Name: Un método sencillo y rápido para el aislamiento simultáneo de islotes primarios y células acinares pancreáticas primarias de ratones (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-01-09T13:30:00.000+00:00
Duration: 14 min 39 s
Description: Aprende un método simplificado para aislar islotes pancreáticos y células acinares primarias de ratón sin perfusión compleja. Esta técnica accesible produce células viables para estudiar la diabetes y la comunicación intercelular.

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<ol><li>Manrai, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diabetes+mellitus+as+a+consequence+of+acute+severe+pancreatitis%3A+unraveling+the+mystery%5BTitle%5D)+AND+%22World+J+Diabetes%22%5BJournal%5D)">Diabetes mellitus as a consequence of acute severe pancreatitis: unraveling the mystery.</a> World J Diabetes. 14 (8), 1212-1225 (2023).</li>
<li>García-Compeán, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Post-acute+pancreatitis+diabetes%3A+a+complication+waiting+for+more+recognition+and+understanding%5BTitle%5D)+AND+%22World+J+Gastroenterol%22%5BJournal%5D)">Post-acute pancreatitis diabetes: a complication waiting for more recognition and understanding.</a> World J Gastroenterol. 29 (28), 4405-4415 (2023).</li>
<li>Shen, H. N., Yang, C. C., Chang, Y. H., Lu, C. L., Li, C. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Risk+of+diabetes+mellitus+after+first-attack+acute+pancreatitis%3A+a+national+population-based+study%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Gastroenterol%22%5BJournal%5D)">Risk of diabetes mellitus after first-attack acute pancreatitis: a national population-based study.</a> Am J Gastroenterol. 110 (12), 1698-1706 (2015).</li>
<li>Hohmeier, H. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+of+INS-1-derived+cell+lines+with+robust+ATP-sensitive+K%E2%81%BA+channel-dependent+and+-independent+glucose-stimulated+insulin+secretion%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes%22%5BJournal%5D)">Isolation of INS-1-derived cell lines with robust ATP-sensitive K⁺ channel-dependent and -independent glucose-stimulated insulin secretion.</a> Diabetes. 49 (3), 424-430 (2000).</li>
<li>Hohmeier, H. E., Newgard, C. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell+lines+derived+from+pancreatic+islets%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cell+Endocrinol%22%5BJournal%5D)">Cell lines derived from pancreatic islets.</a> Mol Cell Endocrinol. 228 (1-2), 121-128 (2004).</li>
<li>Neuman, J. C., Truchan, N. A., Joseph, J. W., Kimple, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+method+for+mouse+pancreatic+islet+isolation+and+intracellular+cAMP+determination%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">A method for mouse pancreatic islet isolation and intracellular cAMP determination.</a> J Vis Exp. (88), e50374(2014).</li>
<li>Villarreal, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simple+high-efficiency+protocol+for+pancreatic+islet+isolation+from+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">A simple high-efficiency protocol for pancreatic islet isolation from mice.</a> J Vis Exp. (150), e57048(2019).</li>
<li>Huang, C., Gu, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effective+isolation+of+functional+islets+from+neonatal+mouse+pancreas%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Effective isolation of functional islets from neonatal mouse pancreas.</a> J Vis Exp. (119), e55160(2017).</li>
<li>Petrov, M. S., Yadav, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Global+epidemiology+and+holistic+prevention+of+pancreatitis%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Gastroenterol+Hepatol%22%5BJournal%5D)">Global epidemiology and holistic prevention of pancreatitis.</a> Nat Rev Gastroenterol Hepatol. 16 (3), 175-184 (2019).</li>
