Summary
İçin yakından kopyalama modu, burn yaralanmalar klinik gözlem ve araştırmalar hayvan modellerinde arasındaki etkileşimi gerektirir. Bu çalışmada, bir domuz modeli şiddetli yanık yaralanma fizyolojik ve patofizyolojik ayarlarını deneysel bir pansuman değerlendirmek için kurulmuştur.
Abstract
Yara iyileşmesi süreci dinamik onarım ve insan hayatındaki en karmaşık biyolojik işlemidir. Yaralanma yakmak için yanıt olarak, değişiklikler biyolojik yollar içinde gecikmiş yara iyileşmesi ortaya çıkan enflamasyon yanıt zarar. Engelli yara iyileşmesi sık hastalarda amputasyon olumsuz sonuçlara yol açan şeker hastalığı oluşur. Bu nedenle, yanık yara onarım teşvik yararlı etkiye sahip sosları ihtiyaç vardır. Ancak, çalışmalar yanık yara tedavisi uygun hayvan modellerin eksikliği nedeniyle sınırlıdır. Bizim önceki çalışma minimal invaziv cerrahi tekniği kullanarak fare ve domuz modellerinde yara iyileşmesi performans gösterdi. Bu çalışmada bir domuz modeli yara daralma ortadan kaldırır şiddetli yanık yaralanma göstermek amaçlanmıştır ve daha yakından yaklasik insan süreçleri yeniden epithelialization ve yeni doku oluşumu. Bu iletişim kuralı tutarlı yanık yaraları oluşturmak ve bir domuz modelinde deneysel bir soyunma tedavi altında yara iyileşmesi performansını inceleme için detaylı bir yordam sağlar. Altı yanık yaraları oluşturulmuş simetrik patolojisi üzerinde hangi bir klinik dört katmandan oluşan sos ile kaplı: bir iç iletişim katmanı deneysel malzemeleri, su geçirmez film bir iç ara tabakanın, gazlı bez, dış orta tabakası ve yapıştırıcı sıva dış tabakası. Deneyler tamamlandığında, yaranın kapanması, yara alan ve Vancouver yara ölçek puan incelenmiş. Örnekleri hayvan her sonrası kurban rezeke derinin histolojik olarak hazırlanmıştır ve hematoksilen eozin boyama kullanıp lekeli. Her soyunma yara iyileşmesi bağlamında antibakteriyel etkinliği de incelenmiştir. Domuz modeli yaralarda için klinik soyunma uygulanması insan yara iyileşme epithelialization, hücresel proliferasyonu ve anjiogenezi süreçleri ile ilgili biyolojik süreçleri taklit eder. Bu nedenle, bu domuz modeli şiddetli yanık yaralanmalarında klinik sosları etkisini değerlendirmek için kolay öğrenmek, maliyet-etkin ve güçlü bir yöntem sağlar.
Introduction
Bir yanık hasarı inflamatuar işlemi başlatır ve hastaların yaşam kalitesi üzerinde olumsuz etkisi sonuçlanan hemen bir kazadan sonra çok sayıda vücut fonksiyonları etkiler karmaşık patolojik etkileri neden olmaktadır. Engelli yara iyileşmesi önemli morbidite ve mortalite hastalarda diyabet1,2ile neden olur. Yanık yaralılar en güçlü opioid analjezikler3kullanımını rağmen dayanılmaz bir süreç olarak bilinen yanık yara debridman sırasında acı deneyim.
Diğer memeliler aksine, domuz epithelialization, hücresel proliferasyonu ve anjiogenezi sürecine ilişkin insanlarla çeşitli anatomik ve fizyolojik özellikleri paylaşıyor. Bu potansiyel olarak daha iyi bir model belirli yordamlar ve çalışmalar için domuz yapar ve sık sık farelerde umut verici sonuçlar gösterdi sonraki çalışmalarda kullanılır. Bu özellikler domuz artan kullanımı içinde Preklinik sınav önemli bir tür olarak açmıştır. Son zamanlarda,4,5,6Biyomedikal araştırma saygı için kardiyovasküler, idrar, örtü ve sindirim sistemleri ile hızlı bir artış gözlenmiştir. Bu çalışma bir domuz modeli yara daralma ortadan kaldırır ve insan yara iyileşme süreçleri daha yakın bir yaklaşım ve yeni doku oluşumunu sağlayan şiddetli yanık yaralanma göstermek amaçlamaktadır. Altı yanık yaraları simetrik patolojisi, üç domuz omurga her tarafında üzerinde oluşturulmuştur. Daha sonra anexperimental soyunma (Şekil 1) insan yara iyileşmesi çoğaltmak için adapte edilebilir şiddetli yanık yaralanma bir domuz modelinde incelenmiştir. Yaralar dört katmandan oluşan bir klinik soyunma ile kaplıydı: bir iç iletişim katmanı deneysel malzeme, su geçirmez film bir iç ara tabakanın, gazlı bez dış orta tabakası ve yapıştırıcı sıva dış tabakası. Su geçirmez bir film bakteriyel enfeksiyon önleme ve gazlar soyunma nüfuz izin