Name: 마우스 뒷면에서 게놈 DNA의 분리 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-07-29T00:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 26 s
Description: 배우세요 생후 10일 된 마우스 새끼의 꼬리 생검을 통해 게놈 DNA를 분리하는 방법을. 오염 방지와 개체 식별 기법을 포함하여 정확한 유전자 분석을 위한 표준 절차를 익힐 수 있습니다.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol style="margin-top: 0in"><li> 꼬리 조각 (3mm)과 마크 귀를 컷. </li><li> 720m 리터 인트 30 M L Proteinase K (10 MG / ML 주식)을 추가합니다. </li><li> 55 품어 ° 가열 블록 및 와동 10 초 최고 속도로 3 시간 동안 매 시간에 C. </li><li> ° C 5 분 70 proteinase K를 Inactivate. </li><li> 5 분 얼음 끄다. </li><li> 최고 속도로 10 분 꼬리 DNA를 원심 분리기. </li><li> 720m 리터 이소프로판올를 포함하는 새로운 튜브에 가만히 따르다. &nbsp; </li><li> 반전 튜브 또는 vortexing으로 침전물의 DNA. </li><li> 최고 속도에서 5 분간 DNA를 스핀 다운. 뜨는 제거합니다. </li><li> 70 % 에탄올로 펠렛을 씻으십시오. </li><li> 전속력으로 게놈 DNA 5 분 스핀 다운. 뜨는 제거합니다. </li><li> DNA 1-2 분 동안 건조하실 수 있습니다. </li><li> 펠렛의 크기에 따라 100-200미터의 리터의 Resuspend의 DNA. </li><li> 55 플레이스 튜브 ° C 1 시간 동안 DNA의 해체를 촉진합니다. &nbsp; </li></ol>

마우스 뒷면에서 게놈 dna의 분리

Isolation of Genomic DNA from Mouse Tails

마우스 뒷면에서 게놈 DNA의 분리

이 쥐 새끼는 생후 10일 되었으며, 꼬리 생검을 수행한 후 꼬리에서 게놈 DNA를 추출할 것입니다. 우선 꼬리 끝부분을 약 3mm 정도 잘라낸 다음, 잘라낸 꼬리 조각을 에펜도르프 튜브에 넣고 해당 튜브를 드라이아이스 위에 올립니다. 이때 쥐 사이의 교차 오염을 방지하기 위해, 보통 면도날에서 마지막으로 절단한 지점을 표시해 둡니다.그런 방식으로 다음 마우스의 꼬리 생검을 수행할 때는 반드시 깨끗한 면도날 조각을 사용하겠습니다. 한 배에서 태어난 서로 다른 마우스들을 구분하기 위해서는 마우스들을 식별할 방법이 필요합니다. 한 가지 방법은 여기 보이는 이어 홀 펀처(ear hole puncher)를 사용하여 귀에 구멍을 뚫는 것입니다.마우스의 목덜미를 부드럽게 잡아 뒤집은 다음, 꼬리를 손가락 사이에 끼워 고정합니다. 다른 쪽 손으로 귀 펀치를 잡고 마우스의 귀 부분을 빠르게 뚫어줍니다. 통증 없이 진행된 것을 확인하십시오.이제 이p-tube에 꼬리 조각들이 들어 있는 것을 볼 수 있습니다. 이제 소화를 돕는 용액들을 추가하겠습니다. 먼저 STE 용액 720 µL를 넣고, 이어서 Proteinase K 30 µL를 추가하겠습니다. 여기 소화 전 단계에서 절단한 꼬리 조각의 모습이 있습니다.이제 꼬리 조각들을 55°C 가열 블록에 놓겠습니다. 많은 프로토콜에서 55°C에서 지속적으로 흔들어주는 록킹(rocking) 방식을 요구하지만, 여기서는 꼬리 조각들을 볼텍싱(vortexing)할 예정이므로 그럴 필요가 없습니다. 이제 꼬리 조각을 2초 동안 볼텍싱하겠습니다.하나, 둘. 볼텍싱 후, 여기 에펜도르프 튜브 내부의 상태를 보시면 꼬리 조각이 완전히 용해된 것을 확인할 수 있습니다. 70 °C에서 5분 동안 proteinase K를 활성화하십시오. 얼음 위에서 5분 동안 냉각하여 반응을 중단시키십시오.마이크로 원심분리기를 사용하여 꼬리 부분을 최대 속도로 10분 동안 원심 분리하십시오. 이 마이크로 원심분리기의 최대 속도는 13,000 RPM입니다. 소화된 꼬리 부분이 원심 분리되는 동안, 몇 개의 에펜도르프 튜브에 라벨을 붙이고 750 µL의 이소프로판올을 채우십시오.소화된 꼬리 조직을 원심분리하면 털과 소화되지 않은 물질이 튜브 바닥에 펠렛 형태로 형성되므로 상층액을 따라냅니다. 소화된 물질, STE 및 proteinase K가 포함된 용액을 isopropanol이 들어있는 eppendorf 튜브에 넣으면 DNA가 용액에서 석출되기 시작하며, 유령이나 깃털 같은 모습으로 나타납니다. 바로 저렇게 떠다니는 거품 같은 것이 마우스 꼬리에서 분리된 genomic DNA입니다. isopropanol과 STE 용액을 혼합한 후, genomic DNA가 용액에서 석출되어 여기 보이는 작은 공 모양으로 나타나게 됩니다. 침전된 genomic DNA를 마이크로 원심분리기로 최고 속도에서 5분 동안 원심분리합니다.튜브 바닥에 펠릿 형태의 게놈 DNA가 보입니다. 이제 튜브 내부의 용액을 흡입하여 제거하고 게놈 DNA 펠릿만 남기겠습니다. 다른 튜브를 흡입할 때마다 팁을 교체하겠습니다.이 흡입기 팁 끝에 팁을 끼웁니다. STE와 이소프로판올을 흡입하여 제거한 후, genomic DNA 펠렛을 세척하기 위해 70% ethanol 1 mL를 첨가합니다. genomic DNA 펠렛은 보통 마이크로 원심분리 튜브 벽면에 달라붙어 70% ethanol에서 완전히 세척하기 어렵기 때문에, 여기 있는 마이크로 원심분리 튜브 랙에 튜브를 긁어 펠렛을 떼어내야 합니다.이런 방식으로 진행하면 됩니다. 여기 70% ethanol로 펠렛화하고 세척한 후의 genomic DNA 모습입니다. 다시 최대 속도로 5분 동안 원심분리한 다음, 70% ethanol을 흡입하여 제거하고 세척된 genomic DNA 펠렛을 원심분리합니다.70% ethanol을 넣고 5분 동안 최대 속도로 원심분리한 후, 70% ethanol을 흡입하여 제거하고 DNA를 5분 동안 건조시킵니다. 튜브 바닥에 있는 genomic DNA 펠렛을 확인하면, 원하는 정도로 충분히 건조된 상태입니다. 이제 마우스 꼬리에서 추출한 genomic DNA 펠렛을 건조했으므로, pH 8의 40 mM Tris 100 µL를 첨가하겠습니다.따라서 genomic DNA를 50 °C에서 보관하는데, 이렇게 하면 상온에서보다 더 빠르게 용해됩니다. 50 °C에서 약 1시간 정도 지난 후, PCR 반응을 통해 어떤 마우스가 내 transgene에 대해 양성인지 확인할 때까지 이를 냉동 보관하거나 4 °C에 둡니다.