<li>Xiao, A. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Global+incidence+and+mortality+of+pancreatic+diseases%3A+a+systematic+review%2C+meta-analysis%2C+and+meta-regression+of+population-based+cohort+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet+Gastroenterol+Hepatol%22%5BJournal%5D)">Global incidence and mortality of pancreatic diseases: a systematic review, meta-analysis, and meta-regression of population-based cohort studies.</a> Lancet Gastroenterol Hepatol. 1 (1), 45-55 (2016).</li>
<li>Sendler, M., Weiss, F. U., Golchert, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cathepsin+B-mediated+activation+of+trypsinogen+in+endocytosing+macrophages+increases+severity+of+pancreatitis+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Cathepsin B-mediated activation of trypsinogen in endocytosing macrophages increases severity of pancreatitis in mice.</a> Gastroenterology. 154 (3), 704-718.e10 (2018).</li>
<li>Modenbach, J. M., Möller, C., Asgarbeik, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biochemical+analyses+of+cystatin-C+dimers+and+cathepsin-B+reveals+a+trypsin-driven+feedback+mechanism+in+acute+pancreatitis%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Biochemical analyses of cystatin-C dimers and cathepsin-B reveals a trypsin-driven feedback mechanism in acute pancreatitis.</a> Nat Commun. 16 (1), 1702(2025).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>0,22 & mu; Filtro m</td><td>Millex</td><td>SLGPR33RB</td><td>Filtra la solución de P de colagénasa preparada</td></tr><tr><td>0,25 M cloruro de calcio (Estéril)</td><td>Beyotime</td><td>ST365</td><td>Vía de señalización dependiente del calcio para activar la secreción de insulina</td></tr><tr><td>Jeringuilla de 1 ml</td><td>Jierui</td><td>10084692516405</td><td>Se utiliza para la perfusión de colagenasa P en tejido pancreático.</td></tr><tr><td>Solución de tribromoetanol al 1,25%</td><td>Beijing Yosida Biotechnology Co., Ltd.</td><td>JT0781</td><td>Anestesia</td></tr><tr><td>Tubo centrífuga de 1,5 mL</td><td>Eppendorf</td><td>30121589</td><td>Recoge el sobrenadante de la celda para centrifugarlo y almacenarlo.</td></tr><tr><td>1x Hank' Solución salina balanceada s</td><td>Biosharp</td><td>BL561A</td><td>Prepara la solución de colagenasa P y enjuaga el tejido pancreático</td></tr><tr><td>Placa de cultivo celular de 12 pozos</td><td>SARSTEDT</td><td>83.3921</td><td>Conserva el tejido pancreático y la acinar extraída del cultivo</td></tr><tr><td>Tubo centrífuga de 15 mL</td><td>Beijing Labgic Technology Co., Ltd.</td><td>CT-002-15A</td><td>Mantener soluciones durante el experimento</td></tr><tr><td>Placa de cultivo celular de 24 pozos</td><td>SARSTEDT</td><td>83.3922</td><td>Cultivo de los islotes extraídos</td></tr><tr><td>40-malla y nbsp; Tamiz</td><td>Instrumentos Weidan</td><td>N/A</td><td>Filtrar tejido pancreático</td></tr><tr><td>Pipeta Pasteur de 5 mL</td><td>Biosharp</td><td>BS-XG-03L</td><td>Pipetar líquidos y alterar físicamente el tejido pancreático</td></tr><tr><td>Tubo centrífugo de 50 mL</td><td>Beijing Labgic Technology Co., Ltd.</td><td>CT-002-50A</td><td>Mantener las soluciones durante el experimento, contener tejidos y centrifugar</td></tr><tr><td>Platos de cultivo celular de 60 mm</td><td>Beijing Labgic Technology Co., Ltd.</td><td>12211</td><td>Contenedor para contener medios de cultivo que contienen islotes para facilitar la recogida</td></tr><tr><td>Solución de etanol al 75%</td><td>HYNAUT</td><td>N/A</td><td>Remojad los ratones para desinfectarlos.</td></tr><tr><td>Adobe Photoshop 2023</td><td>Adobe Inc.</td><td>N/A</td><td>Genera imágenes.</td></tr><tr><td>Centrífuga Beckman Allegra X-12/X-12R</td><td>BECKMAN</td><td>Allegra X-12/X-12R</td><td>Centrifugadora</td></tr><tr><td>Albúmina sérica bovina (BSA)-V</td><td>Solarbio</td><td>A8020</td><td>Mantén la función fisiológica normal de los islotes y usa (it/this) para preparar soluciones de glucosa de diferentes concentraciones.