Summary
와튼의 덕트를 통해 마우스 턱밑 침샘의 cannulation을위한 프로토콜이 설명되어 있습니다. 본 실험은 trypan 푸른 솔루션은이 기법을 효과적으로 타겟 선에 혼합을 제공하는 방법을 보여줍니다하고, 침샘의 재생을위한 잠재적인 약물 임상 / 세포 치료 등이 새로운 접근 방법의 신뢰성을 제안하는 다이로 사용됩니다.
Abstract
심한 침샘 hypofunction 자주 Sjögren 증후군과 암 치료를 위해 자신의 머리와 목 지역에서 치료 조사를받는 사람 환자에서 발견됩니다. 이러한 xerostomia (구강 건조), dysphagia (씹는과 삼키는 장애)와 같은 환자를 경험 현상 두 그룹 심각한 치과 카리 에스, 변경 맛, 오로 - pharyngeal 감염 (칸디다 증), mucositis, 통증과 불편함.
. 침샘 하이포 - 함수의 치료를위한 재생 의학의 한 혁신적인 접근 방식은 RS 레드먼, E Mezey 외 2009 년 예측됩니다 줄기 세포가 직접 장애인의 기능을 되살리는에 강력한 방법으로 선 (腺)으로 cannulation로 입금 가능 기관. 아마도, 마이 그 레이션 외국 줄기 세포는 호스트 침샘의 일환으로 기능 선의 세포로 구분됩니다. 또한이 cannulation 기술은 임상 유전자 전송 어플 리케이션을위한 편법하고 효과적인 전달 방법입니다.
여기서 우리는 와튼의 덕트 (그림 1)를 통해 마우스를 턱밑 침샘에 cannulation 절차를 수행에 관련된 단계를 설명합니다. C3H 마우스 (찰스 리버, 몬트리올, QC, 캐나다)은 맥길 대학 동물 자원 센터에서 깨끗한 종래의 조건 하에서 보관되었습니다 본 실험을 위해 사용됩니다. 모든 실험은 대학 동물 관리위원회의 승인 및 동물 관리에있는 캐나다 협의회의 지침에 따라되었습니다되었습니다.
본 실험의 경우, trypan 파랑 솔루션은 29 게이지 바늘 폴리에틸렌 튜브 내부 쌌다과 인슐린 주사기를 사용하여 와튼의 덕트의 개통을 통해 선 (腺)으로 주입됩니다. 이후에, 마우스는 약을 성공적으로 선 (腺)으로 마이 그 레이션 것을 보여주기 위해 해부하는 것입니다.
Protocol
1. 절차 설명
- Subcutaneously 혼합의 움직임을 방해에서 타액 분비물을 방지하기 위해 각각의 마우스에 1 μl / 0.5 MG / ML 황산 아트로 핀 일수화물의 g 체중을 (CAT # 11330, Fluka, 미국) 주사.
- 100 MG / ML 케타민을 20 MG / ML xylazine (피닉스 과학, AR, 미국) 솔루션의 1g / μl 체중 각 마우스를 마취 주입 내부 복막 (IP)
- 복부 위치에서 사용자 지정 만든 플라스틱 플랫폼에서 마우스를 장소 : 상악 incisors는 금속 와이어에 잠겨 있으며, mandibular incisors가 입을 잡고하기 위해 탄성 문자열에 매혹됩니다.
- 0.58 mm 직경의 폴리에틸렌 튜브 (; 그림 2 고양이 # 427410, 백톤 디킨슨, MD, 미국) 안에 29 게이지 바늘 (CAT # 600145, 타이코 의료, MA, 미국)과 인슐린 주사기를 사용합니다. 폴리에틸렌 관은 29 게이지 바늘 끝 위에 5mm 삽입됩니다. 바늘은 와튼의 덕트에 폴리에틸렌 튜브를 이동하는 단단한 가이드로 사용됩니다. 폴리에틸렌 관은 덕트 내부 3-5mm를 삽입됩니다. 바늘이 덕트 외부 남아있는 동안에만 폴리에틸렌 관은 침샘에 덕트를 입력합니다. 바로 혀 아래에있는 와튼의 덕트를 통해 턱밑 글랜드로 필터링 0.4 % trypan 파랑 얼룩 솔루션 (CAT # 15250, Gibco, 미국)의 50ul를 주사. 주입은 주사기 피스톤에 긍정적인 압력으로 지속적으로 전달하고, 손가락은 주입의 모든 이후 내부 구두 주입의 역류를 방지하기 위해, 선 (腺)로 전달되었습니다도 피스톤에 남아 있습니다. trypan 푸른 솔루션은 기술을 입증하기위한 염료로 비디오에 사용됩니다.
