マウス卵母細胞への核移転

私たちのグループはリプログラミングに関心があるため、核移植（NU Nuclear transfer）を行っています。分化した核が胚の状態へとリプログラミングされるという、非常に興味深いプロセスです。こちらが試薬のSUMとHCCV、そしてこちらがヒアルロニダーゼです。

まず、ディッシュを準備し、CO2濃度を均一にするためにインキュベーターに入れます。これらは、ミネラルオイルで覆われた複数の液滴です。これにより、CO2雰囲気を調整します。

次に、HCZBを1滴滴下します。これは洗浄に使用されます。これは高浸透圧であり、再びこのミネラルオイルで覆われています。

こちらは高く、ヒアルロニダーゼで低下します。こちらの部分はHCCP滴下のみです。これらは洗浄用です。

これはO側からulu細胞を除去するためのものです。このステージは加熱されており、マウスからオイルサインを採取し、すべてをミネラルオイルで覆うまで温められた状態になります。こちらは針の洗浄および細胞の回収に使用するPVPドロップで、こちらはHCCBとCyla Bです。そして、ここでの操作を行います。

こちらがニードルのカラーです。今からニードルを一本取り出します。はい、非常に細い、良好な状態のニードルが用意できました。

こちらはマイクロフォージです。適切なサイズのホールディングピペットを作成するため、針を特定の箇所で切断する必要があります。ガラス球を加熱し、針を下げて溶着させ、ここで切り離します。

これを脇に寄せます。折れた針が完璧な状態であることがわかります。次に、ここにある加熱スイッチを押し上げます。

ガラス球が赤くなり、融解します。ガラス球を押すと、曲線状になります。これで十分です。取り出します。

次に、針を挿入します。ホールドピペットをこのヘッドにセットしました。そのまま顕微鏡に戻します。

マイクロピペット、キャピラリー、および水銀を充填しました。これをチップにロードしました。こちらのキャピラリーに水銀を充填します。

内部に挿入します。針をこのヘッド部分にセットしてください。しっかりと締め、後ろに引きます。

ここを時計回りに回すと、水銀がこちら側に押し出され、視認できるようになります。次に、チップをオイルに入れます。ご覧の通りです。そして、視野を確保するために針を下げていきます。

水銀の液滴をいくつか排出し、QVPを吸い上げます。これで大丈夫です。その後、再び上に移動させます。

HCCBに向かい、孔の下へと移動します。マウス用ピペットであるPに頭を合わせます。ここに挿入するためのキャピラリーを準備する必要があります。ありがとうございます。完了しました。良好です。

そこで、毛細管を作成します。はい。そしてパイプの中に、レイ（ley）を入れます。

私はスイスから来ました。1年前にこの研究を始め、Kの研究室に入って核移植の習得に取り組みました。ここは本当に素晴らしい場所であり、ここで働けることを嬉しく思います。もちろん、これは非常に複雑な実験であり、実施中に多くの問題が発生する可能性があります。

開始時に、核形成中または移送中に多くの細胞が溶血するといった問題が発生することがあります。あるいは、移送に成功したとしても、細胞が成長しない場合があります。これらには常に、数多くの原因が考えられます。

まず、すべてのサイトにおける培養システムから始めてください。遺伝的コントロールの一部や、培養システムおよびインキュベーターをテストするための受精卵などのコントロールが常に必要になります。そして、顕微鏡の操作スキルを向上させる必要もあります。

そのため、側面に確実に接種し、その後戻すことができるようになるまでには、かなりの練習が必要です。これは単に習熟の問題であり、上達するまでには数週間から数ヶ月かかるでしょう。それ以外については、長期間の実験に使用できる状態です。

そのため、この作業には丸一日時間を確保しておくのが望ましいです。また、最初の方で難しいのがマウスピペッティングです。気泡を作らないようにし、適切にコントロールして、状況を見失わないようにしてください。特に、外層のsonar lucitaが開いているため、ピペッティングの際にクローンを損傷させ、そのsonar lucitaから漏れ出してしまう可能性があります。

したがって、マウスピースの中にオイルが入らないように注意する必要があります。また、吸いすぎたり吹きすぎたりしないようにしてください。ただし、このスキルは比較的容易に習得できます。