병아리 예 비켜 문화와 예 비켜 CAM 어세이 : 그게 정말로 작동하는 방법

병아리 chorioallantoic 막 (CAM)은 angiogenesis와 tumorigenesis을 연구하는 독특한 자연 immunodeficient 지원 문화 환경입니다. 이 비디오 기사는 여자의 서로 다른 단계를 보여줍니다 예 비켜 문화, 가능성 angiogenic 물질 및 CAM의 표면에 종양 세포와 조직을 성공적으로 접종의 응용 프로그램입니다.

안녕하세요, 저는 수잔 파아입니다. 저는 독일 부르크 에젠 대학(University of Burg Esen)의 생화학 내분비학과 생리화학 화학 연구소(Institute of Physiological Chemistry)에서 근무하고 있습니다. 안녕하세요, 저는 Daniel Ze Basian Dole입니다.

저는 수잔과 같은 기관에서 왔습니다. 안녕하세요, 저는 부르크 대학의 신경학과 해부학 연구소의 만입니다. CH X 문화와 co membrane 에세이가 실제로 어떻게 작동하는지 보여 드리겠습니다.

이제 실험실로 가보겠습니다. 최근의 대부분의 실험 연구에서 Chico 멤브레인 인 cam은 달걀 껍질을 통해 창을 절단하여 노출되었으며 실험은 ovo에서 수행되어 CAM의 접근성과 효과의 관찰 및 사진 문서화 가능성에 상당한 제한이 발생했습니다. 병아리 배아의 X 난자 배양은 캠과 병아리 배아의 접근성을 크게 촉진합니다.

배아의 효과 및 실험적 조작에 대한 생체 내 문서화를 용이하게 하는 박동하는 심장을 참조하십시오. 이 비디오 기사에서는 수많은 과학적 질문에 대한 X ovo 배양의 성공적인 적용에 대한 단계별 시연을 제공할 것입니다. 알은 움직이는 트레이가 있는 인큐베이터에서 부화됩니다.

여기에서 발열체와 트레이 무버가 하루에 12번 연속적으로 계란을 회전시키는 것을 볼 수 있습니다. 인큐베이터 하단의 플라스틱 용기에 물을 넣어 습도를 60%로 유지하고, 인큐베이션 온도는 배양 시작 전에 섭씨 37.5도로 설정합니다. 달걀 껍질에서 먼지, 깃털 및 배설물을 조심스럽게 제거하고 에탄올이나 소독제로 난자를 기계적으로 닦아내지만 배아의 생존율을 크게 떨어뜨립니다.

알은 인큐베이터의 움직이는 트레이에 수평으로 배치됩니다. 자유로운 회전이 가능하도록 개별 알 사이에 충분한 거리를 유지하십시오. 부화 후 72 시간 동안 난자를 인큐베이터에서 제거하고 배아가있는 난자의 윗면은 연필로 표시합니다.

배아는 어느 정도 회전에 저항하고 여기에 남아 있기 때문에 더 나은 느낌을 위해 난자를 깨기 위해 장갑을 사용해서는 안 되지만 손은 70% 에탄올로 소독해야 합니다. 계란은 상단에 연필 표시가 있는 상태로 수평으로 잡고 삼각형 자기 교반 막대의 가장자리에 금이 있습니다.균열 절차 중 최대한의 힘 제어를 위해 팔꿈치가 벤치 상단에 놓이지 않아야 합니다. 금이 가는 동안 달걀 껍질과 난막이 열리는 것이 중요합니다.달걀 흰자가 새는 것은 난막에 구멍이 뚫렸다는 안전한 신호입니다.

계란은 애국자 접시의 바닥 가까이에 보관됩니다. 이 초기 개봉 절차에서 달걀 흰자가 더 이상 누출되지 않도록 하려면 패트리어트 접시 바닥의 달걀 흰자가 달걀 내부의 나머지 부분과 여전히 연결되어 있는 것이 중요합니다. 그 결과 엄지와 중지로 달걀의 균열과 적도를 통과하는 경락에 부드럽게 압력을 가하여 난황을 제자리에 고정하는 계란 내부의 진공이 생성되므로 진공과 계란 내용물의 압출을 조절할 수 있습니다.

그런 다음 달걀의 내용물을 노른자가 손상되지 않은 상태로 페트리 접시로 옮길 수 있습니다. 난자를 부드럽게 들어 올리고 껍질의 양쪽 반쪽을 조심스럽게 분리한 다음 난자 배양액을 트레이에 놓고 인큐베이터에 다시 넣고 섭씨 37.5-38.2도, 습도 70%로 유지합니다. 이산화탄소나 산소의 공급은 필요하지 않습니다.

뚜껑과 접시 사이에 스페이서가 있는 특수 패트리어트 접시와 환기 그리드가 있는 인큐베이터를 사용하는 경우 환기 그리드를 반쯤 열어 두어야 합니다. 오토클레이브 필터 종이는 캠의 자극을 최소화하는 것으로 보이기 때문에 캠에 적용되는 액체 물질의 지지 재료로 사용됩니다. 적용 부위는 배아와 캠의 경계 사이의 중간에 있어야 하며, 그렇지 않으면 배아가 투과광의 영향을 미시적으로 관찰하는 데 방해가 됩니다.

