Encyclopedia of Experiments: Biology
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- Pour commencer, placez une éponge humide avec une fente sur une boîte de Pétri. Ensuite, anesthésiez un poisson adulte avec une solution de tricaine et transférez-le soigneusement dans la fente avec le côté ventral face vers le haut. Placez la boîte de Pétri sous un microscope stéréo et observez le mouvement du cœur battant sous la peau.
Placez une aiguille de mincroinjection à un angle de 45 degrés par rapport à l’axe du corps au-dessus du cœur battant situé entre l’operculum et la ceinture pectorale. Doucement, avancez l’aiguille à travers la peau dans le péricarde, une mince membrane qui entoure le cœur. Livrer le mélange d’injection dans le péricarde.
Le projectile contient un colorant traceur tel que le rouge phénol pour suivre le mouvement des solutions. Retirez l’aiguille du thorax. Transférez immédiatement le poisson dans le réservoir de récupération contenant de l’eau du système et surveillez-le pour une récupération complète de l’anesthésie. Dans le protocole suivant, nous effectuerons une injection intrathoracique pour fournir un composé d’essai et examiner ses effets sur la régénération cardiaque.
- Utiliser un filet pour attraper un poisson adulte et le transférer dans la solution anesthésique. Au bout d’une à deux minutes, lorsque le poisson cesse de nager et que le mouvement de l’operculum est réduit, touchez le poisson avec une cuillère en plastique pour vous assurer qu’il ne réagit à aucun contact. Ensuite, transférez rapidement et soigneusement le poisson dans la rainure de l’éponge humide avec le côté ventral vers le haut. La tête du poisson doit pointer du côté dominant de l’opérateur.
Sous le microscope stéréo, observez attentivement le mouvement du cœur battant sous la peau du poisson. Visuellement, déterminez le point d’injection au-dessus du cœur battant et au milieu du triangle défini par les plaques cartilagineuses ventrales. Insérez la pointe du capillaire à un angle compris entre 30 et 45 degrés par rapport à l’axe du corps. Pénétrer doucement la peau avec la pointe du microcapillère dans le péricarde.
Une fois que l’aiguille est à l’intérieur du péricarde, appuyez sur la pédale du dispositif de microinjecteur pour compléter l’injection. Après l’injection, retirez doucement le capillaire du thorax et transférez immédiatement le poisson dans un réservoir avec de l’eau du système pour la récupération. Surveillez le poisson jusqu’à la récupération totale de l’anesthésie. Analyser les effets de l’injection, recueillir le cœur au moment désiré et le préparer à une analyse plus poussée.
