten Konzentration fort, die im Vergleich zur ersten doppelt verdünnt ist, und lege sie auf diesen Ring. Also da Nein, ich habe sechs Tröpfchen.

Die erste enthält eine Konzentration von beispielsweise eins. Die zweite Konzentration beträgt 0,5, doppelt so viel wie die erste. Die dritte ist die Konzentration, 0,25 und so weiter.

Wir haben also eine geometrische Reihe entlang der Linie. Der nächste Schritt besteht darin, diesen Deckel auf der AAL-Oberfläche umzudrehen und nun durch Oberflächenspannung alle Tröpfchen von der Oberseite des Deckels zu hängen. Wir entwickeln eine Technik, die auf Infrarotspektroskopie basiert, um die gesamte Konzentration in der Platte zu messen.

Durch die Anwendung dieser Technik konnten wir zeigen, dass, wenn man hier eine geometrische Reihe entlang der Deodorantlinie hat, man am Ende eine Konzentration von Theodor entlang der Länge hat, die exponentiell zunimmt, wie hier gezeigt, und entlang der Breite der Platte. Wir haben ein Profil, das direkt unter der Odoriermittellinie gipfelt. So sieht die tatsächliche Geometrie des Farbverlaufs aus.

Wenn man sich die Konzentration von Theodor in der Luft ansieht, ist das Gute, dass wir zeigen konnten, dass der Gradient seiner Geometrie mindestens 15 Minuten lang stabil ist. Nach dem Einsetzen des oberen Deckels warten wir 30 Sekunden, damit sich der Gradient einstellen kann. Dann stellen wir das Tier in der Arena vor.

Das Tier wird unter die andere Endlinie zwischen Position drei und vier eingeführt, wir verwenden eine kleine Stecknadel, um die Larven von der Saccharoselösung auf die Agrooberfläche zu übertragen. Der Transfer erfolgt durch das Fischen einer Larve um den Nagelkopf. Wir öffnen schnell den Deckel, die Larve legt sich auf der Oberfläche von Agarro ab.

Dann schließen wir den Deckel. Es ist wichtig, die Zeit, in der der Deckel geöffnet bleibt, so gering wie möglich zu halten. Als nächstes nehmen Sie die Bewegung des Tieres drei oder fünf Minuten lang auf.

Die eigentliche Aufnahme wird gemacht. Bei diesem Tracking-Setup haben wir eine Kamera, die mit einem Computer verbunden ist. Die Bildverfolgungssoftware, die wir verwenden, ist Aton vision von Nordis, um die Informationen über die Tierbewegung zu sammeln und als digitale Datei zu speichern.

Jetzt sind wir dabei, das Verhaltensexperiment zu starten. Wir haben den Deckel mit der aro-Schicht. Wir haben die Verdünnungen.

Diego bleibt auf dem ersten Deckel hängen. Vor dem Beladen von Theodor ist es wichtig, jedes Fläschchen zu wirbeln. Wir verwenden unsere Verdünnung mit der kleinsten links und der höchsten hier rechts.

Alle sechs Tröpfchen werden gleichzeitig auf die Platte geladen. Um Geruchsverluste zu vermeiden, verwenden wir hier einen Mehrkanalpipeter mit sechs Tauchgängen, bei dem 10 Mikroliter des Geruchs aus jeder Verdünnungsprobe entnommen und der Geruch gleichzeitig geladen wird. Beim Beladen wird der Deckel nun auf der Oberfläche von agros umgedreht.

Der Farbverlauf wurde in den letzten 30 Sekunden in der Platte erstellt, wie ich euch zuvor gezeigt habe. Jetzt werde ich ein Tier auf der Diego-Oberfläche vorstellen. Sobald das Tier vorgestellt wurde, starte ich die Aufnahme.

Das Tier ist hier und seine Bewegung wird nun verfolgt. Wie Sie sehen können, folgt das Tier der Geruchslinie und steuert auf den höchsten Konzentrationspunkt des Gradienten zu. Denken Sie daran, dass die Konzentration von links nach rechts mit einer exponentiellen Form zunimmt.

Wie Sie sehen können, wird die Bewegungsrichtung ständig korrigiert. In Bezug auf den Reiz hat das Tier nun den höchsten Konzentrationspunkt des Gradienten erreicht, und wir nehmen es von der Platte. Das Tier wird auf eine andere Platte gelegt, um sicherzustellen, dass wir nicht das gleiche Individuum zweimal direkt verfolgen.