yara ortamı nemli tutar. Gazlı bez dış orta tabakası su geçirmez filmler üzerinde uygulanan ve yapıştırıcı sıva dış tabakası tarafından güvenli. Deney bitiminde, yara kapatma, yara alan ve Vancouver yara ölçek (VSS) puanı incelenmiş. Örnekleri hayvan her sonrası kurban rezeke derinin histolojik olarak hazırlanmıştır ve hematoksilen eozin (o) boyama kullanıp lekeli. Her soyunma yara iyileşmesi bağlamında antibakteriyel etkinliği de bu modelinde incelenmiştir. Bizim önceki çalışma minimal invaziv cerrahi tekniğin7kullanarak fare ve domuz modelindeki yara iyileşmesi performans göstermiştir. Yana altı patolojisi her domuz içinde yaralar yanık, deneysel her soyunma test ve önyargı domuz patolojisi üzerinde farklı sıralarda yara iyileşme süreci ile ilgili en aza indirmek için tüm pozisyonlarda değerlendirilir. Bu nedenle, bu çalışmada kurulan şiddetli yanık yaralanma domuz modelinin klinik sosları değerlendirme için yeni bir yaklaşım sağlar ve yanık yaralanma için yeni bir tedavi gelişimini kolaylaştırır. Bu çalışmada yanık yara iyileşmesi patofizyolojisi ortaya çıkarmak için çok önemli araçlar sağlar.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Hayvan konular içeren yordamlar hayvan bakımı Komitesi, ulusal savunma Tıp Merkezi, Tayvan (R.O.C) tarafından onaylanmıştır. Bu çalışma, ulusal savunma Tıp Merkezi Laboratuvar hayvan merkezinde yapılmıştır. 20 ve 25 kg arasında ağırlıklı domuz başarıyla bu iletişim kuralını kullanan Enstrümante.
1. insan işleme hayvanlarla uyarlaması
- Tesisin varış sonra etkileşim ile her diğer kalkıyorlardı ama hayvanlar hapsettiği ev.
- Hayvanlar yiyecek ve su ad libitum erişim sağlar.
- Deneysel laboratuvar hayvan tesisinden insan işleme ve ulaşım için domuz hayvan en az günde bir kez bir hafta işleyerek alışmana.
- Hayvan en az 12 saat önce mide bulantısı, kusma ve mide sıvı aspirasyonu önlemek için ameliyat için hızlı.
2. sedasyon
- Yanık yarası kuruluşundan önce hayvanlar üzerinden Zoletil 50 (25 mg/kg) İntravenöz enjeksiyon sakinleştir.
3. entübasyon ve havalandırma
- Hayvan bir tablo ve/veya tramvay sternal pozisyonda yerleştirin.
- Hayvan ağız ağız bir ayırıcı ile açın.
- Çene yetersiz gevşeme veya yutma refleksleri varlığı durumunda hangi entübasyon, maske ile sedasyon ikna etmek için isoflurane domuz engel.
- Kan basıncı, kalp hızı ve vücut ısısı fizyolojik sinyal kayıt memurlar tarafından potansiyel komplikasyonları önlemek için ameliyat sırasında izlemek.
4. anestezi
- Neden ve anestezi korumak; tercihen hayvan tiletamine ve zolazepam (25 mg / kg + 25 mg / kg) bir kas içi enjeksiyon yolu ile anestezi.
- Kas gevşemesi, çene sesi kaybı ile karakterize ve palpebral reflexed zaman Endotrakeal tüp hayvanla entübe gözlendi.
- 0,5-2,5 Buharlaştırıcı ayarı, anestezik bir durumda bütün domuzlar korumak % (v/v) isoflurane ameliyat sonuna kadar.
- Anestezi derinliği bir arka bacak ayak çimdik ameliyattan önce ile ağrı refleksleri test ederek incelemek. Gerektiğinde, ek anestezi eklemek veya birkaç dakika bekleyin. Ağrı refleksleri ameliyat boyunca düzenli olarak kontrol edin.
5. sterilizasyon cerrahi sitesi
- Tıraş ve sonuna kadar her iki koltuk altı vertebral sütundan yaklaşık 25 cm genişliğinde bir alanın üzerinde hayvan derisi temiz.
- Nemli cilt için yaklaşık 5 dk povidone-iyot fırçalayın (75 mg/mL) ile fırçalayın.
- Povidone-iyot sabun cilt ıslak steril gauzes kullanarak kaldırmak.
- Cilt povidone-iyot losyon (100 mg/mL) ile sterilize.
- Bakteri transfer ve cerrahi sitesi sonraki kirlenme azaltmak için steril cerrahi perdeler hayvanla kapsar.
6. yanık yara oluşturma
- Altı yanık yaraları simetrik olarak domuz patolojisi ortasına işaretlemek için bir cerrahi işaretleme kalemi kullanın. Bu her yanık yara arasındaki mesafe en az yara (Şekil 1A) RADIUS büyük olduğundan emin olun.
- Değiştirilmiş bir havya gliserin 50 mL ile doldurulması ve bir elektronik termometre sıcaklık izlemek için ekleyin. Sıcak demir düz bir alan yaklaşık 9 cm2 (Şekil 1B) sahiptir.
- 137-139 ° c demir sıcak bir tabak (Şekil 1 c) ile ısı.
