Summary
Mast hücreleri ve bazofillerin aktivasyonuyla karakterize alerjik tepkiler, IgE çapraz bağlanması ve proenflamatuar aracıların salınması ile tahrik edilmektedir. Alerjik tepkilerin bir kantitatif olarak değerlendirilmesi allerjen vasküler geçirgenlikte değişiklikleri izlemek için Evans mavisinin kullanılması sureti ile elde edilebilir.
Abstract
Alerjik tepkiler, mast hücreleri ve bazofiller ve vazoaktif ve proenflamatuvar medyatörlerin, bunu takiben de aktivasyonu sonucudur. Bir hassaslaşmış bireyde bir alerjene maruz kalma küçük eritemden hayatı tehdit eden anafilaksi farklılık klinik semptomlara neden olabilirler. Laboratuvarda, çeşitli hayvan modelleri alerjik yanıtları sürüş mekanizmalarını anlamak için geliştirilmiştir. Bu yazıda, lokalize alerjik yanıtları ölçmek için damar geçirgenliği değişiklikleri ölçmek için ayrıntılı bir yöntem açıklanmaktadır. Yerel anafilaksi tahlil, ilk 1920'lerde bildirildi ve Kojima ve arkadaşları tarafından yayınlanan tekniği adapte edilmiştir. 2007 yılında 1. Bu testte, OVA duyarlı farenin araç ile sol kulak ve OVA ile sağ kulakta zorlanmaktadır. Bu Evans Mavisi damardan enjeksiyonu ile takip edilir. On dakika sonra enjekte Evans mavisi, hayvanda damar dışına olan boya ötenazi yapılmış ve birkulaklara formamidde gecede ekstre edilir. Ekstre boyanın absorbans daha sonra bir spektrofotometre ile ölçülür. Bu yöntem güvenilir bir lokal allerjik yanıtın görsel ve ölçülebilir tezahürü sonuçlanır.
Introduction
Tip I hipersensitivite, mast hücrelerinin ve bazofillerin yüzeyi üzerindeki IgE, antijen ile indüklenen çapraz-bağlanma ile aracılık eder. Bu hücre degranülasyonunu ve histamin, triptaz ve trombosit aktive edici faktör gibi vazoaktif 2 ve proenflamatuvar medyatörlerin salınmasına yolaçar. Degranülasyonunun sırasında önceden oluşturulmuş aracıların yayımlanmasının ardından, mast hücreleri sentez ve daha fazla damar geçirgenliği 3 artış sağlayan prostaglandin ve lökotrienler bırakın. İlk klinik yanıt hızlı bir şekilde oluşur ve "acil reaksiyonu" olarak adlandırılır. Deride, bir pervaz ve şişlik tepki antijenin dakika içinde kolayca görülebilir olduğu anlamındadır. Meydan dozuna bağlı olarak, bir "geç faz tepkisi" bir kaç saat sonra görmek mümkündür. Geç faz şişlik dokulara 2 içine lokalize ödem ve lökosit işe kaynaklanmaktadır. Histamin, genellikle katılan önemli arabulucu olarak kabulani alerjik tepkiler, 1 (HR1) kaplar ve histamin reseptörü 2 (HR2) düz kasında eksprese ifade histamin reseptörü üzerine etki eder. Kombine etki, inflamasyon 4 bölgesinde kan akışını ve damar geçirgenliğini artırır.
Alerji hayvan modellerinde çeşitli alerjik astım, sistemik anafilaksi ve yerel anafilaksi modelleri dahil alerjik iltihabı dahil mekanizmaları, incelemek amacıyla geliştirilmiştir. Intravenöz boya uygulama yayınlar 1920'lerde 5 geri Bu teknik Bayan açıklayan, neredeyse bir yüzyıl için hayvan modellerinde lokalize alerjik tepkileri ölçmek için kullanılır olmuştur. Tavşanlar ve kobay ani hipersensitivite reaksiyonları test etmek için kullanılan ilk hayvan modelleri vardı ve en hassas yanıtlar genellikle kulakta 5,6 bulundu. Tahlil daha sonra sıçanlarda 7 ve farelerde 8 kullanılmak üzere onaylandı.
