Encyclopedia of Experiments: Biology
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Transcript
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- Per iniziare, posizionare una spugna bagnata con una fessura su una piastra di Petri. Successivamente, anestetizzare un pesce adulto con soluzione di tricaina e trasferirlo con cura nella fessura con il lato ventrale rivolto verso l'alto. Posizionare la piastra di Petri al microscopio stereo e osservare il movimento del cuore pulsante sotto la pelle.
Posizionare un ago di mincroiniezione con un angolo di 45 gradi dall'asse del corpo sopra il cuore pulsante situato tra l'opercolo e la cintura pettorale. Delicatamente, far avanzare l'ago attraverso la pelle nel pericardio, una membrana sottile che circonda il cuore. Fornire il mix di iniezione nel pericardio.
Lo scatto contiene un colorante tracciante come il rosso fenolo per tracciare il movimento delle soluzioni. Ritirare l'ago dal torace. Trasferire immediatamente il pesce nel serbatoio di recupero contenente acqua di sistema e monitorarlo per il completo recupero dall'anestesia. Nel seguente protocollo eseguiremo un'iniezione intratoracica per fornire un composto di prova ed esaminarne gli effetti sulla rigenerazione cardiaca.
- Utilizzare una rete per catturare un pesce adulto e trasferirlo nella soluzione anestetica. Dopo uno o due minuti, quando il pesce smette di nuotare e il movimento dell'opercolo è ridotto, toccare il pesce con un cucchiaio di plastica per assicurarsi che non reagisca a nessun contatto. Successivamente, trasferire rapidamente e accuratamente il pesce nel solco della spugna bagnata con il lato ventrale verso l'alto. La testa del pesce dovrebbe puntare lontano dalla mano dominante dell'operatore.
Al microscopio stereo, osservare attentamente il movimento del cuore pulsante sotto la pelle del pesce. Visivamente, determinare il punto di iniezione sopra il cuore pulsante e al centro del triangolo definito dalle placche cartilaginee ventrali. Inserire la punta del capillare con un angolo compreso tra 30 e 45 gradi rispetto all'asse del corpo. Penetrare delicatamente la pelle con la punta del microcapillare nel pericardio.
Una volta che l'ago si trova all'interno del pericardio, premere il pedale del dispositivo del microiniettore per completare l'iniezione. Dopo l'iniezione, ritirare delicatamente il capillare dal torace e trasferire immediatamente il pesce in un serbatoio con acqua di sistema per il recupero. Monitorare il pesce fino al recupero totale dall'anestesia. Per analizzare gli effetti dell'iniezione, raccogliere il cuore nel momento desiderato e prepararlo per ulteriori analisi.
