Modelos de ratón para Arteriosclerosis Graft

Resumen

Se describen protocolos para nuestros arteriosclerois de injerto de ratón (GA) modelos que implican la interposición de un segmento de vaso del ratón en un receptor de la misma cepa endogámica. Por retrocruzamiento de cambios genéticos adicionales en el recipiente de donante, el modelo se puede evaluar el efecto de los genes específicos en GA.

Resumen

Arteriosclerois injertados (GA), también llamados vasculopatía del injerto, es una lesión patológica que se desarrolla durante meses a años en los órganos trasplantados se caracterizan por la estenosis difusa, circunferencial de todo el árbol vascular del injerto. El componente más crítico de GA patogénesis es la proliferación de células de músculo liso como dentro de la íntima. Cuando un segmento de la arteria coronaria humana se interpone en la aorta infra-renal de ratones inmunodeficientes, las intimas podrían expandirse en respuesta a las células T humanas transferidas adoptivamente alogénico para el donante arteria o exógeno humano IFN-γ en ausencia de células T humanas. La interposición de una aorta de ratón a partir de una cepa a otra cepa de ratón receptor se limita como un modelo para el rechazo crónico en los seres humanos debido a la respuesta de rechazo celular agudo mediado en este modelo de ratón elimina por completo todas las células vasculares derivadas del donante del injerto dentro de dos-tres semana. Recientemente hemos desarrollado dos nuevos mOuse modelos para evitar estos problemas. El primer modelo consiste en la interposición de un segmento de vaso de un ratón macho en una hembra receptora de la misma cepa endogámica (C57BL/6J). El rechazo del injerto en este caso sólo se dirige contra antígenos menores de histocompatibilidad codificado por el cromosoma Y (presente en el macho, pero no la hembra) y la respuesta de rechazo que se produce es suficientemente indolente para conservar las células musculares lisas derivadas del donante durante varias semanas. El segundo modelo consiste en la interposición de un segmento de la arteria de un tipo salvaje C57BL/6J donante ratón en un ratón de acogida de la misma cepa y género que carece del receptor de IFN-γ seguido de la administración de ratón IFN-γ (entregado a través de la infección de ratón hígado con un vector adenoviral. No hay rechazo en este caso como donante y ratones receptores son de la misma cepa y género pero las células del músculo liso donantes proliferan en respuesta a la citoquina mientras que las células derivadas del huésped, que carecen del receptor deesta citocina, no responden. Por retrocruzamiento de cambios genéticos adicionales en el recipiente de donante, ambos modelos pueden ser utilizados para evaluar el efecto de los genes específicos en la progresión de GA. A continuación, se describen los protocolos detallados para nuestros modelos GA ratón.

Introducción

Arteriosclerois injertados (GA), también llamados vasculopatía del injerto, es una lesión patológica que se desarrolla durante meses a años en los órganos trasplantados se caracterizan por la estenosis difusa, circunferencial de todo el árbol vascular del injerto ^7. Las etapas iniciales pueden causar estenosis excéntricas y focal que son más evidentes en las arterias, por lo tanto se asemeja más estrechamente estenosis visto en la aterosclerosis convencional. La pérdida de lumen de los vasos de injerto resultados de la expansión la íntima debido a la infiltración de células T del huésped y de los macrófagos y, especialmente, a la acumulación de matriz extr....

Protocolo

Ratón del injerto y modelo de trasplante de injerto singénico

Todos los estudios con animales fueron aprobados por el Cuidado de Animales institucional y comités de uso de la Universidad de Yale. Para el modelo de aloinjerto, segmentos de aorta torácica de macho, 4-5 semanas de edad WT (C57BL/6J) o ratones IFN-γR-KO se interponen en la aorta abdominal de la hembra receptora, 8-12 semanas de edad WT utilizando un extremo a -end anastomosis microquirúrgica técnica (véase el siguiente para más detalles). Para el modelo de injerto singénico, los segmentos de la aorta torácica, 4-5 semanas de edad, los ratones WT macho se interponen en la aorta a....