Tarihsel olarak,Deney çeşitli yöntemler önceki boya enjeksiyon, boya enjeksiyondan önce antijen enjeksiyonundan antijen enjeksiyonu ve boya ve antijenin eş zamanlı olarak enjeksiyonu da dahil olmak üzere, kullanılmıştır. Alerjik yanıtların ölçülmesi için bir vasıta olarak intravenöz uygulama boya pasif ve aktif ölçmek için ikinci ve pasif reaksiyonlar 5,9 ters edilebilir çok yönlü bir deneyidir. Sayısız boyalar Tripan Blue, Pontamine Sky Blue, Evans Blue, Geigy Mavi 536 ve Hindistan Mürekkep 5,6,9 dahil alerjik yanıtları, değerlendirmek için kullanılmıştır. % 0.5 Evans mavisi çözeltisi halen deri alerjik yanıtı ölçmek için kullanılan standart bir boyadır.
Meydan anafilaktik cevap kısa süreli olduğu; maksimum yoğunluğu, 10 içinde ulaşılır - boya enjeksiyonunun 15 dakika ve boya ne olursa olsun, kullanılan 9 hayvan türlerinin, cebine fazla 30 dakika tatbik edilirse, herhangi bir tepki görülebilir. Boya ekstravazasyon Kantitasyonu özgünıy mavi boya 7-9 ile gösterildiği gibi kabarıklık büyüklüğü ölçülerek elde edilmiştir. Buna ek olarak, granüle mast hücre sayımları, reaksiyon ortamının cilt dokusunun kesilmesi ve 7 mavi toluidin ile lekeleme ile tayin edilebilir. Mast hücreleri, yüksek afinite IgE reseptörü eksprese FcεRI ana yerel hücre popülasyonu olarak mast hücre degranülasyonu, genellikle, deri altı, IgE aracılı alerjik karşılıkları için bir işaretleyici olarak kullanılmaktadır. Doku içine boya ekstravazasyonunu ölçmek için spektrofotometrik teknikler 1990 yılında sıçan 10 ve fare 11 pasif deri anafilaksi (PCA) için geliştirilmiştir.
Aşağıda yerel anafilaksi Deney protokolü. Kojima ve bunlar 1 ila uyarlanmış ve allerjik tepkileri ortaya çıkarmak için antijen olarak tavuk yumurtası (OVA) kullanır edildi. Bununla birlikte, istenirse OVA başka antijenler de kullanılabilir. Tahlil sonra vasküler Geçirgenlik değişiklikleri izlemek için Evans Mavi boya kullanırHücre IgE çapraz bağlanması ve histamin salgısını mast nedeniyle meydana y.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
1. duyarlı Fareler
- 20 mg / ml 'lik nihai bir konsantrasyona kadar 1x PBS OVA seyreltilmesi ile bir OVA stok çözelti hazırlayın. Gelecekte kullanılmak üzere -80 ° C'de cryovials ve mağaza alikotları aşağı dondurun.
- Oda sıcaklığında 20 mg / mL OVA stoklar bir veya daha fazla alikotları getir. Bir kapağa sahip olan bir 5 ml polistiren yuvarlak tabanlı tüpü içinde, 1 mg / ml 'lik bir son konsantrasyona PBS içinde 1x OVA seyreltin. Vortex kısaca karıştırın.
- : 1 oranında orta hızda ayarlanan bir girdap 1 mg / ml OVA içeren polistiren tüpü tutarken, bir 1 üretmek üzere tüp vorteks devam ederken, iyice homojenleştirilmiştir Imject Alum (40 mg / ml) damla damla, bir eşit hacim kazandırmak immünojene Şap.
- Girdaba boru ve boru üzerinde bant kapağını yerleştirin. Düşük ayarda vorteks açın ve OVA 30 dakika boyunca Alum'un tutunmasını sağlar.
