Summary
ワルトン管を介してマウス顎下唾液腺のカニュレーションのためのプロトコルが記述されています。この実験では、トリパンブルー溶液は、この手法が効果的に標的腺に注入を提供する方法を示すこと、および唾液腺の再生のための潜在的な臨床薬/細胞療法としてのこの新しいアプローチの信頼性を示唆するダイアーとして使用されます。
Abstract
重度の唾液腺の機能低下が頻繁にシェーグレン症候群と癌治療のために彼らの頭頸部領域での治療照射を受けている人の患者に見られる。このような口腔乾燥（口渇）、嚥下障害（咀嚼や嚥下障害）などの患者の経験の症状の両方のグループ、重度の虫歯、味覚変化、オーロ-咽頭感染症（カンジダ症）、粘膜炎、痛みや不快感。
唾液腺の低刺激機能の治療のための再生医療の一つの革新的なアプローチはRSレッドマン、E Mezey ら推測される2009：。幹細胞を直接障害の機能を復活さで強力な方法として、グランドにカニュレーションによって堆積することができるオルガン。おそらく、移行した外国の幹細胞は、宿主唾液腺の一部として機能する腺細胞に分化する。また、このカニューレ挿入法は、臨床的遺伝子導入のアプリケーションのための方便と効果的な配信方法です。
ここでは、ワルトン管（ 図1）を経由してマウスの顎下唾液腺にカニュレーションの手順を実行するために必要な手順を示しています。 C3Hマウス（チャールズリバー、モントリオール、QC、カナダ）は、マギル大学動物資源センターでクリーンな、従来の条件下で保持されているこの実験に使用されます。全ての実験は、大学の動物ケア委員会によって承認され、動物のケアに関するカナダの協議会のガイドラインに準拠していましたされています。
この実験では、トリパンブルー溶液を29ゲージの針ポリエチレン管の内側に包まれてインスリンの注射器を使用してワルトン管の開口部を介してグランドに注入する。その後、マウスは注入が正常腺に移行することを示すために解剖される。
Protocol
1。手続き的説明
- 皮下輸液の動きを中断することから唾液の分泌を防ぐために、各マウスには0.5 mg / mlの硫酸アトロピン一水和物（カタログ番号11330、フルカ、米国）の1g /μlの体重を注入する。
- 100 mg / mLのケタミンおよび20 mg / mlのキシラジン（フェニックスサイエンティフィック、AR、米国）ソリューションの1g /μlの体重で各マウスに麻酔注入し腹腔内 （IP）
- 腹側の位置にカスタムメイドのプラスチックのプラットフォーム上でマウスを置きます：上顎切歯は、金属線にロックされ、下顎切歯は、口が開いて保持するために弾性文字列にフックされます。
- 0.58ミリメートルの直径のポリエチレンチューブ（; 図2猫＃427410、Becton Dickinson社製、MD、米国）内に配置された29ゲージの針（カタログ番号600145、タイコヘルスケア、MA、米国）とインスリンの注射器を使用してください。ポリエチレン管は、29ゲージの針の先端上に5ミリメートル挿入されます。針は、ワルトン管にポリエチレンチューブを移動するため硬質のガイドとして使用されます。ポリエチレン管は、ダクト内部に3〜5ミリメートルを挿入されます。針はダクトの外側に残っている間だけのポリエチレン管は、唾液腺管に入ることに注意してください。右側の舌の下に置かれているワルトン管を介して顎下腺にフィルタ処理された0.4％トリパンブルー染色液（カタログ番号15250、ギブコ、米国）の50ULを注入する。注入は注射器のピストン上で正圧に着実に供給される指は、注入のすべての後に口腔内注入の逆流を防ぐために、腺に配信されていても、ピストン上に残ります。トリパンブルー溶液は、技術を実証するために染料としてビデオで使用されています。
- FTERトリパンブルー溶液の注入は、マウスを解剖する前に安楽死された。唾液腺を外科的にどのくらいの輸液のは、実際に腺に残っているかを判断するために公開されます。
2。代表的な結果：
輸液を注入した後、マウスを外科的に後のカニューレ唾液腺を露出する解剖した。画像- 2に示すように、ワルトン管の暗色はトリパンブルー溶液が正常に注入されたという証拠を提供する。
図1マウスの顎下腺のカニューレ。
図2。ポリエチレン管は29ゲージの針の先端の周りに包み込まれている。注射針は、ワルトン管にポリエチレンチューブを移動するため硬質のガイドとして使用されます。ポリエチレン管は、ダクトの内部に（カニューレ）3-5 mmに挿入されます。針はダクトの外側に残っている間だけのポリエチレン管は、唾液腺管に入ることに注意してください。
