Name: Mesure de granulocytes et de monocytes phagocytose et oxydative Activité Burst dans le sang humain (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-09-12T13:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 29 s
Description: Apprenez à mesurer la phagocytose et l'activité oxydative des granulocytes et monocytes dans le sang humain. Cette méthode simple et adaptable évalue la fonction immunitaire innée pour la recherche en immunologie et physiologie de l'exercice.

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Les auteurs tiennent à remercier Zack Shue, Casey John et Lynn Cialdella-Kam pour leur aide lors de l&#39;optimisation de cette procédure.

<ol><li>Nieman, D. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Influence+of+pistachios+on+performance+and+exercise-induced+inflammation%2C+oxidative+stress%2C+immune+dysfunction%2C+and+metabolite+shifts+in+cyclists%3A+a+randomized%2C+crossover+trial%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Influence of pistachios on performance and exercise-induced inflammation, oxidative stress, immune dysfunction, and metabolite shifts in cyclists: a randomized, crossover trial.</a> PLoS One. 9, e113725(2014).</li>
<li>Knab, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+a+freeze-dried+juice+blend+powder+on+exercise-induced+inflammation%2C+oxidative+stress%2C+and+immune+function+in+cyclists%5BTitle%5D)+AND+%22Appl+Physiol+Nutr+Metab%22%5BJournal%5D)">Effects of a freeze-dried juice blend powder on exercise-induced inflammation, oxidative stress, and immune function in cyclists.</a> Appl Physiol Nutr Metab. 39, 381-385 (2014).</li>
<li>Konrad, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+acute+effect+of+ingesting+a+quercetin-based+supplement+on+exercise-induced+inflammation+and+immune+changes+in+runners%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Sport+Nutr+Exerc+Metab%22%5BJournal%5D)">The acute effect of ingesting a quercetin-based supplement on exercise-induced inflammation and immune changes in runners.</a> Int J Sport Nutr Exerc Metab. 21, 338-346 (2011).</li>
<li>Nieman, D. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immune+and+inflammation+responses+to+a+3-day+period+of+intensified+running+versus+cycling%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Behav+Immun%22%5BJournal%5D)">Immune and inflammation responses to a 3-day period of intensified running versus cycling.</a> Brain Behav Immun. 39, 180-185 (2014).</li>
<li>Nieman, D. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Carbohydrate+supplementation+affects+blood+granulocyte+and+monocyte+trafficking+but+not+function+after+2.5+h+of+running%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Clin+Nutr%22%5BJournal%5D)">Carbohydrate supplementation affects blood granulocyte and monocyte trafficking but not function after 2.5 h of running.</a> Am J Clin Nutr. 66, 153-159 (1997).</li>
<li>Tidball, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inflammatory+cell+response+to+acute+muscle+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Med+Sci+Sports+Exerc%22%5BJournal%5D)">Inflammatory cell response to acute muscle injury.</a> Med Sci Sports Exerc. 27, 1022-1032 (1995).</li>
<li>McFarlin, B. K., Williams, R. R., Venable, A. S., Dwyer, K. C., Haviland, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Image-based+cytometry+reveals+three+distinct+subsets+of+activated+granulocytes+based+on+phagocytosis+and+oxidative+burst%5BTitle%5D)+AND+%22Cytometry+A%22%5BJournal%5D)">Image-based cytometry reveals three distinct subsets of activated granulocytes based on phagocytosis and oxidative burst.</a> Cytometry A. 83, 745-751 (2013).</li>
<li>Liao, Y., Liu, P., Guo, F., Zhang, Z. Y., Zhang, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oxidative+burst+of+circulating+neutrophils+following+traumatic+brain+injury+in+human%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Oxidative burst of circulating neutrophils following traumatic brain injury in human.</a> PLoS One. 8, e68963(2013).</li>
<li>McFarlin, B. K., Venable, A. S., Prado, E. A., Henning, A. L., Williams, R. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Image-based+flow+cytometry+technique+to+evaluate+changes+in+granulocyte+function+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Image-based flow cytometry technique to evaluate changes in granulocyte function in vitro.</a> J Vis Exp. , (2014).</li>
<li>Nieman, D. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immune+response+to+obesity+and+moderate+weight+loss%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Obes+Relat+Metab+Disord%22%5BJournal%5D)">Immune response to obesity and moderate weight loss.</a> Int J Obes Relat Metab Disord. 20, 353-360 (1996).</li>
<li>Nieman, D. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immune+function+in+female+elite+rowers+and+non-athletes%5BTitle%5D)+AND+%22Br+J+Sports+Med%22%5BJournal%5D)">Immune function in female elite rowers and non-athletes.</a> Br J Sports Med. 34, 181-187 (2000).</li>
<li>Ichii, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Iron+sucrose+impairs+phagocytic+function+and+promotes+apoptosis+in+polymorphonuclear+leukocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Nephrol%22%5BJournal%5D)">Iron sucrose impairs phagocytic function and promotes apoptosis in polymorphonuclear leukocytes.</a> Am J Nephrol. 36, 50-57 (2012).</li>
<li>Gomes, A., Fernandes, E., Lima, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fluorescence+probes+used+for+detection+of+reactive+oxygen+species%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biochem+Biophys+Methods%22%5BJournal%5D)">Fluorescence probes used for detection of reactive oxygen species.</a> J Biochem Biophys Methods. 65, 45-80 (2005).</li>
<li>Gruger, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Negative+impact+of+linezolid+on+human+neutrophil+functions+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Chemotherapy%22%5BJournal%5D)">Negative impact of linezolid on human neutrophil functions in vitro.</a> Chemotherapy. 58, 206-211 (2012).</li>
<li>Dementhon, K., El-Kirat-Chatel, S., Noel, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+an+in+vitro+model+for+the+multi-parametric+quantification+of+the+cellular+interactions+between+Candida+yeasts+and+phagocytes%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Development of an in vitro model for the multi-parametric quantification of the cellular interactions between Candida yeasts and phagocytes.</a> PLoS One. 7, e32621(2012).</li>
</ol>

