Name: El aislamiento de ADN genómico de colas de ratón (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-07-29T00:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 26 s
Description: Aprende a extraer ADN genómico de biopsias de cola en ratones de 10 días usando técnicas de digestión con proteinasa K. Este método evita contaminación cruzada y permite identificar individuos mediante perforación de orejas.

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<ol style="margin-top: 0in"><li> Corte los pedazos de cola (3 mm) y las orejas marca. </li><li> Añadir 720 m l STE y 30 m l de proteinasa K (10 mg / ml). </li><li> Se incuba a 55 ° C en el bloque de calentamiento y agitar cada hora durante 3 horas a la máxima velocidad durante 10 segundos. </li><li> Inactivar la proteinasa K a 70 ° C durante 5 minutos. </li><li> Apagar en hielo durante 5 minutos. </li><li> Centrífuga ADN cola durante 10 minutos a toda velocidad. </li><li> Decantar en el tubo nuevo que contiene 720 m l de isopropanol. &nbsp; </li><li> ADN precipitado invirtiendo el tubo o agitación. </li><li> Girar el ADN durante 5 minutos a toda velocidad. Eliminar el sobrenadante. </li><li> Lavar precipitado con etanol al 70%. </li><li> Girar el ADN genómico 5 minutos a máxima velocidad. Eliminar el sobrenadante. </li><li> Permitir que el ADN que se seque durante 1-2 minutos. </li><li> Resuspender el ADN en 100 a 200 l m dependiendo del tamaño del pellet. </li><li> Colocar el tubo a 55 º C durante 1 hora para facilitar la disolución de ADN. &nbsp; </li></ol>

<table><tbody><tr><td>STE</td><td>Tampón</td><td></td><td></td><td>100 mm Tris; pH 8.5 /5 mM EDTA /0.2% SDS /200 mM NaCl / en H2O</td></tr><tr><td>TE</td><td>Tampón</td><td></td><td></td><td>100 mM Tris; pH 5.0 /1 mM EDTA /10 mM NaCl</td></tr></tbody></table>

el aislamiento de adn genómico de colas de ratón

Isolation of Genomic DNA from Mouse Tails

El aislamiento de ADN genómico de colas de ratón

Este es un ratón de 10 días de edad y voy a tomar una biopsia de la cola para luego extraer el ADN genómico de su cola. Lo que voy a hacer es cortar un pequeño trozo de su cola, aproximadamente unos tres milímetros, y luego colocaré el fragmento de cola en un tubo eppendorf y pondré el tubo eppendorf sobre hielo seco. Ahora, para evitar la contaminación de un ratón a otro, suelo marcar la cuchilla de afeitar en la parte donde hice el último corte.De esta manera, para el siguiente ratón, me aseguraré de usar una pieza limpia de hoja de afeitar para tomar la siguiente biopsia de cola. Con el fin de distinguir entre los diferentes ratones de tu camada, necesitarás una forma de identificarlos. Una manera de hacerlo es perforando un orificio en sus orejas mediante un perforador de orejas que se muestra aquí.Agarre suavemente al ratón por el pescuezo de su cuello, dándolo vuelta y pellizcando su cola entre los dedos. Tome el orificio de la oreja con la otra mano y haga un corte rápido en la oreja del ratón allí. ¿Vio lo indoloro que fue?Vale, ahora pueden ver que tengo algunos fragmentos de cola en estos tubos eppendorf y ahora voy a añadir las soluciones que ayudarán a su digestión. Pri

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Research

Investigación

JoVE Journal

Biology

Biología

La determinación del genotipo completo de una muestra de cola de ratón, incluyendo la digestión del tejido y la lectura de PCR, se realiza en una hora y media utilizando SYBR Sigma verde Extract-N-Amp PCR kit de tejido.

Genotipificación rápida de tejido de ratón utilizando extracto-N-Amp tejido Sigma PCR Kit

Demostramos una inmunoprecipitación de cromatina (CHIP) para identificar las interacciones factor en genes específicos de tejido durante o después de la aparición de tejidos específicos de expresión génica en el tejido embrionario del ratón. Este protocolo debe ser ampliamente aplicable para el estudio de la activación de genes específicos de tejido, como ocurre durante el desarrollo embrionario normal.

