Dissezione delle ghiandole salivari e midgut da Ae. aegypti zanzare

Mi chiamo Judy Coleman e faccio parte del James Lab. Qui all'UCI, siamo nel Dipartimento di Biologia Molecolare e Biochimica. Oggi sezionerò le zanzare Eptide e sezioniremo la ghiandola salivare nell'intestino medio.

Siamo interessati a questi tessuti specifici perché sono molto coinvolti nel percorso del virus e dei parassiti. Quando una zanzara ingerisce un pasto di sangue, il virus del parassita entra nella ghiandola salivare e dalla ghiandola salivare va nell'intestino medio. Passa attraverso l'epitelio dell'intestino medio e poi nella linfa del ronzio.

E questo viaggia attraverso il flusso sanguigno della zanzara, l'emolinfa e nella ghiandola salivare. Lì risiede fino a quando non è pronto per prendere un altro pasto di sangue. Va bene.

Quello che farò ora per prima cosa è sezionare l'intestino medio degli anni Ottanta aegypti. Prima di tutto, devo mettere su una volta PBS. Questo è un tampone, cioè, sono le nostre buone condizioni fisiologiche.

Quindi lo mettiamo sullo scivolo e ho il raffreddore per evitare che la zanzara voli via mentre stiamo dissezionando, in modo che prenderò il ver midgut per ottenere un midgut, devo puntare la zanzara. Ho messo il mio, ho usato una sonda che ho fatto e ho fatto passare la sonda attraverso il torace della zanzara. Una volta messo al microscopio, prendo la pinza, prendo l'estremità dell'aspirazione dell'addome, la tolgo e lascio dietro di me l'intestino medio.

Quindi il nano, il nano è proprio lì, e io ce la farò. Eccolo. C'è l'intestino medio isolato.

In questo momento stiamo per sezionare le ghiandole salivari degli anni ottanta di GT eye. E questa procedura mi permette di usare due diverse sonde e il forcipe. Ho una sonda qui che ha un perno dritto, e la uso per afferrare la zanzara.

Uso una sonda che ha un perno angolato e la uso per spingere la lente fuori dalla zanzara. Le pinze che uso per staccare la testa dalla zanzara prima di togliere le ghiandole salivari. Quando tolgo la zanzara dalla capsula di Petri, la infilo nel torace.

È più facile per me tirare, tirare fuori le ghiandole se riesco a rimuovere le gambe. Quindi lo faccio a mano. Poi metto la zanzara nel tampone e, e le tolgo la testa, e spingo sul torace, e spingo fuori la ghiandola salivare.

Ecco una buona occhiata alla ghiandola salivare, e c'è uno sguardo a entrambe le parti della coppia di ghiandole salivanti. Abbiamo appena finito di sezionare le ghiandole salivanti in mezzo alle viscere degli anni Ottanta, zanzara occhio di gesso. Osserviamo questo materiale a livello molecolare per interferire con il percorso del virus o del parassita all'interno della zanzara.