Les auteurs n’ont rien à divulguer.

Ce manuscrit fournit un protocole étape par étape, pour la détermination des deux indicateurs de granulocytes et de la fonction des monocytes. Nous avons identifié quelques étapes qui sont essentielles à la réussite de cet essai. Une telle étape est l&#39;incubation au bain de glace qui se produit immédiatement avant l&#39;addition de bactéries. refroidissement approfondie de tous les échantillons permettra de minimiser l&#39;effet de la température sur la phagocytose et OB activité. Une autre étape essentielle est l&#3...

Le granulocytes et des monocytes phagocytose / oxydatif (OB) dosage de l&#39; activité est une technique simple, straight-forward qui est fréquemment utilisé pour recueillir des informations sur la fonction immunitaire innée après un exercice prolongé et intensif. 1-4 Lors de l&#39; étude de la réponse du système immunitaire à un stimulus, les granulocytes et les monocytes sont d&#39; un intérêt particulier parce qu&#39;ils jouent un rôle central dans la défense de l&#39; hôte et sont les premières cellules immunitaires à accumuler sur le site de l&#39; infection. 5 neutrophiles, un type de granulocytes, sont les premières cellules à translocation dans le muscle endommagé tissus après un exercice intensif. 6 phagocytose et l&#39; activité de l&#39; OB sont les mesures les plus courantes de granulocytes et des monocytes fonction, 7 et sont préférés comme des indicateurs de la fonction immunitaire innée des cellules en raison de leur rôle central tant dans le processus d&#39;infection et le processus de réparation. L&#39;essai décrit dans ce utili manuscritzes un flux de base cytomètre pour fournir une détermination quantitative des granulocytes et des monocytes phagocytose et l&#39;activité OB dans le sang total. L&#39;utilisation du sang entier dans cette technique est avantageuse car elle permet le dosage à effectuer, sans un procédé de purification du temps. Ce test peut être facilement modifié pour accueillir une variété de modèles de recherche et des capacités de laboratoire. Par exemple, Liao et al. A utilisé une technique similaire pour montrer que l&#39; activité neutrophile OB est augmentée et neutrophiles phagocytose est diminué suite à une lésion cérébrale traumatique. 8 Dans un autre exemple, McFarlin et al. Décrit une modification élégante de cette technique qui utilise allophycocyanine (APC ) conjugué à CD66b et tandem haute performance APC conjugué étiquetage CD45 avec cytométrie en flux à base d&#39;images pour classer les granulocytes en termes de leurs activités de phagocytose et OB. 7,9 Notre groupe de recherche a utilisé diverses adaptations de ce technique comme un indicateur de la fonction immunitaire innée chez les populations en surpoids, obèses, et athlétiques depuis près de 20 ans. 10,11 Le texte ci - dessous fournit au lecteur des instructions étape par étape pour effectuer ce test et mettre en évidence les zones que le lecteur peut adapter pour répondre aux besoins de leur recherche.