Ensayo de inmunoprecipitación de la cromatina de los genes específicos de tejido utilizando etapa temprana de embriones de ratón

Se presenta un método de muestreo no invasivo para recoger muestras de cabello de manera eficiente difícil pequeños mamíferos, como se muestra en la pika estadounidense. Demostrar la utilidad de este método de extracción de ADN de muestras de cabello y amplificar varios tipos de marcadores moleculares utilizados en los estudios de la ecología de la fauna silvestre y la conservación.

Un cabello no invasiva técnica de muestreo para obtener ADN de alta calidad de esquiva Pequeños Mamíferos

Este artículo describe la extracción de ADN de la pinza de la cola del pez cebra. El protocolo demuestra un método rápido y eficiente para analizar los genotipos de pez cebra.

Extracción de ADN de la pinza de la cola: un método utilizado en el genotipado del pez cebra

En este video, demostramos un procedimiento de corte de cola en un modelo de ratón para recolectar sangre periférica. Posteriormente, la sangre recolectada se somete a centrifugación para separar el plasma, que se puede utilizar para experimentos posteriores.

Un procedimiento de corte de cola de ratón para la recolección de sangre periférica y el aislamiento de plasma

Se describe un procedimiento experimental sencillo y rápido para la generación de fibroblastos primarios de las orejas y la cola de los ratones. El procedimiento no requiere una formación especial de los animales y se puede utilizar para la generación de cultivos de fibroblastos de los oídos almacenados a temperatura ambiente durante hasta 10 días.

Culturas Generación de fibroblastos primarios de mouse de oreja y rabo tejidos

La microinyección de ovocitos de ratón se utiliza comúnmente tanto para la transgénesis clásica ( es decir, la integración aleatoria de transgenes) como para la orientación de genes mediados por CRISPR. Este protocolo revisa los últimos avances en microinyección, con especial énfasis en el control de calidad y las estrategias de genotipificación.

Generación de ratones modificados genéticamente a través de la microinyección de ovocitos

Se describe un protocolo detallado para el ensayo de mutación Lambda seleccione cII en cultivos de células de roedores transgénicos o los correspondientes animales tratados con un agente químico físico de interés. Este enfoque ha sido ampliamente utilizado para las pruebas de mutagenicidad de agentes carcinógenos en células de mamíferos.

La Lambda seleccione cII sistema de detección de mutación

Aquí, presentamos un protocolo para aislar rápidamente a núcleos de alta calidad del tejido fresco o congelado para la descendente secuencia de RNA masivamente paralelo. Nos incluyen tejido detergente-mecánica y de mecánica hipotónica interrupción y célula opciones de lisis, que pueden utilizarse para el aislamiento de los núcleos.

Aislamiento de núcleos de adultos de la médula espinal para secuenciación masivamente paralela solo núcleo ARN

Este protocolo proporciona un método de aislamiento de ADN simple y rentable para el análisis de alteraciones de la microbiota intestinal murina durante el desarrollo de enfermedades autoinmunes.

Análisis de la dinámica de la microbiota fecal en ratones propensos al lupus utilizando un método de aislamiento de ADN simple y rentable

Hemos desarrollado un enfoque de oncogenómica comparativa entre especies que utiliza análisis genómicos y cribados genómicos funcionales para identificar y comparar dianas terapéuticas en tumores que surgen en modelos de ratón modificados genéticamente y el tipo de tumor humano correspondiente.

Perfiles genéticos y cribado de abandono a escala genómica para identificar dianas terapéuticas en modelos murinos de tumor maligno de la vaina de los nervios periféricos

Aprende a extraer ADN genómico de biopsias de cola en ratones de 10 días usando técnicas de digestión con proteinasa K. Este método evita contaminación cruzada y permite identificar individuos mediante perforación de orejas.

El aislamiento de ADN genómico de colas de ratón

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