- Altı tek tip yanık yaraları demir üzerinde işaretli alana 30 saniye (Şekil 1 c) herhangi bir kuvvet uygulamadan yanında duvar ilanı oluşturun.
- Yanık yaraları % 0,9 serum fizyolojik solüsyonu (Şekil 1 d) ile yıkayın.
- Yara boyutlarını ölçün ve yara photomicrography (Şekil 1E) tarafından kayıt.
7. sosları hazırlanması
- Her yaranın bir dört katmanlı klinik soyunma doğrudan temas yoluyla iç iletişim tabakası ile kapak. Bu katman için büyük harf içeren soyunma veya alternatif malzemeler (Şekil 1F) kullanın.
- Su geçirmez bir film üzerine bakteriyel penetrasyon (Şekil 1F) karşı bir engel olarak hizmet için klinik pansuman uygulanır.
- Her yaranın bir gazlı bez (0,5 cm kalınlığında) ile kapak ve soyunma (Şekil 1G) orta katman olarak hizmet için kağıt bant ile düzeltmek.
- Gazlı bez bir dış tabaka yapıştırıcı sıva ile güvenli. Bu katmana soyunma çıkarılması önlemek için gövde uzatmak (Şekil 1 H-1J).
8. bakım ve ölçüm sonrası yanık
- Domuz buprenorfin (0.1 mg/kg, IM) ile ağrı yönetimi için potansiyel ağrı azaltmak anestezi, kurtarma için bir hafta önce başlayan her 8-12 h için enjekte et.
- Yem ve su domuz ücretsiz erişim sağlar.
- Klinik sosları 2 günde ilk 10 gün için değiştirmek ve haftada 6 haftalık çalışma.
- Temiz ve klinik sosları yeniden uygulama önce yaralar ölçmek. Anestezi sırasında soyunma değişiklikleri yönetmek.
- Yara yara iyileşme oranı karşılaştırma için photomicrography tarafından ilk 10 gün için 2 günde kaydetmek ve daha sonra haftada 6 haftalık çalışma.
- Yara yeniden epithelialization veya daralma yukarıda açıklanan yöntemine göre özgün yara boyutunun yüzdesi olarak hesaplayın. Yara kapatma analizini çift-kör bir şekilde yapılmıştır.
- VSS, hangi oluşmak-dört değişken kullanarak yanık yara ölçmek: vascularity, yüksekliği (kalınlık), esneklik ve pigmentasyon sonrası yanık günlerde 0, 7, 21 ve 42. Her değişkenin dört ila altı olası puanları vardır. Toplam puan normal cilt 14, mademki yansıtan bir skor 0 0 arasında değişmektedir.
9. bakteriyel büyüme deneyler sonrası yanık mendil
- Antibakteriyel sonrası yanık gün 0, 7, 21 ve 42 testleri için yara temizle.
- Homojen bir süspansiyon elde etmek için bir yer çubukla 100 mL % 0,9 steril serum fizyolojik çözüm ve yavaşça girdap içine.
- Seri olarak (10– 1–10−5) homogenate sulandırmak ve seçici ve nonselective ortamda, her seyreltme 100 μL sırasıyla plakası.
- 37 ° C'de aerobik koşullarda tüm dilutions 24-72 saat için kuluçkaya.
- Plaka aerobik gram-pozitif organizmalar yalıtmak için %5 koyun kan ile desteklenmiş kan agar plaka üzerine tüm dilutions gelen her 10 μL onaylatılacak aliquots.
- Yayma veya örnek bir gecede koloni oluşturan sayısını belirlemek için bir agar plaka yüzeyi düzgün dökme tarafından örnek kuluçkaya birimleri (CFUs).
- Tabakları gecede kuluçka sonra okuyun. Koyun kanı agar plaka ters çevir ve çanak alt bir işaretleyici ve küçük cetvel kullanarak dört eşit çeyrek daire bölmek.
- Diseksiyon mikroskop aşaması tabağa yerleştirin ve her tabakta koloniler sayılır. Tanım olarak, bir koloni Numaralandırılacak 300 CFU en az olması gerekir.
- Her üç çoğaltır bakteri kolonileri saymak. Üç ortalama değer çoğaltır hesaplayın. Plaka başına CFU son seyreltme faktörü tarafından ortalama değerini çarparak belirleyin.
10. ötenazi ve doku fiksasyon
- İntravenöz sodyum Fentobarbital ötenazi çözüm (80 – 120 mg/kg) aşırı dozda enjekte et.
- Tr bloc eksizyon temel kas ve unwounded doku çevreleyen içerecek şekilde yanık yara dokusunun gerçekleştirin.
- Dokularda % 10 tarafsız tampon formalin ile düzeltmek.
- Formaldehit (% 37) 10 mL tamponlanmış fosfat çözüm (PBS) ve 4 ° C. mağaza 90 mL karışımı
- Mendil sabitleştirici için transfer ve tüm dokuları tamamen sabitleştirici daldırılır emin olmak için kapsayıcı girdap. Sabitleştirici hacmi 30 kere doku birimi olmalıdır.
- Doku gecede 4 ˚C düzeltmek.