<table><tbody><tr><td>12 tubes de 75 mm, avec capuchon</td><td>VWR</td><td>20170-579</td><td>Vous aurez besoin de 2 tubes par échantillon (« H » et « F ») plus 3 tubes par lot (pour les contrôles de dosage ; « F », « H » et « Sang uniquement »).</td></tr><tr><td>PBS (10x), pH 7,4</td><td>Life Technologies</td><td>70011-044</td><td></td></tr><tr><td>Bouchon de bouteille 0,2 & micro ; Filtre en acétate de cellulose (capacité de 500 ml)</td><td>Fisher Scientific</td><td>09-741-07&nbsp ;</td><td></td></tr><tr><td>Glucose, poudre</td><td>Life Technologies</td><td>15023-021</td><td></td></tr><tr><td>Acide citrique (anhydre, culture cellulaire testée, culture cellulaire végétale testée)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C2404-100G</td><td></td></tr><tr><td>Citrate de sodium tribasique dihydraté</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S4641-25G</td><td></td></tr><tr><td>Dihydroéthidium (Hydroéthidine) (HE)</td><td>Life Technologies</td><td>D11347</td><td></td></tr><tr><td>Diméthyle sulfoxyde (DMSO) Anhydrus</td><td>Life Technologies</td><td>D12345</td><td></td></tr><tr><td>Staphylococcus aureus&nbsp ;( Souche de bois sans protéine A) Bioparticules, conjuguée à la fluorescéine (FITC)</td><td>Life Technologies</td><td>S2851</td><td></td></tr><tr><td>Staphylococcus aureus&nbsp ;( Souche de bois sans protéine A) Bioparticules, non étiquetée</td><td>Life Technologies</td><td>S-2859</td><td></td></tr><tr><td>Trypan Blue Solution, 0,4 %</td><td>Life Technologies</td><td>15250-061</td><td></td></tr><tr><td>4,0 ml de vacutainer contenant 7,2 mg de K2EDTA, VWR séché par pulvérisation</td><td></td><td>BD367861</td><td>Vous aurez besoin de 1 tube de prélèvement sanguin K2EDTA par échantillon.</td></tr><tr><td>Vacutainer de 4,0 ml contenant 68 unités USP d’héparine de lithium, revêtement par pulvérisation</td><td>de BD367884</td><td></td><td>Vous aurez besoin de 1 tube de prélèvement sanguin d’héparine de lithium par échantillon.</td></tr><tr><td>COULTER Ac&middot ; T 5diff CP</td><td>Beckman Coulter</td><td>6605705</td><td>c’est-à-dire , analyseur d’hématologie</td></tr><tr><td>COULTER Ac&middot ; T 5diff Rinçage</td><td>Beckman Coulter</td><td>8547167</td><td></td></tr><tr><td>COULTER Ac&middot ; T 5diff Fix</td><td>Beckman Coulter</td><td>8547171</td><td></td></tr><tr><td>COULTER Ac&middot ; T 5diff WBC Lyse</td><td>Beckman Coulter</td><td>8547170</td><td></td></tr><tr><td>COULTER Ac&middot ; T 5diff Hgb Lyse</td><td>Beckman Coulter</td><td>8547168</td><td></td></tr><tr><td>COULTER Ac&middot ; T 5diff Cal Calibrator</td><td>Beckman Coulter</td><td>7547175</td><td></td></tr><tr><td>COULTER Ac&middot ; T 5diff Control Plus</td><td>Beckman Coulter</td><td>7547198</td><td></td></tr><tr><td>AcT 5diff Diluant</td><td>Beckman Coulter</td><td>8547169</td><td></td></tr><tr><td>200 &micro ; l Pointes de pipette allongées</td><td>VWR</td><td>37001-526</td><td></td></tr><tr><td>Bac à glace isolé</td><td>VWR</td><td>89198-980</td><td>Pour bain d’eau glacée.</td></tr><tr><td>Rack de tubes métalliques ouvert</td><td>VWR</td><td>60916-702</td><td></td></tr><tr><td>Fetal Bovine</td><td>Serum Life Technologies</td><td>26140-111</td><td></td></tr><tr><td>TQ-Prep Workstation</td><td>Beckman Coulter</td><td>6605429</td><td>i.e., poste de travail automatisé de préparation de lyse cellulaire Système de réactifs</td></tr><tr><td>ImmunoPrep</td><td>Beckman Coulter</td><td>7546999</td><td>i.e., système de réactifs de fixation de lyse/WBC</td> RBC</tr><tr><td>Système de cytométrie en flux Cytomics FC500 MCL avec logiciel CXP</td><td>Beckman Coulter</td><td>626553</td><td></td></tr><tr><td>Fluide de gaine</td><td>IsoFlow Beckman Coulter</td><td>8547008</td><td></td></tr><tr><td>COULTER CLENZ</td><td>Beckman Coulter</td><td>8546929</td><td></td></tr><tr><td>Flow-Check Fluorospheres&nbsp ;</td><td>Beckman Coulter</td><td>6605359</td><td>i.e., fluorosphères d’alignement et de vérification fluidique</td></tr><tr><td>Logiciel FlowJo</td><td></td><td>FlowJo FlowJo</td><td>c’est-à-dire , logiciel d’analyse de cytométrie en flux</td></tr><tr><td>Logiciel Excel</td><td>Microsoft</td><td>Microsoft Excel</td><td>c’est-à-dire , tableur électronique</td></tr></tbody></table>

