マウス卵母細胞への核移転
November 30th, 2006
この映画とプロトコルは、核移植を学習することを目的としています。
そこで、私たちのグループがリプログラミングに興味を持っているため、NU核トランスファーを行っています。これは、分化した核を胚状態に再プログラムできるという点で興味深いプロセスです。これらはCASHとHCCVの試薬で、これがヒアルロニダーゼです。
そして、まず私は料理を準備します、そしてこれはCO2と同等にするためにインキュベーターに送られます。これらは、鉱物油で覆われたチューリング用の数滴です。そこで、CO2大気を校正するのです。
次に、HCZBをドロップします。こちらはお洗濯に使用します。これは日が高く、再びこの鉱油に覆われています。
この高値では、ヒアルロニダーゼで低下します。この部分は、HCCP ドロップにすぎません。これらは洗濯用です。
これはO側からulu細胞を除去するためのものです。このステージは加熱されているので、戻ってきてマウスからオイルの兆候を取得し、すべてを鉱物油で覆うまで温まります。これは、針の洗浄と細胞を入れるためのPVPドロップで、これはHCCBとCyla Bです。
さて、これは針の色です。今やっているのは、針を引くことです。さて、今、私は非常に細い、非常に素敵な針を持っています。
そして今、これがマイクロフォージです。適切なサイズの保持ピペットを持つために、特定の位置で針を切断する必要があります。ガラス玉を加熱し、針が溶けて下に降りると、今では壊れています。
私はこれを押しのけます。折れた針が完璧です。今、私はここに降りて、熱を押し上げます。
今度はガラス球が赤く変わり、溶けて、ガラス玉を押して、カーブを描きます。十分です。取り外します。
ほら、それから針を差し込むんだ。ホールディングピペットをこのヘッドにサブにしました。次に、それを顕微鏡に戻します。
マイクロピペット、キャピラリー、水銀を充填しました。このヒントにロードしました。水銀は、ここに水銀でこの毛細血管をロードします。
中に入ります。このヘッドに針をセットします。しっかりとねじ込み、引き戻します。
ここを時計回りに回すと、ここの水銀が前に押し出され、見えるようになります。そして今、オイルに先端があります。見る。だから今、私はビジョンを得るために針を下に移動しています。
水滴を排出し、QVPを吸い上げます。大丈夫です。そして、それを再び上に動かします。
私はHCCBに行き、穴を下に移動します。私の頭は、マウスピペットであるPに行きます。ここに挿入するためのキャピラリーを用意する必要があります。ありがとう.Already.Good。
だから、いくつかの毛細血管を作ります。大丈夫です。そしてパイプの中。私はレイです。
私はスイスから来て、1年前にこの仕事を始め、K'S研究室に来て核移植を学び始めました。本当に、ここは素晴らしい場所であり、ここで働くのも素晴らしいことです。そしてもちろん、これは非常に複雑な実験であり、その際に多くの問題が発生する可能性があります。
そのため、開始すると、核形成中または転写中に多くの細胞が溶解するなどの問題が発生する可能性があります。あるいは、うまく転送しても、それらが発達しないことに気づくでしょう。そして、常に、多くの理由が考えられます。
つまり、すべてのサイトの文化システムから始めることができるということです。ですから、常に遺伝的制御の一部や、培養システム、インキュベーターをテストするための受精した皇帝のような制御が必要です。そして、顕微鏡のスキルも向上させる必要があります。
ですから、確実にサイドをイネートし、その後に戻すことができるようになるまで、多くの練習が必要です。これは単なる練習の問題であり、あなたがそれを上達するまで数週間または数ヶ月かかります。そうでなければ、長時間の実験の準備ができています。
だから、丸一日予約するのは良いことです。そして、最初に厄介なのは、マウスのピペッティングです。ですから、泡を作らないように、それをうまく制御し、監視を失わないように、あるいは特にクローンを損傷する可能性もあります、特に外層、ルシータが開いているので、口にするとクローンにダメージを与え、そのソナールシータから漏れ出す可能性があります。
ですから、その口管に油が入らないように注意する必要があるときも。吸いすぎず、吹きすぎないように、しかしこれは比較的簡単に習得できる、このスキル。
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概要
この映画とプロトコルは、分化した核が胚状にリプログラミングされる核移植のプロセスを学習するのに役立つことを意図しています。
主要な研究要素
科学の分野
- 神経科学
- 細胞生物学
- 発生生物学
背景
- 核移植はクローン技術と再生医療に使用される技術です。
- 核のリプログラミングは細胞分化の理解に重要です。
- このプロセスは幹細胞研究の進歩につながる可能性があります。
- 核移植の成功条件を理解することはその応用に不可欠です。
研究の目的
- 核移植技術を実証すること。
- 学習プロセスを助けるプロトコルを提供すること。
- 分化した細胞のリプログラミングの可能性を探ること。
使用した方法
- 特定の試薬を用いた皿の準備。
- 核移植プロセスにおけるヒアルロンidaseの使用。
- 最適な条件のためのCO2大気の調整。
- 手順中の滴をカバーするためのミネラルオイルの適用。
主な結果
- 核移植技術の成功した実証。
- 使用した試薬はリプログラミングプロセスに効果的でした。
- 核移植の最適な条件が確立されました。
- 提供されたプロトコルは更なる研究と学習を助けることができます。
結論
- 核移植は核のリプログラミングに実行可能な方法です。
- 方法論を理解することは研究への応用に重要です。
- このプロトコルは分野における将来の研究の基礎として機能します。
よくある質問
Executive Industry Relevance
Nuclear transfer enables reprogramming of differentiated nuclei to an embryonic state, offering a mechanistic model for epigenetic de-risking in target validation. This approach supports predictive confidence in cellular reprogramming strategies relevant to regenerative medicine and stem cell-derived therapies. Understanding nuclear reprogramming principles informs early-stage discovery by clarifying the reversibility of differentiation and aging processes.