여기서 아트로핀의 액체는 건조를 피하기 위해 필터를 캠에 장착한 직후에 도포해야 합니다. 추가 용량 또는 완충액은 매일 다시 도포해야 합니다. 캠이 완전히 개발되면 최대 6개의 다른 샘플을 적용할 수 있으며 효과를 비교할 수 있습니다: 1밀리리터에서 절단된 단일 캠 링, 피펫 팁은 무게를 최소화하고 캠의 압흔을 방지하기 위해 가능한 한 얇게 절단해야 합니다.

그런 다음 링을 캠에 적용하고 세포를 링에 피펫으로 넣습니다. 해밀턴 마이크로리터 주사기는 70% 에탄올로 여러 번 헹구고 마지막으로 멸균 인산염 완충 식염수 또는 PBS로 헹굽니다., 마이크로 주사기는 준비된 세포 현탁액으로 조심스럽게 채워지지만 주사기 바늘로 캠과 눈층을 빠르게 관통하고 세포 현탁액을 지속적으로 주입합니다. 바늘은 주입된 세포 현탁액의 손실을 방지하기 위해 눈에 몇 초 동안 남아 있어야 합니다. 누출 확인 X Ovo.

3일 동안 부화한 난자의 배양액은 사지 새싹 기증자로 사용됩니다. 배아는 연결된 난황 혈관에서 해부됩니다. 원을 잘라 배아를 작은 배수 숟가락을 사용하여 차가운 멸균 PBS로 채워진 페트리 접시로 옮기고 교반으로 씻습니다.

그런 다음 배아를 멸균 PBS로 채운 새로운 페트리 접시로 옮기고 주변 막에서 분리한 다음 가는 집게로 조심스럽게 떼어냅니다. 팔다리 싹은 가능한 한 몸에 가까운 집게로 분리하고 잡고 8-10일 된 숙주 닭의 캠으로 옮깁니다. 원하는 적용 부위에서 캠은 집게 한 덩어리로 부드럽게 긁어내면 선택적으로 외상을 입습니다.

그런 다음 이식편을 잡고 다른 집게 덩어리와 함께 캠에 겹겹이 쌓습니다. 희생 여성 마우스는 보드에 고정되어 있습니다. 복벽은 정중선을 따라 절단된 70% 에탄올로 촉촉하게 적셔지고 피부 플랩은 핀으로 측면으로 고정됩니다.

자궁은 복부에서 제거되어 분리되어 비커로 옮겨집니다. 콜드 PBS와 함께. 배아 막은 시연 목적으로 겸자를 사용하여 조심스럽게 제거합니다.

사지 싹의 더 나은 가시성을 위해 16일 된 마우스 배아가 여기에 표시됩니다. 최적의 접목 결과만 얻을 수 있습니다. 그러나 10일에서 13일 된 배아의 사지 싹을 사용하는 경우 사지 싹을 자르거나 가능한 한 몸에 가까운 미세한 집게를 사용합니다.

원하는 적용 부위에서 CAM은 집게로 부드럽게 긁어내면 선택적으로 외상을 입습니다. 그런 다음 사지 새싹을 잡고 8-10일 된 숙주 닭의 CAM으로 옮깁니다. 이식편은 과도한 PBS를 제거하기 위한 최종 이식편이 없는 캠 측면에 한두 번 배치됩니다.

이식편은 혈관 종양의 Y 분기점 근처 캠에 이상적으로 배치됩니다. 생검은 멸균 메스에 의해 1-2입방 밀리미터 조각으로 절단됩니다. 생검 표면에서 물질을 채취하면 근육 또는 결합 조직의 오염 위험이 증가합니다.

원하는 적용 부위에서 CAM은 부드러운 긁힘에 의해 선택적으로 외상을 입습니다. 생검 샘플의 핵심 조각을 8-10일 된 숙주 닭의 CAM에 이식합니다. 이식편은 혈관의 Y 분기점 근처 캠에 이상적으로 배치됩니다.

그런 다음 이식편은 최소한의 PBS가 부착된 CAM으로 옮겨집니다. 가벼운 압력이 가해지면 이식편이 캠의 결과 움푹 들어간 곳으로 이동하게 될 수 있습니다. 숙주 병아리 배아는 참수에 의해 살해됩니다.

이식편이 부착된 CAM은 원형 절단으로 제거되고 PBS로 채워진 페트리 접시로 옮겨집니다. 이전 부착 부위를 제외하고 이식편에서 과도한 CAM이 절단됩니다. 다시 원하는 응용 프로그램 사이트에서.

새로운 숙주 병아리 배아의 캠은 부드러운 긁힘에 의해 선택적으로 외상을 입고, 이식편은 최소한의 PBS가 부착된 두 번째 숙주의 캠으로 옮겨집니다. 우리는 CH X 또는 문화가 실제로 어떻게 작동하는지 보여주었습니다. Orval 실험과 비교하여 장점을 보여 드렸고 그 적용에 대한 몇 가지 예를 들었습니다.

그게 다야. 시청해주셔서 감사드리며, 여러분의 실험에 행운을 빕니다.