Tandem de congélation à haute pression et rapide Gel Remplacement de tissus végétaux pour microscopie électronique à transmission

L’objectif général de l’expérience suivante est d’immobiliser les structures cellulaires des cellules végétales par substitution à haute pression, congélation et congélation rapide pour une visualisation ultérieure par microscopie électronique à transmission. Ceci est réalisé en préparant soigneusement un échantillon de tissu pour la congélation en le codant avec un cryoprotecteur pour s’assurer que le tissu est peu endommagé lors de la congélation à haute pression. Dans un deuxième temps, l’échantillon est rapidement congelé sous haute pression, ce qui immobilise les composants cellulaires et limite la formation de glace cristalline, ce qui permet d’obtenir des cellules à la morphologie intacte.

Ensuite, une substitution libre rapide est effectuée afin de remplacer l’eau cellulaire par des solvants organiques et d’introduire des fixateurs tels que le tétroxyde d’osmium, liant et stabilisant ainsi les ultra-structures cellulaires. Les résultats obtenus montrent que la congélation à haute pression et la substitution rapide de la congélation préservent efficacement les structures cellulaires et la morphologie des plantes sur la base de la microscopie électronique à transmission. Le principal avantage de cette technique par rapport aux méthodes existantes telles que la fixation chimique conventionnelle est que H-P-F-Q-F-S immobilise le contenu cellulaire en quelques millisecondes, minimisant ainsi la formation d’artefacts.