- Zaman büyük miktarda OVA / Alum hazırlanması ve fareler hassaslaştıncı arasında geçmesine izin vermeyin. Hassaslaşması OVA / Şap preparatın sonra doğrudan tamamlanmış edilemezseOda sıcaklığında iyonu deposu OVA / şap. Kullanmadan önce, 1 dakika vorteksleyin.
- OVA / Şap karışımı ile 1 ml insülin şırınga yükleyin. 27 gauge'lik bir iğne kullanılarak şırınga kapağı.
- OVA 'nın 50 ug Alum ve 2 mg fare başına bir doz için, BALB / c farelerinin periton içine OVA / Alum 100 ul enjekte edilir.
- Negatif kontrol için, PBS uygulanan farelerin başka bir grup duyarlı. OVA çıkararak Yukarıda listelendiği gibi aynı şekilde Alum ve PBS'nin 1: 1 karışımı hazırlayın.
- 3 enjeksiyondan toplam 3 hafta boyunca haftada bir kez tüm fareleri (OVA ve PBS kontrol) duyarlı. Son enjeksiyondan sonra, yerel anafilaksi deneyini gerçekleştirmeden önce en az 2 hafta bekleyin.
2. Yerel Anafilaksi Deneyi
- Oda sıcaklığına OVA stok çözüm getirecek. (: 1X PBS OVA 4 seyreltme 1), 1.5 ml mikrosantrifüj tüpü olarak, PBS ile 5 mg / ml 'lik nihai bir konsantrasyona kadar 20 mg / ml stok OVA seyreltin. Vortex kısaca karıştırın.
- RC 2 <kullanarak fareler anestezi/ Sup> Kemirgen Anestezi Sistemi (veya benzer buharlaşmış dağıtım sistemi). Izofluran ile doldurun, ve O 2 hava akımını açın. Indüksiyon odasında Yeri farenin ve Anesthetization başlatmak için% 5 izofluran kumanda düğmesini ayarlayın. Farenin tamamen uyuşturulduktan sonra, hareketlilik eksikliği ile gösterilen, derin Anesthetization korumak için% 3 izofluran kumanda düğmesini ayarlayın. Bu prosedürde anestezi amacı, hayvan hareketsizleştirmektir. Kulak ve kuyruk ven enjeksiyonları hayvana ciddi ağrı veya sıkıntı yok.
NOT: İsofluranın insan üreme sistemi üzerinde olumsuz etkileri olabilir. Atık gazın etkisiz hale getirmek için iyi havalandırılan bir odada kullanmak ve indüksiyon odasına bir atma bidonu eklemek için emin olun. Izofluran kullanırken hamile iseniz, maruziyeti en aza indirmek için bir karbon filtre maske takmalıdır. - Yük bir 31 G iğne ile kapatılmış bir 3/10 cc'lik bir şırıngaya insülin 5 mg / ml OVA 10 ul. 10 ul başka bir 3/10 cc şırınga insülin yük1x PBS ile yıkandı.
- Diseksiyon mikroskobu kullanarak, OVA 50 ug bir meydan okuma doz için bir anestezi fare sağ kulağına OVA 10 ul enjekte. Diğer dozlar, örneğin, 20 ug olarak da kabul edilebilir.
- 15 ml konik tüp etrafında seloteyp bant (yapışkan tarafı yukarı) wrap, enjeksiyon için kulak stabilize etmek. Teybe sağ kulağının dorsal yüzü sabitleyin. Kulak, iki yaprak arasındaki iğne konik tarafı yerleştirin. Yavaşça herhangi bir kan damarlarını vurmak için özen, kulak doku merkezi haline OVA enjekte.
- Yukarıda tarif edilen aynı yöntem kullanılarak, bir negatif kontrol olarak, sol kulağa 10 ul PBS enjekte edilir.
- 3 dakika bekleyin.
- Bu süre içinde, bir süzgeç içinde fare ve 1 dakika kan damarlarını genişletmek için bir ısı lambası altına veya sıcak su banyosu içinde kuyruk tutun.
