Encyclopedia of Experiments: Biology
A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.
Transcript
Please note that all translations are automatically generated.
- Başlamak için, bir Petri kabına yarıklı ıslak bir sünger yerleştirin. Daha sonra, yetişkin bir balığı trikain çözeltisi ile uyuşturun ve ventral tarafı yukarı bakacak şekilde yarığa dikkatlice aktarın. Petri kabını stereo mikroskop altına yerleştirin ve atan kalbin cildin altındaki hareketini gözlemleyin.
Bir minkroinjeksiyon iğnesini, ameliyat ve pektoral korse arasında bulunan atan kalbin üzerindeki vücut ekseninden 45 derecelik bir açıyla yerleştirin. Yavaşça, iğneyi deriden kalbi çevreleyen ince bir zar olan perikard içine ilerletin. Enjeksiyon karışımını perikardiyuma teslim edin.
Atış, çözelti hareketini izlemek için fenol kırmızısı gibi bir izleyici boyası içerir. İğneyi torakstan çekin. Balıkları hemen sistem suyu içeren geri kazanım tankına aktarın ve anesteziden tamamen iyileşme için izleyin. Aşağıdaki protokolde, bir test bileşiği sunmak ve kalp yenilenmesi üzerindeki etkilerini incelemek için intratorasik bir enjeksiyon yapacağız.
- Yetişkin bir balığı yakalamak ve anestezik çözeltiye aktarmak için bir ağ kullanın.. Bir ila iki dakika sonra, balık yüzmeyi bıraktığında ve operkülün hareketi azaldığında, herhangi bir temasa tepki vermediğinden emin olmak için balıklara plastik bir kaşıkla dokunun.. Daha sonra, hızlı ve dikkatli bir şekilde balığı ventral tarafı yukarı bakacak şekilde ıslak süngerin oluğuna aktarın. Balığın başı operatörün baskın elinden uzağa işaret etmelidir.
Stereo mikroskop altında, atan kalbin balığın derisinin altındaki hareketini dikkatlice gözlemleyin. Görsel olarak, atan kalbin üzerindeki enjeksiyon noktasını ve ventral kıkırdaklı plakalarla tanımlanan üçgenin ortasına belirleyin. Kılcal damarın ucunu vücut eksenine göre 30 ila 45 derece arasında bir açıyla yerleştirin. Mikrokapillerin ucu ile cildi yavaşça perikard içine nüfuz edin.
İğne perikard içine girdikten sonra, enjeksiyonu tamamlamak için mikroinjektör cihazının pedalına basın. Enjeksiyondan sonra kılcal damarı torakstan hafifçe çekin ve balığı hemen geri kazanım için sistem suyu olan bir tanka aktarın. Anesteziden tamamen iyileşene kadar balığı izleyin. Enjeksiyonun etkilerini analiz etmek için kalbi istediğiniz zaman noktasında toplayın ve daha fazla analize hazırlayın.
