Encyclopedia of Experiments: Biology
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Transcript
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- Um zu beginnen, legen Sie einen nassen Schwamm mit einem Schlitz auf eine Petrischale. Als nächstes beastheisieren Sie einen erwachsenen Fisch mit Tricain-Lösung und übertragen Sie ihn vorsichtig in den Schlitz mit der ventralen Seite nach oben. Legen Sie die Petrischale unter ein Stereomikroskop und beobachten Sie die Bewegung des schlagenden Herzens unter der Haut.
Positionieren Sie eine Mincroinjection-Nadel in einem 45-Grad-Winkel von der Körperachse über dem schlagenden Herzen zwischen dem Operculum und dem Brustgürtel. Bringen Sie die Nadel sanft durch die Haut in das Perikard, eine dünne Membran, die das Herz umgibt. Geben Sie die Injektionsmischung in das Perikard.
Der Schuss enthält einen Tracerfarbstoff wie Phenolrot, um die Lösungsbewegung zu verfolgen. Ziehen Sie die Nadel aus dem Thorax. Übertragen Sie den Fisch sofort in den Rückgewinnungsbehälter mit Systemwasser und überwachen Sie ihn auf die vollständige Erholung von der Anästhesie. Im folgenden Protokoll führen wir eine intrathorakale Injektion durch, um eine Testverbindung zu liefern und ihre Auswirkungen auf die Herzregeneration zu untersuchen.
- Berühren Sie den Fisch nach ein bis zwei Minuten, wenn der Fisch aufhört zu schwimmen und die Bewegung von Operculum wird reduziert, berühren Sie den Fisch mit einem Plastiklöffel, um sicherzustellen, dass er nicht auf irgendeinen Kontakt reagiert.
Beobachten Sie unter dem Stereomikroskop sorgfältig die Bewegung des schlagenden Herzens unter der Haut der Fische. Bestimmen Sie visuell den Injektionspunkt über dem schlagenden Herzen und in der Mitte des Dreiecks, das durch die ventralen Knorpelplatten definiert wird. Setzen Sie die Spitze der Kapillare in einem Winkel zwischen 30 und 45 Grad relativ zur Körperachse ein.
Sobald sich die Nadel im Perikard befindet, drücken Sie das Pedal der Mikroinjektorvorrichtung, um die Injektion abzuschließen. Nach der Injektion ziehen Sie die Kapillare vorsichtig aus dem Thorax und übertragen Sie den Fisch sofort in einen Tank mit Systemwasser zur Erholung. Überwachen Sie die Fische bis zur vollständigen Erholung von der Anästhesie. Um die Auswirkungen der Injektion zu analysieren, sammeln Sie das Herz zum gewünschten Zeitpunkt und bereiten Sie es für die weitere Analyse vor.