- Yavaşça kuyruk v içine% 0.5 Evans mavisi 200 ul enjekte bir 27 G iğne ile kapatıldı 1 ml'lik şırınga kullanarak insülinfare ein. Tüm 200 ul önce damar yapısını tahrip olabilir Rapid enjeksiyonu uygulanır. Bu durumda, kuyruk karşı tarafında ven içine boyanın geri kalan hacim enjekte çalışır.
- 10 dakika bekleyin.
- Fareyi Euthanize ve forseps ve cerrahi makas kullanılarak hem kulaklarını çıkarın.
- Basınç kulak merkezinde enjeksiyon sahaya uygulanır; emin, forseps ile kulak kenarları al. Yakın kesim ile mümkün olduğu kadar çok kulak doku çıkarın, ancak boydan boya olmayabilen, kulak tabanında kıkırdak mevcut olan sırt. Kürk küçük miktarlarda kesilerek çıkarılmış kulak üzerinde mevcut olabilir; Bu, deneyin etkilemez.
- Kısım bir 1.5 ml mikrosantrifüj tüpleri içine formamit 700 ul. Kulak başına bir tüp (fare başına iki tüp) hazırlayın.
NOT: Formamide, teratojenik, mutajenik ve tahriş edicidir. Eldiven, koruyucu gözlük ve yüz koruyucu giyin. Bir tutarken Hamile kadınlar dikkatli kullanmalıdırs formamıd fetotoksik olabilir. - , Formamıd tüpler kap ve 63 ° C'ye ayarlanmış kuru bir ısı banyosu gecede inkübe kulakları ekleyin. Kulaklar hala kuluçkadan sonra biraz mavi görünebilir; Ancak boyanın çoğunluğu formamid içine ekstre edilir.
- 96 oyuklu bir plaka için, iki kopya halinde, her bir numune 300 ul ilave edin. Bu numune içerisinde mevcut olması halinde kürk aktarılmasını önlemek. Kuyu içinde mevcut hava kabarcığı vardır ki bunlar absorbans okumasını etkileyecek şekilde sağlanması.
- 96 gözlü plaka, iki kopya halinde, formamid 300 ul ilave edin. Bu kuyular, blok olarak kullanılacaktır.
- 620 nm'de absorbans ölçümü için bir spektrofotometre kullanılır. Her örnek okuma Çıkar formamiddir kuyular.
Not: Bütün deneyler Kuvvetler Üniversitesi Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi tarafından onaylanmış protokolleri altında yapıldı.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Başarıyla tahlil geçirmiş hayvanların deri ve mavi görünür gözleri vardır. PBS duyarlı hayvanlar bu nedenle hem kulaklar beyaz (Şekil 1A) kalmalıdır, PBS veya OVA da tepki olmamalıdır. OVA hassas hayvanlarda PBS meydan alan kulak (sol) tamamen beyaz veya enjeksiyon bölgesinde lokal bir şekilde hafifçe mavi olarak olmalıdır. OVA alan kulak (sağ) bir boya uygulama için (Şekil 1B) sonra 10 dakika boyunca aşamalı olarak koyu mavi olmalıdır.
PBS duyarlı hale getirilmiş hayvanlar, PBS ve OVA (Şekil 2A) hem de ihmal edilebilir absorbans okumaları olacaktır. OVA sensitize hayvanlar için PBS püskürtülmesi, genellikle 0.13 ve ortalama absorbans okuması ve 0.04 arasında bir standart sapma ile sonuçlanır. Bunun tersine, 0.58 ortalama absorbans okuması ve 0.18 arasında bir standart sapma bir 50 ug OVA yüklemesi sonuç (kurgusaat'in 2B). Gerektiğinde meydan okuma için kullanılan OVA miktarı Ayrı deneyler için ayarlanabilir. Örneğin, 0.30 ve 0.10 ortalama absorbans (Şekil 2C) bir standart sapma bir 20 ug OVA yüklemesi sonucu, 20 mg daha az tam bir meydan okuma güvenilir bir sonuç vermeyebilir. OVA konsantrasyonunda değişiklikler optimize edilmiş ve kullanımdan önce doğrulanması gerekir.
