Recolección de subpoblaciones leucémicas: un método para la separación espacial de subpoblaciones de células leucémicas a partir del cocultivo 2D

- Cuando las células leucémicas se cocultivan con células estromales mesenquimales, interactúan con las células estromales y forman tres subpoblaciones. Células suspendidas que flotan libremente, células de fase brillante adheridas a la superficie de la monocapa mesenquimal y células de fase diminuta debajo de la monocapa mesenquimatosa. Para separar cada subpoblación, tome una placa de cultivo de tejidos con una monocapa de células estromales mesenquimales.

Siembra células leucémicas presentes en medios de cultivo específicos del tumor en la monocapa e incuba la placa durante el tiempo deseado. A continuación, recoja las células tumorales en suspensión pipeteando las células que flotan libremente en un tubo separado. Ahora, agregue el medio fresco a la placa y pipetee vigorosamente para desalojar las células tumorales de fase brillante de la superficie de la monocapa mesenquimal.

Recoja estas células pipeteándolas en un tubo separado. Agregue tripsina a la placa para eliminar las células mesenquimales adheridas. Agregue suero fetal bovino, o FBS, para detener la acción de la tripsina y romper los agregados celulares. Ahora, recoge las células de atenuación de fase en un tubo. Cent