- Etanol kurcalayarak kurutmak ve parafin blok embed. Bir shaker 4 ˚C, aşağıdaki adımları uygulayın.
- İki kez PBS ile 30 dakika boyunca yıkayın.
- % 70 etanol kurcalayarak 8 saat, % 80'i etanol gecede, % 95 etanol için 8 saat ve sonra % 100 etanol gecede kurutmak.
- % 100 etanol içinde doku bir daha fazla 8 saat kuluçkaya.
- Ksilen her üç değişiklik dokularda 30 dakika boyunca kuluçkaya.
- Ksilen taze erimiş (52 ° C) balmumu ile değiştirin ve 52 ° c fırında 1 saat kuluçkaya.
- Balmumu taze balmumu ile değiştirin ve bir fırın 52 ° C'de 3 saat için kuluçkaya ve sonra bir kez daha değiştirin ve 52 ° C'de gecede kuluçkaya.
- 1 saat için balmumu her iki daha fazla değişiklik kurcalayarak kuluçkaya ve doku katıştırmak ve 4 ° C'de depolayın
- Kesmek ve parafin gömülü bölümleri ile o leke ve üzerinden 100× büyütmehafif bir mikroskopla görselleştirin.
- Parafin kesitler döner microtome kullanarak oluşturun.
- Ksilen her üç değişikliklerle bölümler için 3 dakika dewax.
- % 100, % 95, % 80 ve % 70 etanol kurcalayarak üç dakika suyla temasa ve distile suda bırakın.
- 10 dakika boyunca hematoksilen ile leke ve musluk suyu çalışan durulayın.
- % 0.1 hidroklorik asit etanol ile 5 dakika ayırmak ve dokunun suyla durulayın.
- % 0.5 eozin ile 1 dakikadır leke.
- % 70, %80, % 95 ve % 100 etanol her kurcalayarak 2 dakika boyunca kurutmak.
- Ksilen ile boyama temizleyin ve duman mahallede kuru.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
İyi tanımlanmış marjı dairesel ve eritem (Şekil 1 d) RIM ile liflerin düzenli bir biçimde soluk yaralar yanık süresi 30 saniye sıcak demir tarafından sonuçlandı. Her hayvan içinde patolojisi üzerinde altı yanık yaraları vardı. Yanık yaraları düzenlenmesi Şekil 1 K'tasvir. Yanık yaraları tamamen büyük harf içeren sos ile kaplı ve yara oluşumu sonrası yanık günlerde 0, 7, 21 ve 42 derinliği değerlendirmek için kullanılan ve yeniden epithelialization tarafından belirlenen brüt muayene. Yanık yaraları brüt muayene sonrası yanık günde 42 temel yeniden epithelialized. Bu hayvanlar boyutunda yara yara iyileşme oranı (Şekil 2A) belirlemek için değerlendirilmiştir. Yarası 9, 10, 8 ve 3 cm2 sonrası yanık gün 0, 7, 21 ve 42, sırasıyla seçilmiştir. Yara alan önemli bir azalma sonrası yanık günde 42 gün 0 ile karşılaştırıldığında gözlendi. Şifa oranı büyük ortalama yara kenar boşluğu mesafe yara kapatma tamamlamak için zamana bölünmüş yara Merkezi'nden olarak tanımlanmıştır. Büyük harf içeren soyunma %73.43±6.33 yara kapatma sonrası yanık günde 42 (Şekil 2B) gösterdi ile yaraları tedavi.
Şekil 3 sonrası yanık gün 0, 7, 21 ve 42 VSS puanları yara vascularity, esneklik, pigmentasyon ve yüksekliği ile ilgili olarak gösterir. VSS puanı 7.4±0.5 sonrası yanık gününde 21 numaraya kadar yükseldi ve 3.33±0.58 için sonrası yanık günde 42 düşmüştür.
Bütün hayvanlar sonrası yanık günde 42 kurban edildi. Örnekleri hayvan her sonrası kurban rezeke derinin histolojik olarak hazırlanan ve H tarafından lekeli & tam kalınlıkta yanıklar elde edildi ve yaralar tamamen iyileşmiş (Şekil 4) çıktı örneklerin incelenmesi E. Histologic doğruladı. Burns kaynaklanan nekroz epidermis, dermis ve dermal yara bileşenlerinin temel kas (Şekil 4) önemli ölçüde etkilemeden gözlenen. DermIS kalınlığı deneysel soyunma altında 5.4 mm (Şekil 4A) oldu. Buna ek olarak, dermis ve lenfositik infiltrasyon deri değiştirme gözlenen H & E boyama içinde Şekil 4Bkırmızı ok tarafından belirtildiği gibi.
Deneysel soyunma antibakteriyel özelliği CFU tahlil sonrası yanık gün 0, 7, 21 ve 42 kullanarak tespit edilmiştir. Sonuç sonrası yanık gün 0 ile önemli bir artış sonrası yanık günde 42 (Şekil 5) ardından 21 arasında gözlenen bakteri hücre rakamlarla hafif bir artış gösterdi. Bu sonuç domuz modeli şiddetli yanık yaralanma bu çalışmada kurulan deneysel pansumanlar antibakteriyel özelliği de dahil olmak üzere, klinik performansını izlemek için kullanılan olabilir göstermektedir.