mesure de granulocytes et de monocytes phagocytose et oxydative activité burst dans le sang humain

Measuring Granulocyte and Monocyte Phagocytosis and Oxidative Burst Activity in Human Blood

Le test de phagocytose des granulocytes et des monocytes et de l’activité oxydative (OB) peut être utilisé pour étudier le système immunitaire inné. Ce manuscrit fournit la méthodologie nécessaire pour ajouter ce test à un arsenal d’immunologie d’exercice. La première étape de ce test consiste à préparer deux aliquotes (« H » et « F ») de sang total (héparine). Ensuite, du dihydroéthidium est ajouté à l’aliquote H, et les deux aliquotes sont incubées dans un bain d’eau chaude suivi d’un bain d’eau froide. Ensuite, Staphylococcus aureus (S. aureus) est ajouté à l’aliquote H et S. aureus marqué à l’isothiocyanate de fluorescéine est ajouté à l’aliquote F (bactérie :phagocyte = 8:1), et les deux aliquotes sont incubées dans un bain d’eau chaude suivi d’un bain d’eau froide. Ensuite, du bleu de trypan est ajouté à chaque aliquote pour éteindre la fluorescence extracellulaire, et les cellules sont lavées avec une solution saline tamponnée au phosphate. Ensuite, les globules rouges sont lysés et les globules blancs sont fixés. Enfin, un cytomètre en flux et un logiciel d’analyse approprié sont utilisés pour mesurer la phagocytose des granulocytes et des monocytes et l’activité des OB. Ce test est utilisé depuis plus de 20 ans. Après un effort intense et prolongé, les athlètes ressentent une augmentation significative mais transitoire de la phagocytose et une diminution prolongée de l’activité OB. L’augmentation de la phagocytose après l’exercice est corrélée à l’inflammation. Contrairement aux individus de poids normal, la phagocytose des granulocytes et des monocytes est chroniquement élevée chez les participants en surpoids et obèses, et est modestement corrélée avec la protéine C-réactive. En résumé, ce test basé sur la cytométrie en flux mesure la phagocytose et l’activité OB des phagocytes et peut être utilisé comme mesure supplémentaire de l’inflammation induite par l’exercice et l’obésité.