Strategic Applications in Biopharma R&D
Early Discovery & Target Validation
- Scientific Value: Provides a system to interrogate therapeutic hypotheses by testing nuclear reprogramming capacity.
- Operational Value: Enables functional target validation through assessment of epigenetic reversibility in differentiated cells.
- Predictive Value: Supports portfolio triage by modeling the feasibility of restoring developmental potential to patient-derived cells.
Screening & Assay Development
- Assay Readiness: Establishes standardized conditions using mineral oil-covered drops and CO2 calibration for reproducible nuclear transfer.
- Quantitative Outputs: Enables measurement of developmental potential as a functional readout of reprogramming success.
- Platform Reuse: Supports scalable preparation of reagents like hyaluronidase and SUM/HCCV for consistent experimental workflows.
Translational & Preclinical Research
- Disease Relevance: Offers a pathway to generate patient-matched embryonic stem cells for in vitro disease modeling.
- Translational Continuity: Connects discovery-phase reprogramming to preclinical validation via derivation of genetically identical stem cells.
- Risk-Adjusted Advancement: Informs decisions on stem cell differentiation and replacement strategies based on nuclear transfer efficiency.
Pipeline & Workflow Integration
The method fits within the discovery continuum from target hypothesis testing to lead identification, particularly in epigenetic mechanism validation and cellular reprogramming assays.
- Discovery Biology: Supports hypothesis testing on whether differentiated nuclei can be reprogrammed to an embryonic state.
- Screening: Describes assay readiness through standardized drop preparation and mineral oil overlay to maintain culture stability.
- Analytics: Highlights developmental potential as a key quantitative readout for comparing reprogramming conditions.
- Translational Research: Links to preclinical work by enabling derivation of embryonic stem cells capable of generating all adult cell types.
- Enterprise Reuse: Frames nuclear transfer as a reusable platform for evaluating reprogramming factors across multiple cell types.
Operational & Enterprise Impact
- Scientific Value: Mechanistic de-risking of epigenetic targets through demonstration of nuclear reprogramming feasibility.
- Operational Value: Standardization via CO2 calibration, mineral oil use, and reagent preparation (e.g., hyaluronidase, SUM/HCCV).
- Strategic Value: Improves go/no-go decisions in regenerative medicine by validating cellular plasticity early.
- Portfolio Impact: Enables risk-adjusted prioritization of stem cell-based approaches using genetically identical, patient-matched cells.
Implementation Considerations
- Requires expertise in micromanipulation, including needle pulling and microforge techniques.
- Depends on instrumentation such as microscopes with microinjectors and mercury-loaded capillaries for visualization.
- Necessitates cross-team standardization of culture conditions, including CO2 equilibration and oil-overlay protocols.
- Involves adaptation considerations across model systems, particularly in oocyte handling and zona pellucida integrity.
- Limited by technical challenges such as cell lysis during transfer and developmental failure post-transfer, requiring extensive practice.
Biopharma FAQs
Chapters in this video
2:23
Dish for enucleation and nuclear transfer HCZB/cytocholazin
4:53
Injection pipette
7:07
Oocyte isolation
3:31
Holding pipette
3:30
Preparation of pipettes
10:31
Collection of donor cells
9:43
Nuclear transfer
11:50
Discussion
11:05
Transfer
9:58
Enucleation
6:30
Mouth pipette for oocyte isolation
0:18
Dish for oocyte incubation KSOM
0:00
Introduction
0:17
Preparation of dishes
1:08
Dish for oocyte isolation HCZB and HCZB/hyaluronidase
