Summary
Wharton kanalı üzerinden fare submandibular tükürük bezi kanülasyonu için bir protokol açıklanmıştır. Bu deneme için, tripan mavi çözümü, bu tekniği etkin bir şekilde hedeflenen bezine infüzyonları dağıtımını nasıl göstermek için, bu yeni yaklaşımın güvenilirliğini ve tükürük bezlerinin rejenerasyonu için potansiyel bir klinik ilaç / hücre tedavisi olarak önermek için bir boyacı olarak kullanılır.
Abstract
Şiddetli tükürük bezi hipofonksiyon Sjögren sendromu ve kanser tedavisi için baş ve boyun bölgelerinde tedavi ışınlama kim bu hastalarda sık görülür. Kserostomi (ağız kuruluğu), disfaji (çiğneme ve yutma engelliler için) gibi hastaların semptomları yaşıyor Her iki grup da, şiddetli diş çürükleri, değiştirilemez tat, oro-farengeal enfeksiyonlar (kandidiyazis), mukozit, ağrı ve rahatsızlık.
Rejeneratif tıp tükürük bezi hipo-fonksiyon tedavisi için yenilikçi bir yaklaşım RS Redman, E Mezey ve ark 2009 speküle: kök hücre fonksiyonları bozulmuş canlandırılması bezinin güçlü bir yöntem olarak doğrudan kanülasyonu tarafından yatırılır. organ. Muhtemelen, konak tükürük bezinin bir parçası olarak işlev glandüler hücrelerin içine geçirilen yabancı kök hücreler ayırt edecektir. Ayrıca, bu kanülasyon tekniği klinik gen transferi uygulaması için bir çare ve etkin bir dağıtım yöntemi.
Burada fare submandibular tükürük bezi, Wharton kanalı (Şekil 1) ile kanülasyon işlemi gerçekleştirmeden yer alan adımları göstermektedir. Bu deneyde, McGill Üniversitesinden hayvan kaynak merkezi temiz geleneksel koşullar altında tutulmuştur C3H fareler (Charles River, Montreal, QC, Kanada) kullanılmaktadır. Tüm deneyler Üniversitesi Hayvan Bakım Komitesi tarafından onaylanmış ve Hayvan Bakım Kanada Konseyi kurallarına uygun olarak da ortaya konulmuştur.
Bu deneme için bir tripan mavi çözüm polietilen tüp içinde kaplı 29-gauge iğne ile insülin şırınga kullanarak Wharton kanalı açıklıktan bezi içine doluyor. Daha sonra, fare infüzyonları başarıyla bezi içine göç ettiğini göstermek için disseke edilir.
Protocol
1. Usul Açıklama
- Subkutan enfüzyon hareket kesintiye tükürük salgıları önlemek için her fare ul 1, 0.5 mg / ml atropin sülfat monohidrat g / vücut ağırlığı (Kedi # 11330, Fluka, USA) enjekte edilir.
- 100 mg / ml ketamin ve 20 mg / ml ksilizin (Phoenix Bilimsel, AR, Amerika Birleşik Devletleri) çözümü 1 g / ml vücut ağırlığının her fare narkoz enjekte periton içi (IP)
- Ventral pozisyonda özel bir plastikten yapılmış platform üzerinde fare Yeri: Maksiller kesici diş, bir metal tel kilitli ve çene kesici dişler, ağzı açık tutmak için için elastik bir dize bağımlısı.
- 0.58 mm çapında polietilen boru (Şekil 2 Kedi # 427.410, Becton Dickinson, MD, ABD) içine yerleştirilen 29-gauge iğne (Kedi # 600.145, Tyco Healthcare, MA, ABD) ile bir İnsülin şırınga kullanın. Polietilen tüp, 29-gauge iğne ucu üzerinde 5mm eklenir. Iğne Wharton kanalı içine polietilen tüp taşımak için katı bir kılavuz olarak kullanılır. Polietilen tüp kanal içinde 3-5 mm batırılır. Iğne kanal dışında kalırken, sadece polietilen tüp tükürük bezi kanalı girdiği unutmayın. 50ul süzülmüş% 0.4 tripan mavi boya solüsyonu (Cat # 15250 Gibco, ABD), Wharton kanalı, dil altında yer ile submandibular bezin içine enjekte edilir. Infüzyon şırınga piston üzerine pozitif basınç ile giderek teslim edilir, parmak içi sözlü infüzyon sonra infüzyon geri akışı önlemek için, bezi teslim edilmiştir bile piston üzerine kalır. Tripan mavi çözümü video tekniği göstermek için bir boya maddesi olarak kullanılır.