Şekil 1. Yanık yara oluşturma ve uygulama büyük harf içeren klinik soyunma. Epilasyon ve cilt iyot ve alkol ile hazırlanması (A) cerrahi işaretleme kalemi patolojisi, her iki tarafında orta hat üzerinde altı daireler anahat için kullanıldı. (B) değiştirilmiş demir gliserin ve sıcaklık göstermek için gliserin eklenen bir elektronik termometre ile doluydu. (C) demir ile sıcak bir tabak 137-139 ° C'ye ısıtılır ve altı Tekdüzen yanık yaraları cilt izleri oluşturulmuş. Yanık yarası oluşturmak için iki tam-kalınlık yaralar oluşturmak için domuz'ın arka ciltte (30 saniye) hiçbir dış güçle sıcak demir yerleştirin. (D) tüm yaraları oluşturulan sonra yaralar % 0,9 serum fizyolojik çözüm ile yıkadım. (E) ölçekler fotoğraf çekmek için yaraları yanındaki yerleştirildi. (F) ilk katman bir test soyunma ve su geçirmez bir film ile ikinci katman ile kaplıdır. (G) üçüncü katman 0,5 cm kalınlığı hakkında gazlı bezle kaplı ve kâğıt şerit ile sabit. (H-J) Gazlı bez bir dış tabaka yapıştırıcı sıva ile güvenli. Bu katman soyunma çıkarılması önlemek için gövde genişletir. (K) yanık yarası dağıtım Şematik diyagramı. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.
Şekil 2. Bir domuz modelinde yara boyutu değişti. (A) yara kapatma oranı 0 gününde özgün yara yüzdesi olarak belirlendi. Yaraları neredeyse tamamen 42 gün sonrası yanık sözleşmeli ve (B) değişiklikler yara alan bir sonrası yanık hayvan modeli 0-42 gün arasında gözlendi. Bu 90 ± % 4 sergilenmesi yara alan kapatma sonrası yanık günde 42, en büyük azalma gösterir. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.
Şekil 3. Ortalama toplam puanları, Vancouver yara ölçek (bir çift-kör deneysel tasarım kullanarak VSS) gün sonrası bir domuz modelinde yakmak. Yara izi değerlendirme pigmentasyon, vascularity, esneklik ve yara izi yüksekliğini içerir. Daha düşük bir puan yakından normal deri yaklasik koşul yara gösterir (P 0.0005 =). Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.
Şekil 4. Hematoksilen ve eozin üzerinde boyama sonrası gün 42 yakmak. (a, B) siyah ters üçgen tamir yazma doku gösterir. Düzgün ve sürekli tam-kalınlık yara morfolojisi ve papiller katman hipertrofik skarlasma özelliklerinin andıran. Neo-epidermisin yara yüzeyini örten varlığını unutmayın. (B) yanık yara eskar uygun dermis aşağıdaki yukarıda dermal bag doku sızmış inflamatuar hücrelerde kırmızı ok gösterir. Özgün büyütmeye × 10. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.
Şekil 5. Bir diyagramı gösteren farklı zaman noktalarda yaraların sayma bakteriyel bar. 0, 7, 21, hayvan modeli ve 42 gün antibakteriyel etkinliği sonrası yanık yarası. Antibakteriyel etkinliği koloni oluşturan birimler (CFU) tahlil üç bağımsız deneylerde tarafından incelendi. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Bu da çalışmanın bir domuz modeli şiddetli yanık yaralanma kurulan ve büyük harf içeren soyunma kullanarak modeli inceledi. Bizim sonuçları bu domuz model deneysel pansumanlar antibakteriyel özelliği de dahil olmak üzere, klinik performansını izlemek için kullanılabilir öneririz. Yara iyileşme oranı, yara kapatma ve antibakteriyel etkinliği de VSS, H & E boyama ve antibakteriyel testi kullanılarak analiz edildi. Hayvan yazma modelleri kullanımını yanık yaralanması Patofizyoloji gözden geçirmek için değerli bir araç geliştirilmiştir. Biyolojik bazı fareler fare özgü reaktifler yüksek sayıda ve transgenik fareler kurtarma etkin moleküler sinyal yollar keşfetmek için alma pratik yönleri dahil olmak üzere deneysel konularda olarak kullanmanın yararları vardır işlem. Ancak, rats bir hayvan yanık model kullanma büyük dezavantajı tamamen insan yara iyileşme süreci yaklaşık onun hatasıdır. Yeniden epithelialization de, fareler güçlü şifa yara yara daralma hızlı şekilde9bağlıdır iken insanlar8' de gözlenen ana şifa yaklaşımdır. Ayrıca, Sigara-açığı için hipertrofik fareler veya keloid skar oluşumu bu insanların onların yara kurtarma işleminin dagilimini doğruladı. Öte yandan, domuz son zamanlarda onların deri mimarisi insan derisi için benzer olduğu için araştırmacı dikkat konu haline gelmiştir. Ayrıca, domuz ve insanlara şifa yara iltihap, nükleer silahların yayılmasına karşı yeniden