</td></tr><tr><td>ratones C57BL/6J, grado SPF, 6 y guiño; 8 semanas, peso 18 y ndash; 25 g</td><td>Centro de Animales de Laboratorio de la Universidad Médica Naval &nbsp;</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Kit de ensayo de viabilidad y citotoxicidad de células de calceína/PI</td><td>Beyotime</td><td>C2015L</td><td>Detectar la viabilidad celular y la citotoxicidad de las células animales basándose en la tinción de doble fluorescencia de Calcein-AM (Calcein AM) y yoduro de propidio (PI) de células viables y muertas simultáneamente.</td></tr><tr><td>Cloruro de calcio (anhidro)</td><td>Sangon Biotech</td><td>10043-52-4</td><td>Prepara la solución de colagenasa P</td></tr><tr><td>Colador celular (100 y mu; m)</td><td>Biosharp</td><td>BS-100-XBS</td><td>Filtrado de células acinares</td></tr><tr><td>Colagenasa P</td><td>Sigma</td><td>11213857001</td><td>Tejido pancreático digestivo</td></tr><tr><td>Solución de D-(+)-glucosa (20%, Estéril)</td><td>Beyotime</td><td>ST491</td><td>Estimula la secreción de insulina de los islotes.</td></tr><tr><td>DMEM básico (1x) (Dulbecco' s Eagle Medium modificado)</td><td>Gibco</td><td>C11995500BT</td><td>Cultivo de células acinares</td></tr><tr><td>Suero fetal bovino (FBS)</td><td>Biowest</td><td>S140B-500</td><td>Prepara el medio de cultivo</td></tr><tr><td>Solución estéril PREMIUM de Ficoll-Paque</td><td>Cytiva</td><td>17544203</td><td>Medio del gradiente de densidad para la estratificación del gradiente de densidad</td></tr><tr><td>GraphPad Prism 8.0.1</td><td>GraphPad Software, LLC</td><td>N/A</td><td>Generar imágenes y realizar análisis estadísticos.</td></tr><tr><td>Solución HEPES (1 M)</td><td>Biosharp</td><td>BL1061A</td><td>Prepara la solución de colagenasa P</td></tr><tr><td>Centrífuga de alta velocidad/refrigerada</td><td>Sigma</td><td>3K15</td><td>Centrifugadora</td></tr><tr><td>ImageJ</td><td>Laboratorio de Instrumentación Óptica y Computacional (LOCI) de los Institutos Nacionales de Salud</td><td>N/A</td><td>Analizar imágenes de fluorescencia celular y calcular la viabilidad celular.</td></tr><tr><td>Microscopio biológico invertido</td><td>Leica</td><td>N/A</td><td>Observa la morfología celular y selecciona los islotes.</td></tr><tr><td>Microscopio de fluorescencia invertida</td><td>OLYMPUS</td><td>IX73</td><td>Observa las señales celulares fluorescentes y captura imágenes fluorescentes.</td></tr><tr><td>Amortiguador de bicarbonato Krebs-Ringer HEPES</td><td>LEAGENE</td><td>CZ0103</td><td>Mantén la función fisiológica normal de los islotes y usa (it/this) para preparar soluciones de glucosa de diferentes concentraciones.</td></tr><tr><td>Kit ELISA INS (Insulina) del ratón</td><td>Wuhan Fine Biotech Co., Ltd.</td><td>EM0260</td><td>Detecta el nivel de secreción de insulina en los islotes.</td></tr><tr><td>Pinzas oftálmicas (10 cm, curvadas con gancho)</td><td>Dispositivos Médicos Qingyi</td><td>N/A</td><td>Asistir en la disección</td></tr><tr><td>Pinzas oftalmológicas (10 cm, rectas con diente)</td><td>Dispositivos Médicos Qingyi</td><td>N/A</td><td>Ayudar en la disección y separación repentina del tejido pancreático y en la extracción del tejido pancreático</td></tr><tr><td>Solución de estreptomicina de penicilina</td><td>Gibco</td><td>15140-122</td><td>Prepara el medio de cultivo para evitar la contaminación</td></tr><tr><td>RPMI-1640 mediano,</td><td>KeyGEN BioTECH</td><td>KGL1501-500</td><td>Termina la solución digestiva de la colagenasa P. y cultiva los islotes</td></tr><tr><td>Inhibidor de tripsina de Glycine max (soja)</td><td>Sigma</td><td>T6522</td><td>Prepara la solución de colagenasa P</td></tr><tr><td>Tijeras quirúrgicas (10 cm, punta recta)</td><td>Dispositivos Médicos Qingyi</td><td>N/A</td><td>Asistencia en anatomía y corte del tejido pancreático en pequeños trozos</td></tr><tr><td>Baños de agua</td><td>OAICLAB</td><td>AY-HF</td><td>Mantén la temperatura de digestión.</td></tr><tr><td>Kit de ensayo de actividad de &alpha;-amilasa y &beta;-amilasa</td><td>Elabscience</td><td>E-BC-K006-M</td><td>Detectar los niveles de amilasa secretada por las células acinares bajo diferentes condiciones</td></tr></tbody></table>