Un exercice prolongé et intensif a des effets profonds sur la fonction immunitaire innée, y compris la fonction naturelle de tueur de cellules, la réponse de cytokine macrophage à une infection virale, et granulocytes et des monocytes phagocytose et l&#39;activité de l&#39;OB. Plusieurs études indiquent que la phagocytose des augmentations de granulocytes et de monocytes de manière significative après l&#39;exercice, ce qui reflète l&#39;inflammation induite par des lésions musculaires e...

Le but de ce manuscrit est de présenter une méthode de mesure de la phagocytose des monocytes et des granulocytes et de l’activité oxydative dans des échantillons de sang humain.

Mesure de granulocytes et de monocytes phagocytose et oxydative Activité Burst dans le sang humain

The granulocyte and monocyte phagocytosis and oxidative burst (OB) activity assay can be used to study the innate immune system. This manuscript provides ...

L'objectif général de ce test est de mesurer la phagocytose ainsi que l'activité du burst oxydatif des granulocytes et des monocytes dans le sang total. Cette méthode peut aider à répondre à des questions clés dans le domaine de l'immunologie, telles que l'influence d'une intervention alimentaire particulière sur la réponse immunitaire à l'exercice. Le principal avantage de cette technique réside dans sa simplicité et sa facilité d'exécution, tout en pouvant être aisément modifiée afin de tenir compte des ressources disponibles en laboratoire et des intérêts de recherche.Nous utilisons cette mesure de la fonction immunitaire innée depuis deux décennies dans de nombreux essais sur l'exercice, et nous partagerons certaines de ces données plus tard dans la vidéo. Avant de commencer la procédure, utilisez un analyseur d'hématologie pour effectuer une numération globulaire complète avec analyse différentielle des leucocytes sur les échantillons de sang, conformément aux instructions du fabricant. Notez la numération des leucocytes en cellules par millilitre ainsi que les pourcentages de neutrophiles et de monocytes pour les échantillons.Ensuite, pour chaque tube expérimental et témoin, utilisez une pipette à embout long pour transférer 100 microlitres de chaque échantillon de sang total du tube de prélèvement sanguin contenant de l'héparinate de lithium vers le fond d'un tube de 12 par 75 millimètres correctement étiqueté. Une fois tout le sang transféré, ajoutez 10 microlitres de la solution travail d'HE dans les tubes marqués d'une encre rouge et d'un H, y compris le tube témoin HE. Retirez les bouchons des tubes.Vortexez brièvement les échantillons et transférez les tubes dans un bain-marie à 37 degrés Celsius placé dans un support métallique ouvert, en agitant doucement tous les cinq minutes. Après 15 minutes, transférez rapidement le support et les tubes dans un bain glacé pendant 12 minutes, en agitant doucement tous les cinq minutes. À la fin de l'incubation, ajoutez le volume approprié de solution working de S.aureus non marquée dans les tubes étiquetés au feutre rouge et avec un H, y compris le tube témoin HE.Vortexez brièvement les tubes avec leurs bouchons. Ensuite, ajoutez le volume approprié de solution travail marquée par la FITC de S.aureus aux tubes étiquetés au feutre noir et à la lettre F, y compris le tube témoin FITC, puis vortexez brièvement les échantillons. Incubez ensuite tous les tubes pendant 20 minutes dans un bain-marie à 37 degrés Celsius en agitant toutes les cinq minutes, puis laissez-les refroidir une minute dans de l’eau glacée.Après avoir placé les échantillons à température ambiante, utilisez une pipette répétitive pour ajouter 100 microlitres de solution de blocage glacée dans tous les tubes et vortexez les échantillons. Replacez les échantillons dans le bain de glace. Après une minute, utilisez la pipette répétitive pour ajouter un millilitre de PBS glacé dans chacun des tubes.Ensuite, vortexer les tubes et ajouter deux millilitres supplémentaires de PBS aux échantillons. Centrifuger maintenant les cellules et aspirer le surnageant. À l’aide de la pipette répétitive, ajouter 50 microlitres de FBS glacé aux tubes.Après vortexage, transférez tous les tubes sur un carrousel. Utilisez une station de travail automatisée de préparation pour la lyse cellulaire afin de lyser les globules rouges et fixer les globules blancs selon les instructions du fabricant. Pour analyser les résultats du test par cytométrie en flux, ouvrez le logiciel d'acquisition du système de cytométrie en flux et créez un nouveau protocole.Choisissez la FITC pour le paramètre FL1 dans le dosage de la phagocytose et l'HE pour le paramètre FL2 dans le dosage de l'activité de l'explosion oxydative. Créez un nuage de points de diffusion avant par rapport à la diffusion latérale, un histogramme FL1 et un histogramme FL2. Ensuite, créez des régions polygonales pour les populations de globules blancs, de granulocytes et de monocytes sur le nuage de points de diffusion avant par rapport à la diffusion latérale, et créez des régions linéaires sur les histogrammes.Exécutez maintenant l'échantillon témoin négatif contenant uniquement du sang, suivi des échantillons témoins positifs HE et FITC, examinez les histogrammes et ajustez les tensions des tubes photomultiplicateurs des canaux FITC et PE selon les besoins. Ensuite, démarrez l'acquisition des données pour les échantillons