- fter trypan 푸른 솔루션의 주입은, 마우스 해부하기 전에 euthanized되었다. 침샘은 수술 얼마나 혼합의 실제로 선 (腺)에 남아있다 결정하기 위해 노출됩니다.
2. 대표 결과 :
약을 주입 후에, 마우스는 수술 후 cannulated 침샘을 폭로 해부했다. 이미지로 - 2에 표시, 와튼의 덕트의 어두운 착색은 trypan 파란색 솔루션이 성공적으로 주입다는 증거를 제공합니다.
그림 1. 마우스 턱밑의 글랜드의 Cannulation.
그림 2. 폴리에틸렌 튜브는 29 게이지 바늘 끝 주위에 쌌다입니다. 주사기 바늘은 와튼의 덕트에 폴리에틸렌 튜브를 이동하는 단단한 가이드로 사용됩니다. 폴리에틸렌 관은 덕트 내부 (cannulated) 3-5mm를 삽입됩니다. 바늘이 덕트 외부 남아있는 동안에만 폴리에틸렌 관은 침샘에 덕트를 입력합니다.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
이 cannulation 방법을 사용하여 어려움이 주입 솔루션의 역류를 방지하는 것입니다. trypan 블루 솔루션을 일시적으로 성공적으로 침샘으로 마이 그 레이션 경우에도, 타액 분비의 혼합을 방해하고 선 밖으로 trypan 파랑 솔루션의 역류가 발생할 수 있습니다. 예방 차원에서, 타액의 분비를 억제하기 위해 아트로 핀을 사용하는 외에, 폴리에틸렌 정맥은 와튼의 덕트와 혼합이 예금 후에 60 초 동안 개최 주사기의 피스톤에 유지됩니다. 이것은 주입 솔루션의 대부분이 선 안에 남아있게됩니다.
통상, 체계 응용 프로그램, 약물 / 세포 즉 정맥 주사 (IV)은 침샘에 재생을위한 임상 접근 방식으로 사용되었습니다. 정맥 주입 혼합은 약물 / 세포 중 일부만이 대상 분비로 마이 그 레이션 수 있도록, 전체 순환 시스템을 통해 여행을합니다. 이 전통적인 방법에 비해 cannulation 절차를 통해 약물 / 세포의 주입있는 로컬 응용 프로그램,, 귀밑샘 턱밑과 sublingual 침샘의 기능을 되살리는에보다 직접적이고 효과적인 방법으로 인식있을 수 있습니다. 따라서,이 cannulation 기술은 마우스 침샘의 재생 의료에 대한 안정적인 모델로 사용할 수있는, 그리고 미래의 전망으로,이 절차는 임상 응용을위한 편법 방법 수 있습니다.
이것은 침샘의 재생 의료에 대한 연구에 관심이있는 학생 및 연구자를위한 효과적인 도구로 사용이 비주얼 기사에 대한 큰 기쁨 것입니다.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
모든 실험은 대학 동물 관리위원회의 승인 및 동물 관리에있는 캐나다 협의회의 지침에 따라되었습니다되었습니다.
Acknowledgments
저자는 기술 상담을위한 박사 아나 Cotrim과 장비 Murshed 박사 Monzur에게 감사하고 있습니다. 이 작품은 부분적으로 건강 연구에 대한 캐나다의 연구소에 의해 투자되었다.
Materials
| Name | Type | Company | Catalog Number | Comments |
| Atropine | Drug | Fluka | 11330 | To inhibit saliva secretion |
| Ketamine | Drug | Phoenix Scientific | Sedation | |
| Xylazine | Drug | Phoenix Scientific | ||
| Polyethylene tubing (0.58 mm diameter) | Tube | Intramedic | 427410 | To insert over tip of needle to avoid tissue injury during insertion into Wharton’s duct. |
| Ultra Comfort Insulin syringe (with a 29G needle) | Syringe | Tyco Healthcare, Covidien | 600145 | |
| 4% trypan blue | Stain | GIBCO, by Life Technologies | 15250 |
References
- Fox, P. C. Acquired salivary dysfunction. Drugs and radiation. Ann N Y Acad Sci. 842, 132-137 (1998).
- Bhide, S. A., Miah, A. B., Harrington, K. J., Newbold, K. L., Nutting, C. M. Radiation-induced xerostomia: pathophysiology, prevention and treatment. Clin Oncol (R Coll Radiol). 21, 737-744 (2009).
- Redman, R. S., Ball, W. D., Mezey, E., Key, S. Dispersed donor salivary gland cells are widely distributed in the recipient gland when infused up the ductal tree. Biotech Histochem. 84, 253-260 (2009).