un método sencillo y rápido para el aislamiento simultáneo de islotes primarios y células acinares pancreáticas primarias de ratones

A Simple and Rapid Method for Simultaneous Isolation of Primary Islets and Primary Pancreatic Acinar Cells from Mice

Un método sencillo y rápido para el aislamiento simultáneo de islotes primarios y células acinares pancreáticas primarias de ratones

In the research on the pathogenesis of post-acute pancreatitis diabetes mellitus (PPDM-A), abnormal bidirectional communication between pancreatic acinar ...

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Investigación

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Medicine

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Una descripción detallada de ratón aislamiento de islotes se describe utilizando la técnica de canulación en pancreático ductal in situ y la perfusión de una combinación de colagenasa purificada y proteasa neutra.

Aislamiento de ratón Islet Langerhans utilizando una combinación de colagenasa purificada y proteasa neutra

Este video describe la técnica utilizada para aislar las células acinares pancreáticas--células exocrinas-- que contienen una variedad de enzimas digestivas. Las células acinares primarias son útiles en el estudio ex vivo de la metaplasia acinar-ductal (ADM), un evento temprano en el desarrollo del cáncer de páncreas.

Aislamiento primario de células acinares: un método para aislar células acinares del páncreas de ratón

Los islotes pancreáticos, también llamados islotes de Langerhans, son un grupo de células endocrinas que producen hormonas para la regulación de la glucosa y otras funciones biológicas importantes. Este protocolo explica un método para aislar los islotes pancreáticos mediante la perfusión de colagenasa a través de la ampolla de Vater para digerir el tejido pancreático exocrino y una centrifugación en gradiente de densidad simplificada para purificar los islotes de ratones.

Aislamiento de islotes pancreáticos mediante perfusión de colagenasa: un método enzimático para aislar células de islotes pancreáticos

El ensayo in vitro función de las células β usando islotes aislados de ratones de Langerhans es un componente importante en el estudio de la fisiopatología de la diabetes y la terapéutica. Mientras que muchas aplicaciones posteriores están disponibles, este protocolo se describe específicamente la medición de intracelular de adenosina monofosfato cíclico (cAMP) como un parámetro esencial para determinar la función de las células β.

Un método para ratón islotes pancreáticos Aislamiento y cAMP intracelular Determinación

En esta publicación, se describe un procedimiento rápido y conveniente para el aislamiento y cultivo de las células acinares pancreáticas primarias del páncreas murino. Este método constituye un enfoque valioso para el estudio de la fisiología de las células pancreáticas exocrinas normales / no transformada primarios frescos.

Aislamiento y cultivo de ratón primarias células acinares pancreáticas

Presentamos aquí un protocolo para el aislamiento de islotes del modelo de ratón de diabetes tipo 2, Leprdb y detalles de un ensayo de células vivas para la medición de la secreción de insulina de islotes intactos que utiliza microscopía de 2 fotones.

Lepr<sup&gt; Db</sup&gt; Modelo de ratón de la Diabetes Tipo 2: El aislamiento de los islotes pancreáticos y células en Vivo 2-Photon imágenes de islotes intactos

Se describe un protocolo en el presente documento para el aislamiento de islotes intactos de ratones neonatales. Páncreas se digirieron parcialmente con colagenasa, seguido de lavado y recolección a mano. 20 - 80 grupos de los islotes se pueden obtener por el páncreas de los ratones recién nacidos, que son adecuados para diversos estudios de los islotes.

El aislamiento efectivo de los islotes funcionales de páncreas de ratón neonatales

Este protocolo de aislamiento de islotes describió una novedosa vía de inyección de colagenasa para digerir el tejido exocrina y un procedimiento de gradiente simplificado para purificar los islotes de ratones. Implica digestión enzimática, separación/purificación de gradientes y selección manual de islos. El aislamiento exitoso puede producir entre 250 y 350 islotes de alta calidad y completamente funcionales por ratón.

Un protocolo simple de alta eficiencia para el aislamiento de islotes pancreáticos de ratones

Aquí presentamos un protocolo para aislar células de islote pancreático de ratón para la detección de las inducciones de ROS por los xenobióticos con el fin de identificar los potenciales químicos xenobióticos diabetogenic.

Una proyección basadas en células de islotes pancreáticos murinos Diabetogenic ambiental productos químicos

Aquí, presentamos un protocolo para la toma de imágenes y la cuantificación de la dinámica de calcio en poblaciones de células heterogéneas, como las células de los islotes pancreáticos. Los reporteros fluorescentes se entregan en la capa periférica de las células dentro del islotes, que luego se inmoviliza e imagen, y se realiza un análisis por célula de la dinámica de la intensidad de la fluorescencia.

Imagen de la dinámica del calcio en subpoblaciones de células de islotes pancreáticos de ratón

Este protocolo describe un método estandarizado para la extracción quirúrgica, la digestión enzimática y la purificación con gradiente de densidad de islotes pancreáticos de rata Lewis, permitiendo preparaciones de alto rendimiento y alta pureza para su uso directo en trasplantes o estudios in vitro .

Aislamiento y purificación de islotes pancreáticos a partir de ratas Lewis mediante digestión enzimática y separación por gradiente de densidad

Aprende un método simplificado para aislar islotes pancreáticos y células acinares primarias de ratón sin perfusión compleja. Esta técnica accesible produce células viables para estudiar la diabetes y la comunicación intercelular.

Un método sencillo y rápido para el aislamiento simultáneo de islotes primarios y células acinares pancreáticas primarias de ratones (Video) | JoVE Journal

Un método sencillo y rápido para el aislamiento simultáneo de islotes primarios y células acinares pancreáticas primarias de ratones

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