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Discussion
このカニューレ挿入法を使用して難しさは、注入溶液の逆流を防ぐためです。トリパンブルー溶液を一時的に正常唾液腺に移行した場合でも、唾液の分泌は、注入を妨害し、腺の外トリパンブルー液の逆流が発生する場合があります。予防策として、唾液の分泌を抑制するためにアトロピンの使用に加え、ポリエチレンカニューレは、ワルトン管や点滴が堆積された後、60秒間保持シリンジのピストンのままにしてください。これは、注入されたソリューションのほとんどが腺内にとどまるようになります。
従来、全身アプリケーション、薬/細胞のすなわち静脈内注射（IV）は、唾液腺の再生のための臨床的アプローチとして使用されています。静脈内に注射注入は、薬物/セルの一部だけが標的腺に移行できるように、循環系全体を通過します。この従来の方法に比べ、カニューレ挿入の手順を介して薬剤/細胞の注入であるローカルアプリケーションは、、耳下腺、顎下腺、舌下唾液腺の機能の復活に、より直接的かつ効果的な方法として認識されることがあります。したがって、このカニューレ挿入法は、マウスの唾液腺の再生医療のための信頼性の高いモデルとして使用することができ、今後の見通しとして、この手順では、臨床応用のための方便の方法があります。
それは唾液腺の再生医療のさらなる研究に興味のある学生や研究者のための効果的なツールとして使用されるようにこの視覚記事の大きな喜びです。
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Disclosures
全ての実験は、大学の動物ケア委員会によって承認され、動物のケアに関するカナダの協議会のガイドラインに準拠していましたされています。
Acknowledgments
著者は、技術的な相談のための博士アナCotrimへと機器のMurshed博士Monzurに感謝しています。この作品は、部分的に保健研究のためのカナダの協会によって資金を供給された。
Materials
| Name | Type | Company | Catalog Number | Comments |
| Atropine | Drug | Fluka | 11330 | To inhibit saliva secretion |
| Ketamine | Drug | Phoenix Scientific | Sedation | |
| Xylazine | Drug | Phoenix Scientific | ||
| Polyethylene tubing (0.58 mm diameter) | Tube | Intramedic | 427410 | To insert over tip of needle to avoid tissue injury during insertion into Wharton’s duct. |
| Ultra Comfort Insulin syringe (with a 29G needle) | Syringe | Tyco Healthcare, Covidien | 600145 | |
| 4% trypan blue | Stain | GIBCO, by Life Technologies | 15250 |
References
- Fox, P. C. Acquired salivary dysfunction. Drugs and radiation. Ann N Y Acad Sci. 842, 132-137 (1998).
- Bhide, S. A., Miah, A. B., Harrington, K. J., Newbold, K. L., Nutting, C. M. Radiation-induced xerostomia: pathophysiology, prevention and treatment. Clin Oncol (R Coll Radiol). 21, 737-744 (2009).
- Redman, R. S., Ball, W. D., Mezey, E., Key, S. Dispersed donor salivary gland cells are widely distributed in the recipient gland when infused up the ductal tree. Biotech Histochem. 84, 253-260 (2009).