epithelialization ve remodeling gibi fizyolojik benzer aşamalarında ortaya çıkar. Genel olarak, domuz burns ile yeniden epithelialization zaman çizelgeleri için uygun sonrası yara eziyet10,11, insanlarda gözlenen 7 ila 14 gün arasında meydana gelen 21 gün tarafından iyileşmek. Domuz büyük morbidite Karşılaştır e doğru rats yara enfeksiyonu daha dayanıklı yapar onların vücut büyüklüğü nedeniyle de gösterir. Fareler genellikle yanık yara koşullar altında farklı tedaviler değerlendirmek için kullanılan ilk modeli değildir. Ayrıca, diğer memeliler aksine, domuz anatomik ve fizyolojik özellikleri bir dizi epithelialization, hücresel proliferasyonu ve anjiogenezi sürecine ilişkin insanlarla paylaşmak. Bu domuz yapar potansiyel olarak daha iyi bir model ve sık sık fareler 12,13,14,15dakika sonra umut verici sonuçlar gösterdi sonraki çalışmalarda kullanılır. Ayrıca, dermal kollajen ve elastik içerik, kutanöz kan akımı dağıtım, yara iyileşmesi ve yeniden epithelialization olayların sırası yapmış domuz yara iyileşmesi ve Rekonstrüktif Cerrahi tedaviler15 standart bir model ,16,17,18. Her hayvan içinde üst, orta, yer altı yanık yaraları vardı ve alt domuz sırt ve omurga için simetrik olarak dağıtılmış. Yanık yaraları benzer konumlardaki ama farklı domuz üzerinde oluşturulabilir. Bu nedenle, her deneysel soyunma test ve önyargı domuz patolojisi üzerinde farklı sıralarda yara iyileşme süreci ile ilgili en aza indirmek için farklı yerlerde değerlendirilir. Buna ek olarak, bu domuz modeli Bu çalışmada kurulan şiddetli yanık yaralanma da her domuz hizmet sağlanması yarar roman tedavi ve diğer araç kontrol olarak kendi kontrolü bir yara gibi önemli bir azalma önde gelen hayvan sayısı.
Yanık yaraları yönetimi yara iyileşmesinde önemli komplikasyonlar biridir. İnsan iyileşme süreci dört biyolojik süreçlerin hepsinden oluşur: hemostaz, iltihap, yayılmasını önleme ve olgunlaşma. İyileşme süreci rahatsız veya geri zekalı sonra görünür ve çevresindeki cilt16yükseltilmiş olması eğilimi bir Hipertrofik Skar sonuçlanan bir fibroblastic nükleer silahların yayılmasına karşı teşvik etmektedir. Tekrarlanabilirlik ve doğru miktar sağlamak için yeterli yapışma yapıştırıcı sıva kullanarak zamanında gecikmesi en aza indirmek için hemen yaralanma sonra gereklidir. Kutanöz tahriş isilik klinik soyunma çevresinde sonuçlanan yapıştırıcı sıva gelen ortak bir tepkidir. Böylece, dikkat mevcut yapıştırıcı sıva kullanımında kaşıntı önlemek için önerilir. Aseptik teknik takip ve iyice domuzlar arasında tüm ekipman (Örneğin, Kaliper) çapraz bulaşma önlemek için dezenfeksiyon zorunludur.
Yanık yarası şifa karmaşık bir süreçtir. Belirli bir dizi faktöre işlem ağrı, kaşıntı ve bakteriyel kirlenme gibi şifa yara üzerinde olumsuz bir etkiye sahip için tespit edilmiştir. Acı hayvanın diyet üzerinde olumsuz bir etkisi vardır. Yeterli besin alımını, gecikmiş yara iyileşmesi kaçınılmazdır. Bu nedenle, her domuz buprenorfin (0.1 mg/kg, IM) ile günlük ağrı azaltmak 7 gün üst üste için enjekte ettiler. Gıda alımı bir hafta sonra oluşturma yanık yara takibi. Gün 7, buprenorfin (0.1 mg/kg, IM) gıda alımı bir düşüş gözlenmiştir sonra yönetim 14 güne kadar devam etti. Yara iyileşmesi için potansiyel bir risk olan bakteriyel enfeksiyon, inflamasyon tetiklemek ve iyileşme süreci daha fazla nemlendirin. Bu nedenle, klinik sosları önlemek ve olası bulaşma en aza indirmek için su geçirmez filmleri ile kaplıydı. Kaşıntı süreci şifa yara rahatsız bir parçasıdır. Domuz kendi arka için yara iyileşme sürecini olumsuz olabilir kaşıntı azaltmak için yere çizebilir. İyi bir pansuman yanık hızlanan özellikleri sahip kabul edilebilir bir yara izi ile şifa, enfeksiyon ve iltihap önleyen, ağrı hafifletilmesi ve kolay ve erken mobilizasyon19,20erişimine izin verme. Soyunma-ebilmek var olmak çıkarmak ne zaman daha fazla topikal uygulamalar ve/veya yara alan21,22ölçülmesi için gerekli. Dört katmanlı klinik soyunma bir domuz için uygulama klinik daha daha karmaşık ve zaman alıcı bir süreç olsa da, domuz modeli fare modeli daha yakın yaklaşım insan biyolojik yanıt verir. Domuz modeli kullanmanın pek çok potansiyel avantajları diğer türler preklinik test etmek için iyi bir platform yapmak.
