El diseño de dispositivos de microfluidos para el estudio de las respuestas celulares en la sección individual o Coexistencia Química / eléctrica / Shear Stress Los estímulos

El objetivo general de este procedimiento es diseñar y fabricar dispositivos microfluídicos para observar cómo las células responden a los estímulos ambientales. Este método puede ayudar a responder preguntas clave en la biología celular y la ingeniería biomédica. Por ejemplo, cómo las células responden ante diferentes estímulos ambientales, incluidos los productos químicos, las tensiones de cizallamiento y el campo eléctrico. La principal ventaja de esta técnica es que los tubos son fáciles de fabricar y ensamblar. Y estos dispositivos microfludúdicos pueden hacer la condición in vivo con altas capacidades excelentes. Tzu-Yuan Chou, un estudiante de pregrado de mi laboratorio, y Hsien-San Hou, un miembro del personal de posta del laboratorio del Dr. Julian Chung, demostrarán el procedimiento. Para comenzar, encienda el trazador láser de dióxido de carbono y verifique su conexión a la computadora. A continuación, cargue un patrón de árbol de Navidad predibujado, como uno de los patrones que se muestran aquí en el escriba. A continuación, coloque una hoja de PMMA o un trozo de cinta adhesiva de doble cara encima de la platina del trazador. Ajuste el enfoque del láser de dióxido de carbono utilizando la barra de calibración y el láser de neón de helio visible. A continuación, traza el patrón sobre el sustrato. Cuando termine, recoja el sustrato del patrón, retire las piezas no deseadas y use un chorro de nitrógeno para limpiar la superficie de cualquier residuo restante. Repita este proceso para cada componente del chip. Ensamble el chip microfluídico de tensión de cizallamiento químico. Para lograr esto, fije tres hojas de las láminas de PMMA con patrón de tensión de cizallamiento químico utilizando dos piezas de cinta adhesiva de doble cara rayada. Use superpegamento para unir adaptadores acrílicos con roscas de tornillo en el medio a la capa superior de PMMA del chip alineando las roscas de los tornillos y los orificios. Estos adaptadores servirán como entradas medias, salidas y conectores de puente de sal. A continuación, añada un trozo más de la cinta adhesiva de doble cara de 07 mm de grosor a la parte inferior del chip y fije el chip a una placa de Petri de 10 cm de diámetro. Una vez ensamblado, coloque el chip en una cámara de vacío durante toda la noche. Ahora ensamble el chip de campo químico-eléctrico. Fije la hoja de PMMA trazada para el chip de campo químico-eléctrico con cinta adhesiva de doble cara a una placa de Petri de 10 cm de diámetro. Antes de usar los chips, expóngalos a los rayos UV durante 30 minutos para esterilizarlos. A continuación, conecte las entradas de las patatas fritas a jeringas llenas de PBS de 3 ml mediante tubos de plástico y tuercas apretadas con los dedos. De la misma manera, conecte los tomacorrientes a un tubo de desagüe. Presione lentamente el émbolo de la jeringa para cebar los canales fluídicos con PBS. Empuje la jeringa hacia adelante y hacia atrás para eliminar las burbujas, luego coloque las papas fritas dentro de una incubadora durante la noche. Para configurar los chips de campo químico-eléctrico, rellene el 3% de agua en las tuercas tubulares para configurar los puentes de sal. A continuación, coloque los electrodos de cloruro de plata en las tuercas tubulares. Cultive células CL1-5 de cáncer de pulmón en D-MEM suplementadas con 10% de FBS hasta que alcancen el 90% de confluencia. A continuación, aspire el medio. Lave las celdas una vez con PBS precalentado. Y añadir 2 ml de una solución tampón de 05%tripsina a una placa de 10 cm de diámetro. Vuelva a colocar las celdas en 37