Nachdem wir eine neue Larve eingeführt und eine neue Aufnahme gestartet haben, sind hier die Regeln, die wir für die Verfolgung befolgen. Wir stoppen die Nachverfolgung, sobald das Tier die höchste Konzentrationsreihe der Platte erreicht hat, die dieser, dieser hier, entspricht. Wenn ein Tier gegen die Wand prallt, wird die Verfolgung unterbrochen, da wir jegliche Interferenz vermeiden wollen.

Die erste Frage, die wir beantwortet haben, war: "Könnte". Was wir wissen wollten, war, ob ein Tier Theodor in einer bestimmten Konzentration riechen kann oder nicht. Um einen solchen Test durchzuführen, haben wir in der Regel eine einzige Geruchsquelle, anstatt mehrere zu haben.

Dies ermöglicht es Ihnen, einen Freiheitsgrad bei der Änderung der Konzentration im Endtröpfchen zu haben. Hier haben Sie zum Beispiel ein Tröpfchen mit hoher Konzentration, und hier haben Sie ein Tröpfchen mit niedriger Konzentration. Normalerweise bringen wir das Tier auf die Diego-Oberfläche direkt unter das Theodor-Tröpfchen und sehen, ob das Tier in der Lage ist, seine Anwesenheit zu erkennen und in seiner Nachbarschaft zu bleiben.

Jetzt möchte ich unseren Assay noch weiter ausbauen. Stell dir vor, du hast ein Tröpfchen Ordnung und du zeichnest mehrere Trajektorien auf, die hier überlagert sind, und du hast drei davon. Sie haben eine Person, die diese grüne Spur generiert.

Es gibt diese orangefarbene Spur, die weniger zentriert ist, und dann gibt es diese rosa Flugbahn, die ein Tier darstellt, das anscheinend um die Quelle kreist. Wir glauben, dass es viele Informationen über die Details der Flugbahnen gibt. Aus diesem Grund importieren wir die Trajektorie als Besitzfolge in matlab und führen die Analyse nach der Analyse mit matlab durch.

Hier ist die Entfernung zur Quelle, wahrscheinlich in Abhängigkeit von der Zeit. Für die drei Trajektorien, die zuvor angezeigt wurden, haben Sie die grüne Trajektorie, die sehr nah an der Quelle bleibt. Sie haben die orangefarbene Trajektorie, die deutlich mehr Rauschen anzeigt.

Und dann haben Sie diese violette Flugbahn, die interessanterweise zeigte, dass das Tier die Quelle verließ, um auf Distanz zu bleiben, was wahrscheinlich einer Konzentration entsprach, die optimal war. Hier sehen Sie die Illustration von 10 Flugbahnen, Tieren, die nicht riechen können. Dabei handelt es sich um Mutanten oder drei B-Mutanten, die Non ellers sind.

Und wie Sie sehen können, verdeutlichen all diese Flugbahnen, dass die Tiere die Geruchsquelle nicht erkannt und sie einfach verlassen haben. Im Kontrast dazu haben wir hier 10 aufeinanderfolgende Flugbahnen für weiße Pfahltiere aufgezeichnet. Diese Tiere sind natürlich in der Lage zu riechen, und wie Sie sehen können, sammeln sich alle direkt unter der Deodorantquelle an.

Die 20 Trajektorien, die gerade vorgestellt werden, wurden in Wirklichkeit erworben, ohne die Identität der Tiere zu kennen. Dies zeigt die Effizienz und Zuverlässigkeit unseres Assays. Um anhand eines exponentiellen Gradienten zu bestimmen, ob einige Mutanten in der Lage sind, hier zu riechen oder nicht, erzeugen wir mehrere Spuren und wir wollen ein Gefühl dafür bekommen, wie gut die Tiere in der Lage sind, dem Stimulus am anderen Ende zu folgen.

Ich zeige Ihnen jetzt 15 Bahnen, die separat aufgezeichnet wurden, und wie Sie sehen können, leisten die Tiere hervorragende Arbeit darin, dem Stimulus unter der anderen Endlinie zu folgen. Nun möchten wir mit einer einfachen Steuerung fortfahren. Es kann sehr gut sein, dass die Tiere im exponentiellen Gradienten der Linie folgten, weil es einen Reiz gab, unabhängig von ihrer Konzentration, nur die Tiere gingen geradeaus.

Um zu zeigen, dass sie tatsächlich die Konzentration berechnen oder etwas, das mit der Konzentration zusammenhängt, und sie nutzen, um ihre Bewegung zu lenken, haben wir jetzt diese Geometrie, die sich in der Nähe eines Daches befindet. Die Larve wird hier wie üblich eingeführt, und wir erwarten, dass sie sich entlang der Linie bewegt und dann feststellt, dass die Konzentration nach diesem Punkt abnimmt und zu ihr zurückkehrt. Also führten wir den Test mit fünf Tieren durch.

