Encyclopedia of Experiments: Biology
A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.
Transcript
Please note that all translations are automatically generated.
- Для начала поместите влажную губку с разрезом на чашку Петри. Далее, обезболите взрослую рыбу с трикаином раствором и аккуратно перенесите ее в щель с вентральной стороной вверх. Поместите чашку Петри под стерео микроскоп и наблюдайте за движением бьющееся сердце под кожей.
Располагайте минкроинъекцию иглы под углом 45 градусов от оси тела над бьющимся сердцем, расположенной между оперкулом и грудным поясом.
Снимок содержит трассировщик красителя, такого как фенол красный для отслеживания движения растворов. Свяжте иглу из грудной клетки. Перенесите рыбу сразу в восстановительный резервуар, содержащий системную воду, и проследуйте за ней для полного восстановления после анестезии. В следующем протоколе мы выполнем внутриторакальной инъекции для доставки испытательного соединения и изучения его влияния на регенерацию сердца.
- Используйте сетку, чтобы поймать взрослую рыбу и передать ее в обезболивающее решение. Через одну-две минуты, когда рыба перестанет плавать и движение оперкулума уменьшается, коснитесь рыбы пластиковой ложкой, чтобы убедиться, что она не реагирует на любой контакт. Далее, быстро и осторожно перенесите рыбу в паз мокрой губки с вентральной стороной вверх.
Под стерео микроскопом внимательно наблюдайте за движением бьющееся сердца под кожей рыбы. Визуально определите точку инъекции над бьющимся сердцем и в середине треугольника, определяемого желудочковой картилагинальной пластиной. Вставьте кончик капилляра под углом от 30 до 45 градусов относительно оси тела.
Как только игла находится внутри перикардия, нажмите на педаль микроинъектора устройства для завершения инъекции. После инъекции аккуратно вывихите капилляр из грудной клетки и немедленно перенесите рыбу в бак с системной водой для восстановления.