témoins. Après une période d'équilibration de 15 minutes, chargez les échantillons expérimentaux dans le plateau tournant selon l'ordre indiqué sur la liste de travail et commencez l'analyse des échantillons d'étude.Pour évaluer l'activité phagocytaire des échantillons, regroupez d'abord tous les fichiers d'échantillons marqués avec F et les fichiers de données en mode liste des témoins dans un seul dossier, puis glissez ces fichiers dans l'espace d'échantillonnage du logiciel d'analyse de cytométrie en flux. Double-cliquez sur un échantillon témoin et utilisez le sélecteur de zone polygonale pour définir une zone englobant l'ensemble de la population de globules blancs, en veillant à inclure toutes les cellules situées aux bords du graphique. Nommez cette zone GB.Double-cliquez sur la porte WBC et utilisez le sélecteur de porte elliptique pour définir la porte des lymphocytes. Étiquetez la porte en conséquence et faites glisser le pourcentage de données de la porte sur le côté afin de visualiser facilement les cellules. Ensuite, utilisez le sélecteur de porte polygonale pour définir la porte des granulocytes et celle des monocytes.Étiquetez chaque porte en conséquence et faites glisser le pourcentage de données de la porte vers le côté. Double-cliquez sur l'échantillon témoin FITC, puis sur la porte des granulocytes, et utilisez les menus déroulants pour définir le canal X sur FL1 et le canal Y sur la diffusion latérale (SS). Utilisez le sélecteur de porte carré pour définir une porte négative pour la phagocytose et une porte positive pour la phagocytose. Mettez en surbrillance la porte positive pour la phagocytose au sein de la population de granulocytes.Ensuite, cliquez sur Espace de travail puis sur Ajouter une statistique. Sélectionnez Moyenne géométrique et FL1 pour générer l'intensité de fluorescence des granulocytes positifs pour la phagocytose, puis cliquez sur Ajouter. Ensuite, choisissez la fréquence de la statistique parent et cliquez sur Ajouter pour obtenir le pourcentage de granulocytes positifs pour la phagocytose.Pour appliquer ces paramètres à tous les échantillons de l'étude, sélectionnez toutes les fenêtres et statistiques créées dans l'échantillon témoin FITC, puis faites-les glisser vers la zone Tous les échantillons dans le panneau de groupe. Enregistrez le travail sous forme de fichier WSP dans le même dossier que celui contenant le dossier de données en mode liste. Cliquez maintenant sur le premier échantillon expérimental du jeu de données et vérifiez que la fenêtre des globules blancs correspond bien à la distribution cellulaire de chacun des échantillons, en ajustant les limites de la fenêtre si nécessaire.Cliquez maintenant sur la fenêtre des globules blancs dans le premier échantillon expérimental et vérifiez que les fenêtres des granulocytes, des monocytes et des lymphocytes correspondent à la distribution cellulaire sur chacun des échantillons, en ajustant les fenêtres si nécessaire. Après avoir enregistré le fichier, cliquez sur l'icône de l'éditeur de tableau et faites glisser chaque statistique d'intérêt dans le tableau. Cliquez sur Créer un tableau pour afficher les données sous forme de feuille de calcul et enregistrer le travail au format XLSX.Ensuite, répétez l'analyse pour les échantillons d'activité de burst oxydatif marqués à l’H et les fichiers de données en mode liste de contrôle comme vient de l'être démontré. Comme illustré dans cette expérience représentative, la phagocytose des S.aureus médiée par les granulocytes augmente immédiatement et 1,5 heure après un exercice de cyclisme de 75 kilomètres, puis revient à la normale le lendemain matin. L'activité de burst oxydatif des granulocytes diminue pendant au moins 21 heures après ce niveau d'activité.En outre, il existe une corrélation modeste entre la phagocytose des granulocytes et les taux sériques de protéine C-réactive, comme observé dans cette analyse portant sur 106 femmes en surpoids ou obèses, indiquant qu'une phagocytose élevée des granulocytes et des monocytes chez des sujets au repos pourrait être un indicateur d'inflammation systémique. Une fois maîtrisée, cette technique peut être réalisée pour environ 30 échantillons en sept heures si elle est correctement exécutée. Lors de la réalisation de cette procédure, il est important de se rappeler de refroidir complètement les échantillons avant d'ajouter les bactéries, afin de minimiser au maximum toute variabilité inexpliquée entre les échantillons.Après cette procédure, d'autres méthodes, telles que la quantification des cytokines, peuvent être réalisées afin de déterminer l'effet de votre intervention sur la réponse inflammatoire. Après son développement, cette technique a ouvert la voie aux chercheurs dans le domaine de l'immunologie pour explorer les effets de divers changements de mode de vie et de la fonction immunitaire innée chez l'humain. Après avoir visionné cette vidéo, vous devriez avoir une bonne compréhension de la manière de mesurer la phagocytose ainsi que l'activité de l'explosion oxydative des granulocytes et des monocytes à l'aide d'un cytomètre en flux.N'oubliez pas que le travail avec le sang humain peut être extrêmement dangereux et que des précautions, telles que le port d'équipements de protection individuelle (EPI) appropriés, doivent toujours être prises lors de l'exécution de cette procédure.