Yara kapatma verimlilik ve yara alanı azaltma açısından klinik etkinliğinin bir %73.43±6.33 yara kapatma sonrası yanık günde 42 ortaya büyük harfler içeren bir soyunma kullanarak takip. Ayrıca, VSS puanı, bir doğrulanmış öznel ölçek puan de domuz bu çalışma17yaralarda değerlendirmek için kullanıldı. Hipertrofik Skar oluşumu deneysel pansumanlar, özellikle de klinik18ile tedavi sırasında izlemek önemlidir. KAPAKLAR uygulama yanık yaraları tedavi sonrası yanık günde 42 gün 21 puanları ile karşılaştırıldığında önemli bir değişiklik VSS puanlarında sonuçlandı. Yaralı bölgeyi yakından normal deri renk pigmentasyon, vascularity, esneklik ve yükseklik yaklaşık bir koşullarına geri yükleme girişiminde bir alt puanı gösterir. Ayrıca, H & E boyama sonuçlarını bir bozulmamış stratum korneum katmanı kapaklar tedavi alanında gösterilir. Bu sonucu şiddetli yanık yaralanma domuz model güvenilir bir şekilde yara alan, yara kapatma, VSS puanı ve şifa ilerlemeyi değerlendirmek için kullanılabilir öneriyor.
Bu iletişim kuralı bir domuz modeli şiddetli yanık yaralanma bir deneysel bir soyunma kullanımını gösteren çok sayıda ayrıntılı adımları temsil eder ve klinik soyunma herhangi bir tür değerlendirilmesi için uygulanabilir. Gliserin 50 mL ile dolu bir değiştirilmiş havya yara oluşturma işlemi sırasında içinde 137-139 ° C sıcaklık sürdürmek yeteneğine sahiptir. Ancak, bu yöntem kesinlikle gerçek yanık sıcaklığı ve havya kapsamı nedeniyle oluşturulan yazma alanının oyuğun taklit etmek için yetersizlik gibi sınırlamalar vardır. Ancak, yöntem başlıca avantajları bu sınırlamalarının üstesinden gelir. Bu değiştirilmiş demir doğruluk ve kolaylığı için geleneksel yöntemlerle karşılaştırıldığında tutarlı yaralar oluşturmak için kullanılabilir. Ayrıca, bu model hassas ölçüsü çeşitli klinik sosları tedavi altında bir termal yanık yaralanma fizyolojik ve patofizyolojik yanıt sağlar. Yanı sıra ekonomik avantajları, önerilen modelin avantajı nispeten küçük cerrahi deneyime sahip olanlar tarafından işlenmesi kolay olmasıdır. Domuz modeli yaralarda için klinik soyunma uygulanması insan yara iyileşmesi biyolojik süreçleri taklit eder. Bu nedenle, domuz modeli kurulmuş ve bu çalışmanın klinik remake ile test şiddetli yanık yaralanma yanık yaralanma için yeni tedavi gelişimini kolaylaştırır. Bu çalışmada yanık yara iyileşmesi patofizyolojisi ortaya çıkarmak için çok önemli araçlar sağlar. Sonuç olarak, bu domuz modeli şiddetli yanık yaralanmalarında klinik sosları etkisini değerlendirmek için kolay öğrenmek, maliyet-etkin ve güçlü bir yöntem sağlar.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Yazarlar ifşa gerek yok.
Acknowledgments
Bu çalışmada Tri-hizmet Hastanesi'ne hibe tarafından desteklenen; Ulusal Savunma Tıp Merkezi, Tayvan (TSGH-C107-042); Bakanlığı Bilim ve teknoloji, Tayvan (çoğu 106-2314-B-016-014); ve ulusal savunma Tıp Merkezi (MAB-106-055; MAB-106-010; MAB-107-064).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Sedation: | |||
| Ketamine | Merial | 2528 ESP | 10 mL vial |
| Azaperone | China chemical & pharmaceutical | 47W406 | 100 mL vial |
| Atropine | Oriental chemical works | IN120802 | 1 mL vial |
| Anesthetic: | |||
| Tiletamine+Zolazepam | Virbac | BC91 | 5 mL vial |
| Isoflurane | Baxter | N002A225 | 100 mL vial |
| Surgery: | |||
| Hair clippers | Moser | - | - |
| Povidone iodine scrub solution | Ever star | HA161202 | 4 L barrel |
| Modified iron | - | - | - |
| 0.9% saline solution | CHI SHENG | KC130 | 500 mL vial |
| Gauze | China Surgical Dressings Center | MO15900080 | 10 x10 cm |
| CAPS | CoreLeader Biotech Co., Ltd, Taipei, Taiwan | - | - |
| Paper tape | 3M | NDC-8333-1530-01 | 2.5 cm x 9.1m |
| Waterproof film | 3M | NDC-8333-1600-40 | 10 cm x 10 m |
| Adhesive plaster | Young chemical | BH1426015 | 10 cm x 10 m |
| Dissection: | |||
| Pair of standard sharp/blunt straight scissors (14 cm) | Shinetec instruments | ST-S114 | - |
| Halstead-Mosquito (12.5 cm) | Shinetec instruments | ST-H012 | - |
| Handle(# 4) | Shinetec instruments | ST-H004 | - |
| Surgical Blade(#21) | Shinetec instruments | ST-B021 | - |
| Post-Fixation & Storage: | |||
| 50 ml Plastic centrifuge tube | Falcon | 352070 | - |
| 10% neutral buffered formalin | Leica | 3800604EG | - |
| Bacterial Growth Experiments | |||
| Blood agar plate (BAP) (TSA with 5% sheep blood) | CMP | - | 90 mm Mono |
References
- Sen, C. K., et al. Human skin wounds: a major and snowballing threat to public health and the economy. Wound Repair Regeneration. 17, 763-771 (2009).