Resultados

Ratón modelo de aloinjerto de la arteriosclerosis (GA): En este modelo, una aorta macho donante se trasplanta en hembra receptora para que el host induce respuestas T alorreactivas aloinmunes mediadas por células contra un antígeno Y menor (el menor de histocompatibilidad HY antígeno específica de los machos) expresado en el injerto ^12, y a su vez de las células T produce IFN-γ-unidades de la proliferación de VSMC ²⁰ como se observa en otros modelos de trasplante de aloinjerto

Discusión

Los protocolos descritos se centran en modelos de ratón GA. Los procedimientos se pueden aplicar a otros modelos de trasplante de injerto. Estos modelos incluyen xenoinjertos humanizado (es decir, los segmentos de las arterias coronarias humanas interponen a la aorta infra-renal de ratones inmunodeficientes), y el modelo GA mouse rechazo agudo (es decir, una aorta del ratón de una cepa genética en otro destinatario línea genética). Nuestros modelos de ratón descritos son más para cerrar lesiones GA hum.......

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
C57BL/6J (H-2b)	Jackson Laboratories (Bar Harbor, ME)	000664	Donante (5 semanas) Receptor (8-12 semanas)
Inyección de clorhidrato de ketamina	Hospira Inc.	NDC 0409-2053 Solución de	almacenamiento (50 mg/ml) Solución de trabajo (5 mg/ml)
Solución estéril de xilacina	Lloyd Inc.	NADA# 139-236	Solución de almacenamiento (100 mg / ml) solución de trabajo (1 mg / ml)
Ketoprofeno	Fort Dodge Animal Health	NDC 0856-4396-01 Solución de	almacenamiento (100 mg / ml) Solución de trabajo< / > (0.027 mg / ml)
Heparina Sódica	Sáldica Farmacéuticos	NDC 25021-400	Solución de almacenamiento (1000 U/ml) Solución de trabajo (100 U/ml)
Solución salina (estéril 0.9% Cloruro de sodio)	CareFusion	AL4109
Inyección de cloruro de sodio al 0,9%	Hospira Inc.	NDC 0409-4888-10	Para preparar el
ungüento oftálmico	Productos veterinarios Dechra	NDC 17033-211-38
Almohadillas de preparación de yodo	Triad Desechables, Inc.	NDC 50730-3201-1
Almohadillas de preparación de alcohol	McKesson Corp.	NDC 68599-5805-1
Microscopio	Leica	MZ95
Micro Tijeras	Roboz Surgical Instrument Co.	RS-5693
Tijeras de resorte	F.S.T	15009-08	Para seccionar la aorta del donante o receptor
Tijeras extraestrechas	F.S.T	14088-10
Portaagujas/Pinzas	MICRINS	MI1542	Para sujetar la aguja
Pinzas finas	F.S.T	11254-20
Pinzas	F.S.T	11251-35
Pinzas de patrón estándar	F.S.T	11000-12
Pinzas	F.S.T	13011-12
LANCASTER Espéculo ocular	Zepf Medical Instruments	42-1209-07
Micro Vascular Clip	Roboz Surgical Instrument Co.	RS-6472
Micro clip que aplica pinzas con bloqueo	Roboz Surgical Instrument Co.	RS-5440
Sutura de monofilamento de poliamida negra	AROSurgical Instruments Corporation	Sutura de #T4A10Q07 10-0 Cat, aguja = 70 micras Sistema de
sutura de nailon monofilamento negro	(Covidien)	SN-1956	Sutura 6-0
No tejida Songes	McKesson Corp.	N.º de pedido 94442000
Jeringa de 1 ml	BD	REF 309659
3 ml Jeringa	BD	REF 309657
10 ml Jeringa	BD	REF 309604
18G 1 1/2, Aguja hipodérmica	BD	REF 305196
25G 7/8, Aguja hipodérmica	BD	REF 305124
27G 1/2, Aguja hipodérmica	BD	REF 305109
30G 1/2, Aguja Hipodérmica	BD	REF 305106
Almohadilla de Corazón Sunbeam		Z-1228-001
Recortadora	Wahl	9854-500
Mesa 2. Reactivos y equipos específicos.

anestésico Vaselina