Encyclopedia of Experiments: Biology
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Transcript
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- Para começar, coloque uma esponja molhada com uma fenda em uma placa de Petri. Em seguida, anestesiar um peixe adulto com solução de tricaine e transferi-lo cuidadosamente para a fenda com o lado ventral voltado para cima. Coloque a placa de Petri sob um microscópio estéreo e observe o movimento do coração batendo sob a pele.
Posicione uma agulha de mincroína em um ângulo de 45 graus do eixo do corpo acima do coração pulsante localizado entre o operículo e a cintura peitoral. Suavemente, avance a agulha através da pele para o pericárdio, uma membrana fina que envolve o coração.
O tiro contém um corante rastreador como o vermelho fenol para rastrear o movimento das soluções. Retire a agulha do tórax. Transfira o peixe imediatamente para o tanque de recuperação contendo água do sistema e monitore-o para recuperação completa da anestesia. No protocolo a seguir, realizaremos uma injeção intratorácica para fornecer um composto de teste e examinar seus efeitos na regeneração cardíaca.
- Use uma rede para pegar um peixe adulto e transfira-o para a solução anestésico. Após um a dois minutos, quando o peixe parar de nadar e o movimento do operculum for reduzido, toque no peixe com uma colher de plástico para garantir que ele não reaja a qualquer contato. Em seguida, transfira o peixe para o sulco da esponja molhada com o lado ventral para cima.
Sob o microscópio estéreo, observe cuidadosamente o movimento do coração pulsante sob a pele do peixe. Visualmente, determine o ponto de injeção acima do coração pulsante e no meio do triângulo definido pelas placas cartilaginosas ventrais. Insira a ponta do capilar em um ângulo entre 30 e 45 graus em relação ao eixo corporal.
Uma vez que a agulha esteja dentro do pericárdio, pressione o pedal do dispositivo microinjetor para completar a injeção. Após a injeção, retire suavemente o capilar do tórax, e transfira imediatamente o peixe para um tanque com água do sistema para recuperação. Monitore o peixe até a recuperação total da anestesia. Para analisar os efeitos da injeção, colete o coração no ponto de tempo desejado e prepare-o para análise posterior.
