A continuación, se presenta un protocolo para realizar un ensayo de migración celular semi-alto rendimiento en una placa de cultivo celular de 96 pocillos. Este protocolo es un método rápido, simple y económico para crear heridas arañazos consistentes en una monocapa de células.
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Artículo de método
Un dispositivo para realizar la migración de células / Curación de Heridas en una placa de 96 pocillos
En este artículo
Resumen
Resumen
La migración de células / hiriendo ensayo es un método comúnmente utilizado para estudiar la migración celular y otros procesos biológicos, tales como la angiogénesis y la metástasis tumoral. En este ensayo, las células se cultivan para formar una monocapa confluente y una herida mecánica se crea por el rascado con un dispositivo. Entonces la tasa de migración de las células hacia el área denudada se puede supervisar mediante formación de imágenes. Nuestra wounder mecánica 8-canal está diseñado para hacer frente a la mayoría de los problemas asociados con el ensayo de migración celular. En primer lugar, nuestra wounder puede ser fácilmente esterilizado por autoclave o con desinfectantes comunes. En segundo lugar, las patillas ajustables individuales permiten incluso el contacto con la placa de cultivo celular de manera que las heridas agudas y reproducibles pueden ser creados. En tercer lugar, las barras de guía en ambos lados de la wounder asegurar la posición herida consistente en cada pocillo. El uso de puntas de pipeta de plástico desechables por herir pueda ampliar un mejor manejo de la wounder, así como para reducir al mínimo cruzada contamination. En conclusión, nuestro wounder célula puede proporcionar a los investigadores un dispositivo fácil y reproducible de usuario para realizar el ensayo de migración celular usando la placa de cultivo de 96 pocillos estándar.
Introducción
La migración celular juega un papel importante en los procesos celulares, tales como la embriogénesis, la neurogénesis, la angiogénesis, la curación de heridas, la reparación de la mucosa, epitelio-mesenquimal transiciones en fase de desarrollo normal y situación de la enfermedad 1. Es un proceso complicado que implica la coordinación de numerosos eventos inter e intra-celulares, incluyendo interacciones de moléculas de señalización, la polarización celular, la reorganización del citoesqueleto, remodelación de la matriz, la protrusión de la membrana y la célula-célula dinámica de adhesión de modulación 2. Mediante el es....
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Protocolo
1. Introducción a las partes de la wounder (Figura 1)
- Preparar el soporte de pasador mediante la fijación de los pasadores de herir a distancias iguales. Mantenga las puntas y ajustar la altura de la punta moviendo las clavijas ajustables hirientes hacia arriba y abajo.
- Montar el guiado barra ajustable en diferentes marcas de placas de cultivo de 96 pocillos y asegurar que el área de la herida está en una posición fija.
- Fijar el pasador heridas ajustable apretando el tornillo hexagonal. Fijar la barra guía en posición apretando las tapas de cabeza hexagonal en ambos extremos.
2. Ajuste de la anchura del ....
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Resultados
Este wounder mecánica 8-canal está construido para rayar una monocapa de células con el fin de realizar el ensayo de migración celular. Es un dispositivo fácil de usar que se pueden llevar a cabo ensayos de células rascarse en placas de 96 pocillos en menos de un minuto sin entrenamiento especial. Este wounder puede introducir áreas de heridas sobre monocapas de células con una anchura uniforme de aproximadamente 600 micras y con bordes afilados (Figuras 5 y 6).<.......
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Discusión
Nuestra wounder célula tiene varias características únicas en la solución de los problemas de los ensayos de migración celular tradicionales. El wounder celular mecánica 8-canal está hecha de acero inoxidable de alta calidad (Steel 304) con una larga vida útil que se puede esterilizar en autoclave. Casi todas las marcas comerciales de placas de cultivo de 96 pocillos disponibles en el mercado se pueden utilizar con este wounder celular mecánica debido a la barra de guía ajustable. El diseño de la barra de guía ajustable.......
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Divulgaciones
Los autores declaran que no tienen intereses financieros en competencia.
Agradecimientos
Los autores desean agradecer al Sr. Tam Po Leung, el Sr. Wong Chi Kin y el personal técnico de la Facultad de Ciencias de taller, Hong Kong Baptist University, por sus conocimientos técnicos y asesoramiento en la fabricación del prototipo de este wounder.
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| placa de cultivo celular de 96 pocillos | Nunc | 167008 | También se pueden utilizar otras marcas de placa de cultivo celular de 96 pocillos |
| Puntas de pipeta P10 | Axygen | 301-03-051 | La punta de pipeta corta P10 es más fácil de crear una herida clara |
| Wounder | R& P Technology Limited | ||
| Medium 199 | Sigma | M2520-1L | Para el cultivo celular de células endoteliales de la vena umbilical humana. Utilice el medio de cultivo adecuado y la condición para otro tipo de células. |
| Suero fetal bovino | Gibco 26140079 | Para el cultivo celular de células endoteliales de la vena umbilical humana. Utilice el medio de cultivo adecuado y la condición para otro tipo de células. | |
| Penicilina/estreptomicina | Gibco | 15140122 | para el cultivo celular de células endoteliales de la vena umbilical humana. Utilice el medio de cultivo adecuado y la condición para otro tipo de células. |
| Sal sódica de heparina de mucosa intestinal porcina | Sigma | H3393 | Para el cultivo celular de células endoteliales de la vena umbilical humana. Utilice el medio de cultivo adecuado y la condición para otro tipo de células. |
| Gelatina de piel bovina | Sigma | G9391 | Para cultivo celular de células endoteliales de la vena umbilical humana. Utilice el medio de cultivo adecuado y la condición para otro tipo de células. |
Referencias
- Friedl, P., Wolf, K. Tumour-cell invasion and migration: diversity and escape mechanisms. Nat Rev Cancer. 3 (5), 362-374 (2003).
- Friedl, P. Prespecification and plasticity: shifting mechanisms of cell migration. Curr Opin Cell Biol. 16 (....
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Reimpresiones y permisos