- ürkiye'de tripan mavi çözüm enjeksiyonu, fare diseksiyonu önce ötenazi edildi. Tükürük bezi ameliyatla infüzyonlarının ne kadar aslında bezinde kalmıştır belirlemek amacıyla maruz kalmaktadır.
2. Temsilcisi Sonuçlar:
Infüzyonları enjekte edildikten sonra, fare, cerrahi sonrası kanüllü tükürük bezi ortaya çıkarmak için diseke edildi. Resim-2 gösterildiği gibi, Wharton kanalı koyu renklenme tripan mavi çözümü başarıyla aşılanmış olduğunu kanıtlar sağlar.
Şekil 1 fare submandibular bezin kanülasyonu.
Şekil 2, polietilen tüp, 29-gauge iğne ucu etrafında kaplı. Şırınga iğnesi Wharton kanalı içine polietilen tüp taşımak için katı bir kılavuz olarak kullanılır. Polietilen boru, kanal içinde 3-5 mm (kanüle) eklenir. Iğne kanal dışında kalırken, sadece polietilen tüp tükürük bezi kanalı girdiği unutmayın.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Bu kanülasyon yöntemi kullanarak bir zorluk enjekte çözüm geri akışı önlemek için. Tripan mavi çözüm geçici olarak başarıyla tükürük bezi göç olsa bile, tükürük salgısını infüzyonları ile müdahale ve bezinin tripan mavi çözüm backflow neden olabilir. Bir önlem olarak, tükürük salgılanmasını inhibe etmek için atropin kullanarak ek olarak, polietilen kanül Wharton kanalı ve infüzyonları tevdi edildikten sonra 60 saniye boyunca düzenlenen şırınga piston kalmalıdır. Bu infüze çözüm bezi içinde kalmasını sağlayacaktır.
Geleneksel olarak, sistemik uygulaması, ilaç / hücreleri yani intravenöz enjeksiyon (IV), tükürük bezi yenilenme için bir klinik yaklaşım olarak kullanılmaktadır. Intravenöz olarak enjekte infüzyonları ilaçlar / hücrelerin bazıları sadece hedeflenen bezlerinin içine göç etmeye izin veren, tüm dolaşım sistemi aracılığıyla seyahat edecek. Bu geleneksel yöntem ile karşılaştırıldığında, kanülasyon işlemi enjeksiyon yoluyla uyuşturucu / hücreler yerel uygulama, parotis, submandibular ve sublingual tükürük bezlerinin fonksiyonları canlandırılması daha doğrudan ve etkili bir yolu olarak algılanıyor olabilir. Dolayısıyla, bu kanülasyon tekniği fare tükürük bezinin rejeneratif tıp için güvenilir bir model olarak kullanılan ve bir gelecek umudu olarak, bu yordamı klinik uygulama için bir çare bir yöntem olabilir.
Bu tükürük bezi rejeneratif tıp alanında daha ileri çalışmalar ilgilenen öğrenciler ve araştırmacılar için etkili bir araç olarak kullanılmak üzere bu görsel-yazı için büyük bir zevk olacaktır.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Tüm deneyler Üniversitesi Hayvan Bakım Komitesi tarafından onaylanmış ve Hayvan Bakım Kanada Konseyi kurallarına uygun olarak da ortaya konulmuştur.
Acknowledgments
Yazarları, teknik danışmanlık Dr Ana Cotrim ve ekipman için Bulunduğu Yer: Dr. MONZUR minnettarız. Bu çalışma kısmen Kanada Sağlık Araştırma Enstitüsü tarafından finanse edildi.
Materials
| Name | Type | Company | Catalog Number | Comments |
| Atropine | Drug | Fluka | 11330 | To inhibit saliva secretion |
| Ketamine | Drug | Phoenix Scientific | Sedation | |
| Xylazine | Drug | Phoenix Scientific | ||
| Polyethylene tubing (0.58 mm diameter) | Tube | Intramedic | 427410 | To insert over tip of needle to avoid tissue injury during insertion into Wharton’s duct. |
| Ultra Comfort Insulin syringe (with a 29G needle) | Syringe | Tyco Healthcare, Covidien | 600145 | |
| 4% trypan blue | Stain | GIBCO, by Life Technologies | 15250 |
References
- Fox, P. C. Acquired salivary dysfunction. Drugs and radiation. Ann N Y Acad Sci. 842, 132-137 (1998).
- Bhide, S. A., Miah, A. B., Harrington, K. J., Newbold, K. L., Nutting, C. M. Radiation-induced xerostomia: pathophysiology, prevention and treatment. Clin Oncol (R Coll Radiol). 21, 737-744 (2009).
- Redman, R. S., Ball, W. D., Mezey, E., Key, S. Dispersed donor salivary gland cells are widely distributed in the recipient gland when infused up the ductal tree. Biotech Histochem. 84, 253-260 (2009).