PBS absorbans OVA absorbans karşılaştırıldığında ile Sonuçlar grafiksel, eşleştirilmiş olabilir. Seçenek olarak ise, sonuçlar her bir hayvan için OVA absorbans çıkartılır PBS absorbansla, tek bir değer olarak çizilmiştir olabilir.
Şekil 1: PBS ve OVA duyarlı hayvanlarda Kulak pigmentasyon. (A). PBS içinde Kulak pigmentasyon hayvanlar duyarlı. 5 ile meydan (PBS ile meydan), sol kulak ve sağ kulak (0 ug OVA) hiçbir boya ekstravazasyona az göstermek. (B). OVA duyarlı hayvanlarda kulak pigmentasyon. Mavi boya ekstravazasyon yokluğu ile gösterildiği gibi (PBS ile enfekte edilmiş), sol kulak hiç bir alerjik tepki vardır. (50 ug OVA ile enfekte edilmiş) sağ kulak artmış vasküler geçirgenlik, kulak dokusundaki hücrelerin aktivasyonu için bir doğrudan bir sonucu gösteren bir parlak mavi boyama gösterir.
Şekil 2: OVA duyarlı hayvanlar için Örnek OD değerleri 620 nm'de spektrofotometrik alındığı ölçümlerinden elde edilen OD değerlerinin (A)... PBS hassaslaştırılmış hayvanlarda 50 ug OVA yüklemesi. Hem PBS ve OVA için OD değerleri önemsizdir. (B). OVA hassaslaştırılmış hayvanlarda 50 ug OVA yüklemesi. OD değerleri PBS sonuçlara meydan okuma <0.2 ve OVA meydan resuOD değerleri lt> 0.3. (C). 20 ug OVA meydan okuma. OD değerleri PBS sonuçlara meydan okuma <0.2. Doğru kulakları hafifçe kullanılan OVA küçük bir meydan doz nedeniyle OD değerlerimizi azalttık.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Alerjik hastalıkların sayıda belirteçleri havayolu meydan ortamda bronkoalveolar sıvı dolaşması histamin Th2 sitokin üretimi ve hücre işe seviyelerindeki değişiklikler dahil olmak üzere, alerji yapıcının aşağıdaki alerjik cevaplar, gücünü değerlendirmek için kullanılır. Bu parametrelerdeki değişiklikleri izleme alerjik reaksiyonlara eğitim için önemli olmakla birlikte, biyolojik belirteçlerin her zaman klinik alerjik hastalığı ile ilişkili değildir. Bu protokol açıklanan yerel anafilaksi tahlil lokalize alerjik hastalık için bir bağıntısı olarak lokalize damar geçirgenliğinin tekrarlanabilir ölçüm sağlar. Mavi boya ekstravazasyonu kullanarak, bu protokol, görselleştirme ve lokalize bir alerjik reaksiyon nispi miktarını hem de sağlar. Klinik puanlama güvenmek alerji deneylerinde tersine, (spektrofotometrik absorbans ile ölçüldüğü gibi bir mavi boya ekstravazasyonu) Bu deney, birincil sonuç kolayca gözlemci önyargı tabi değildir. Başka advantage hayvanlar potansiyel olarak boya ve alerji yapıcının uygulanmasından kaynaklanan herhangi bir rahatsızlık sınırlayıcı, kısa bir süre sonra hayvanlar kurban cebine olmasıdır. Akiyama ve diğerleri. 10 tarafından tarif edilen bir elle tutulan bir spektrofotometre alternatif kullanım vasküler geçirgenlikte değişiklikleri sürekli ölçülmesi için izin verir. Bununla birlikte, Evans Mavisi boya toksiktir, ve enjeksiyon sonunda hayvanlar ötenazi belirtilmesi gereken yol açacaktır.