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Time-lapse imagerie 3D de phagocytose par les Macrophages de souris

Haemophilus influenzae induit une inflammation des voies respiratoires. Cet article portera sur l’utilisation de la cytométrie en flux et de la microscopie confocale pour définir les réponses immunitaires des phagocytes et des lymphocytes en réponse à cette bactérie.

Évaluation des réponses immunitaires respiratoires à Haemophilus influenzae

Nous avons développé des améliorations et mis à jour des méthodes pour le test monocyte-monocouche (MMA) existant, dans lequel les macrophages sont utilisés pour aider à mieux prédire la pertinence clinique des alloanticorps érythrocytaires en médecine transfusionnelle et en immunologie. Ce test est appelé test monocyte-macrophage (M-MA).

Prédiction de la signification des anticorps anti-globules rouges à l’aide du dosage des monocytes-macrophages

Ce travail décrit un protocole in vitro standardisé permettant de quantifier et de comparer les taux de phagocytose des globules rouges xénogéniques (humains) et allogéniques (rats) par des macrophages de rats isolés.

Une évaluation quantitative de la phagocytose des érythrocytes allogéniques et xénogéniques par les macrophages de rat in vitro

Apprenez à mesurer la phagocytose et l'activité oxydative des granulocytes et monocytes dans le sang humain. Cette méthode simple et adaptable évalue la fonction immunitaire innée pour la recherche en immunologie et physiologie de l'exercice.

Mesure de granulocytes et de monocytes phagocytose et oxydative Activité Burst dans le sang humain

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