- Sen, C. K. Wound healing essentials: let there be oxygen. Wound Repair Regeneration. 17, 1-18 (2009).
- Verhaegen, P. D., et al. Differences in collagen architecture between keloid, hypertrophic scar, normotrophic scar, and normal skin: an objective histopathological analysis. Wound Repair Regeneration. 17, 649-656 (2009).
- Experimental Surgery and Physiology: Induced Animal Models of Human Disease. Swindle, M. M., Adams, R. J. , Williams and Wilkins. Baltimore. (1988).
- Swindle, M. M., Smith, A. C. Swine as Models in Biomedical Research. , Iowa State University Press. Ames. (1992).
- Advances in Swine in Biomedical Research. Vols 1-2. Tumbleson, M. E., Schook, L. B. , Plenum Press. New York. (1996).
- Wang, C. H., et al. Enhanced wound-healing performance of a phyto-polysaccharide-enriched dressing - a preclinical small and large animal study. International Wound Journal. 14, 1359-1369 (2017).
- Rowan, M. P., Cancio, L. C., Elster, E. A., Burmeister, D. M., Rose, L. F., Natesan, S., Chan, R. K., Christy, R. J., Chung, K. K. Burn wound healing and treatment: review and advancements. Journal of Critical Care. 19, 243 (2015).
- Wong, V. W., Sorkin, M., Glotzbach, J. P., Longaker, M. T., Gurtner, G. C. Surgical approaches to create murine models of human wound healing. Journal of Biomedicine and Biotechnology. 969618, 8 (2011).
- Gaines, C., Poranki, D., Du, W., Clark, R. A., Van Dyke, M. Development of a porcine deep partial thickness burn model. Burns. 39, 311-319 (2013).
- Gnyawali, S. C., Barki, K. G., Mathew-Steiner, S. S., Dixith, S., Vanzant, D., Kim, J., Dickerson, J. L., Datta, S., Powell, H., Roy, S., Bergdall, V., Sen, C. K. High-resolution harmonics ultrasound imaging for non-invasive characterization of wound healing in a pre-clinical swine model. PLoS One. 10 (3), e0122327 (2015).
- Eaglstein, W. H., Mertz, P. M. New methods for assessing epidermal wound healing: the effects of triamcinolone acetonide and polyethelene film occlusion. Journal of Investigative Dermatology. 71, 332-384 (1978).
- Swindle, M. M., Smith, A. C. Comparative anatomy and physiology of the pig. Scandinavian Journal of Laboratory Animal Sciences. 25, 1-10 (1998).
- Swindle, M. M. Swine in the Laboratory: Surgery, Anesthesia, Imaging and Experimental Techniques. , 2nd ed, CRC Press. Boca Raton. (2007).
- Mertz, P. M., et al. IL-1 as a potent inducer of wound re-epithelization. Progress in Clinical and Biological Research. 365, 473-480 (1991).
- Eming, S. A., Martin, P., Tomic-Canic, M. Wound repair and regeneration: mechanisms, signaling, and translation. Science Translation Medicine. 6, 265-266 (2014).
- Aryza, M. J., Baryza, G. A. The Vancouver Scar Scale: an administration tool and its interrater reliability. The Journal of Burn & Rehabilitation. 16, 535-538 (1995).
- Bystrom, A., Claesson, R., Sundqvist, G. The antibacterial effect of camphorated paramonochlorophenol, camphorated phenol and calcium hydroxide in the treatment of infected root canals. Endodontics & Dental Traumatology. 1, 170-175 (1985).
- Reig, A., Tejerina, C., Codina, J., Hidalgo, J., Mirabet, V. Application of a new cicatrization dressing in treating second-degree burns and donor sites. Annals of Burn and Fire Disasters. 4, 174 (1991).
- Hindy, A. Comparative study between sodium carboxymethyl-cellulose silver, moist exposed burn ointment, and saline-soaked dressing for treatment of facial burns. Annals of Burn and Fire Disasters. 22, 131-137 (2009).
- Galiano, R. D., et al. Topical vascular endothelial growth factor accelerates diabetic wound healing through increased angiogenesis and by mobilizing and recruiting bone marrow-derived cells. The American Journal of Pathology. 164, 1935-1947 (2004).
- Thangarajah, H., et al. The molecular basis for impaired hypoxia-induced VEGF expression in diabetic tissues. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. , 13505-13510 (2009).