Wir haben die Trajektorien gesammelt, und jetzt stellen wir sie überlagert auf dieser Folie dar. Und wie Sie sehen können, sind die Tiere von hier aus gestartet, sich entlang der Linie bewegt, dann die Region mit der höchsten Konzentration erkunden und sich hauptsächlich dort aufhalten. Dies deutet stark darauf hin, dass sie in der Lage sind, andere Konzentrationen in Echtzeit mit dem Single-Source-Assay zu berechnen.

Wir konnten vor allem eine große Frage stellen. Kann ein Tiergeruch einen Geruch in einer bestimmten Konzentration mit Hilfe eines Multi-Source-Geräts erkennen? Wir haben mehr Flexibilität bei der Änderung der Form des Gradienten und bei der Bestimmung, ob ein Tier in der Lage ist, diese Informationen zu nutzen oder nicht.

Ich möchte diese Idee veranschaulichen, indem ich ein einfaches Experiment durchführe. In den Farbverläufen, die wir bisher eingerichtet haben, hatten wir eine exponentielle Form entlang der Linse. Nun stellt sich die Frage, wenn wir das al noch mehr herausfordern, indem wir die Konzentration linear entlang der Linse ansteigen lassen, sind sie dann immer noch in der Lage, ihren Weg unter die andere Endlinie zu finden?

Dieses Diagramm stellt die beiden Arten von Gradienten dar. Wir haben den exponentiellen Gradienten in Lila und den linearen Gradienten in Grün getestet. Dies ist der lineare Gradient, und ich werde die verschiedenen Konzentrationen von Isamacetat zum Verdünnen von Parenöl schreiben.

Dies ist eine arithmetische Reihe. Wir haben einen linearen Gradienten, der sich etablieren wird, und wie Sie sehen können, ist die Steigung ziemlich flach im Vergleich zum exponentiellen Gradienten hier, wo die Konzentration der Extremitäten ebenfalls 0,5 beträgt, aber bis zu 0,03 steigt. Die Frage ist, ob Navis in der Lage sind, Chemo-Attacken durchzuführen, wenn sie mit einem so flachen Gradienten konfrontiert sind.

Hier die tatsächliche Konzentration von Acetat, die in den sechs Tröpfchen für den exponentiellen Gradienten und für den linearen Gradienten verwendet wird. Wie Sie sehen können, ist die niedrigste Konzentration hier ziemlich hoch, obwohl die höchsten Konzentrationen in beiden Fällen für den linearen Gradienten gleich sind. Wir führen das Experiment mit dem linearen Gradienten durch, und hier sind 15 Trajektorien von Wildtyp-Tieren dargestellt, und wir glauben, dass es ziemlich klar ist, dass diese Tiere in der Lage waren, den linearen Gradienten zu erkennen und diesem Signal entlang der Deodorant-Linie zu folgen.

Ich denke also, unser Standpunkt ist klar. Bevor ich zum Schluss komme, möchte ich kurz über zukünftige Richtungen für dieses Tracking-Setup sprechen. Obwohl Sie mit diesem Tracking-Setup viele interessante Dinge tun können, z. B. komplexes Verhalten von Larven über einen größeren, längeren Zeitraum zu beobachten, hat es einige Einschränkungen.

Zum Beispiel sind Sie auf die Größe Ihres Tellers beschränkt, so dass die Zeit, die Sie verfolgen können, und die komplexen Verhaltensweisen, die Sie sich ansehen können, begrenzt sind. Es wäre also schön, wenn wir ein System entwickeln könnten, bei dem entweder die Platte größer ist oder man überhaupt nicht durch die Grenzen einer Platte eingeschränkt ist. Ein weiteres Problem ist, dass es mit der Software, die wir derzeit haben, schwierig ist, mehr als ein Tier gleichzeitig zu verfolgen, so dass es nicht möglich ist, das Verhalten der Population in Echtzeit zu beobachten.

Ein weiterer interessanter Aspekt des Verhaltens, den wir mit diesem Aufbau nicht testen können, sind die tatsächlichen dreidimensionalen Bewegungen der Larven im Raum. Wenn Sie Tiere verfolgen, werden Sie feststellen, dass sie zum Beispiel, wenn sie ein Geruchströpfchen erreichen, ihren Kopf heben oder mit dem Kopf herumfuchteln, um Veränderungen in der Konzentration zu erkennen. Möglicherweise ist dies mit unserem speziellen Setup im Moment nicht möglich, daher wäre es schön, etwas zu entwickeln, das es uns ermöglicht, dies zu tun.