Bu tahlil güçlü bir numarası vardır, biraz teknik açıdan zor olma sınırlama var. Güvenilir sonuçlar tutarlı ve başarılı kulak ve kuyruk ven enjeksiyonları bağlıdır. Bütün Uygulama dozu kulağa tatbik değilse Evans Mavisi damardan enjeksiyon tam değilse, bir kan damarı delinerek belirgin kulak enjeksiyon daha ya da hayvan analiz dışında olunmalıdır. Laboratuvarımızda, araştırmacılar seve için intradermal kulak enjeksiyonları uygulama vardıyeterliklerinin geliştirilmesi önce ral hafta. Buna ek olarak, bu deney için uygun kontroller çalıştırmak için önemlidir. Hayvanlar iğnenin neden olduğu hasara biraz farklı tepki gibi spesifik olarak PBS enjeksiyonu rutin olarak, bir iç kontrol olarak kullanılmalıdır. PBS okuma enjeksiyon kendisi neden olduğu vasküler geçirgenliği değişiklikler için bir temel ölçü verir. İntradermal kulak enjeksiyonları kullanılarak yerine, tahlil farelerde arka cilde tatbik edilebilir. Müfettişler ek olarak, aynı anda birden fazla antijenlerin test için izin verir, bu yolu daha az teknik olarak zor bulmak, ve olabilir.
Uygulama dozu deneye bağlı olarak manipüle edilebilir yerel anafilaksi deney, son derece çok yönlüdür. Alerjik tepkiler değişim bakmak gerekirse, bu gibi 20 ug gibi, bir düşük değerli OVA yükleme dozu kullanmak yararlı olabilir. Bu durum, absorbans değişiklikleri izleme artan hassasiyet sağlarhücre aktivasyonu için doyma noktası ulaşmış olacağını olasılığı daha az olacaktır.
Buna ek olarak, bu deney, pasif kutanöz anafilaksi (PCA) etkilerini incelemek için kullanılabilir. Bu ortamda antijen-spesifik IgE diğer içine bir kulak ve araç enjekte edilir. 24 saat sonra, hayvanlar antijen ve Evans Mavisi damardan bir sorun verilir. PCA modeli deney, kullanılan hayvanların sayısını tamamlamak için gereken zamanı azaltmak ve araştırmacılar IgE çapraz bağlama spesifik etkileri bakmak için izin verebilirsiniz.
Uzun sürüyor gerçekleştirmek rağmen, bu yazıda anlatılan aktif deri anafilaksi (ACA) modeli kullanarak bazı avantajları vardır. Hassaslaşması genellikle sistemik olduğunu ve insanlar genellikle dolaşımda alerjen spesifik IgE ve IgG hem de sahip olduğu haftalık kalma yoluyla hassasiyeti, taklit eder bireylerin alerjik hastalığı gelişebilir hangi süreci antijen. IgE çapraz bağlama ma birincil yolu iseSt hücre degranülasyonu, mast hücreleri, aynı zamanda çapraz bağlanma, IgG yanıt. Araştırmacılar sadece IgE aracılı hastalık ilaveten alerjik tepkilerin mekanizmalarını incelemek için bu nedenle, ACA modeli sağlar. Ikinci sensitizasyon yöntem araştırmacının takdirine bırakılmıştır Sonuç olarak, lokal bir anafilaksi tahlil çok yönlüdür ve duyarlılık gibi çeşitli yöntemler kullanılabilir.
Kulak şişme, allerjik tepkileri değerlendirmek için yaygın olarak kullanılan bir işaretleyici de OVA sonra ölçülebilir. Biz, OVA ile tehdit kulaklar 1 saat sonrası enjeksiyon PBS ile tehdit kulak şişmesini önemli ölçüde daha fazla olduğu bulunmuştur. Evans Mavisi, test aksine, ölçümler ekstravazasyon boya ve ölçüm cihazlarını kullanırken kulak kalınlığı kulak sıkıştırılması ile değiştirilebilir olarak araştırmacılar arasında daha büyük bir çeşitlilik gösterirler daha az hassas olduğu, kulak kalınlığını gözlemledik.
Fare dışındaki suşlarıBALB / c yerel anafilaksi tayini için kullanılabilir; Ancak absorbans okumaları kullanılan suşu bağlı olarak biraz değişir. Güçlü Th2 yanıtları geliştirmek için eğilimi için, BALB / c fareleri, genellikle bu deneyde, güvenilir ve tekrarlanabilir bir okuma üretir.
Bu deney, çeşitli antijenlere karşı duyarlı hayvanlarda lokal alerjik yanıtların ölçümü sağlar. Tahlil başarılı bir şekilde OVA ve anahtar deliği limpet hemosiyanin (KLH) gibi genel alerjenlere ile gerçekleştirilmiştir gibi antijen seçimi, esnektir. Ayrıca, sensitizasyon yerine bir lokal alerjik reaksiyon antikorları enjekte edilerek saf bir hayvanda ortaya olabilir bazofiller ve mast hücreleri üzerindeki çapraz bağ IgE veya IgE reseptörlerine ya da CD200R3 1 gibi bu hücreler üzerindeki IgE olmayan aktivasyon reseptörlerine bağlanarak .
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| BALB/c Mice | The Jackson Laboratory | 651 | |
| PBS pH 7.4 | Quality Biologic | 114-058-101 | |
| Ovalbumin | Sigma | A5503-10G | |
| Imject Alum | Thermo Scientific | 77161 | Mix thoroughly before use |
| Evans Blue Dye | Sigma | E2129 | |
| Formamide | Sigma | 295876 | 99%+ Spectrophotometric grade |
| Isoflurane, USP | Phoenix | NDC 57319-474-06 | |
| 1cc Insulin syringes | BD | 329654 | |
| 3/10 cc Insulin syringe with 31 G needle | Terumo | NDC 100861 | |
| 27 G Needles | BD | 305109 | |
| Forceps | F.S.T. | 11000-12 | |
| Surgical scissors | F.S.T. | 14070-12 | |
| 5 ml Polystyrene round-bottom tubes | BD Falcon | 352058 | |
| 1.5 ml Microcentrifuge tubes | Medical Supply Partners | 15-1151 | |
| 15 ml Conical tubes | BD Falcon | 352097 | |
| Flat-bottom 96 well plate | Costar | 3590 | |
| Scotch tape | |||
| RC2 Rodent Anesthesia System | VetEquip | 922100 | |
| Vortex Genie 2 | Scientific Industries | SI-0236 | Model G560 with 3 inch platform |
References
- Kojima, T., et al. Mast cells and Bbasophils are selectively activated in vitro and in vivo through CD200R3 in an IgE-independent manner. The Journal of Immunology. 179 (10), 7093-7100 (2007).
- Parikh, S. A., Cho, S. H., Oh, C. K. Preformed enzymes in mast cell granules and their potential role in allergic rhinitis. Current Allergy and Asthma Reports. 3 (3), 266-272 (2003).
- Amin, K. The role of mast cells in allergic inflammation. Respiratory Medicine. 106 (1), 9-14 (2012).
- Nakaya, M., Takeuchi, N., Kondo, K. Immunohistochemical localization of histamine receptor subtypes in human inferior turbinates. Annals of Otology, Rhinology & Laryngology. 113 (7), 552-557 (2004).
- Ramsdell, S. G. The use of Trypan Blue to demonstrate the immediate skin reaction in rabbits and guinea pigs. The Journal of Immunology. 15 (4), 305-311 (1928).
- Chase, M. W. Studies on the sensitization of animals with simple chemical compounds: X. Antibodies inducing immediate-type skin reactions. The Journal of Experimental Medicine. 86 (6), 489-514 (1947).
- Goose, J., Blair, A. M. J. N. Passive cutaneous anaphylaxis in the rat, induced with two homologous reagin-like antibodies and its specific inhibition with disodium cromoglycate. Immunology. 16, 749-760 (1969).
- Ovary, Z.
- Ovary, Z. Immediate reactions in the skin of experimental animals provoked by antibody-antigen interactoin. Progress in Allergy. 5, 459-508 (1958).
- Akiyama, H., et al. Quantitiative evaluation of passive cutaneous anaphylaxis (PCA) using a hand-held spectrophotometer. Biological & Pharmaceutical Bulletin. 19 (8), 1112-1114 (1996).
- Teshima, R., et al. Simple spectrophotometric analysis of passive and active ear cutaneous anaphylaxis in the mouse. Toxicology Letters. 95 (2), 109-115 (1998).