isolation-of-genomic-dna-from-mouse-tails

Research

연구

JoVE Journal

Biology

생물학

조직 소화 및 PCR 판독 포함 마우스 꼬리 샘플의 전체 genotyping은, 하나는 시그마의 SYBR 그린 추출 - N - 앰프 조직 PCR 키트를 사용하여 시간 반에서 이루어집니다.

시그마의 압축을 풉니다 - N - 앰프 조직 PCR 키트를 사용하여 마우스 조직의 신속한 Genotyping

우리는 마우스 배아 조직에서 조직 특정 유전자 발현의 시작하는 동안이나 이후에 조직 특정 유전자의 상호 작용 요소를 식별하는 방법은 염색질의 immunoprecipitation (칩)을 보여줍니다. 그것이 정상적인 배아 발달 동안 발생으로이 프로토콜은 조직 특정 유전자 활성화의 연구에 대해 광범위하게 적용되어야합니다.

초기 마우스 배아를 사용하는 조직 특정 유전자에 대한 염색질의 Immunoprecipitation 분석

저희는 미국 피카에 표시 효율적으로 어려운 작은 포유류에서 머리카락 샘플을 수집하는 비침 투 샘플링 방법을 제시한다. 우리는 샘플 머리카락에서 DNA를 추출하여 일반적으로 야생 동물의 생태와 보존 연구에 사용된 분자 마커의 여러 유형을 확장하여이 방법의 유틸리티를 보여줍니다.

엘루시브 작은 포유류의 고품질 DNA를 얻기 위해 비침 투 헤어 샘플링 기법

이 비디오에서는 마우스 모델에서 말초 혈액을 수집하기 위해 꼬리를 자르는 절차를 보여줍니다. 수집된 혈액은 이후 추가 실험에 사용할 수 있는 별도의 혈장으로 원심분리됩니다.

말초 혈액 수집 및 혈장 분리를 위한 마우스 꼬리 싹둑 촬영 절차

우리는 귀 및 쥐의 꼬리에서 일차 섬유 아세포를 생성하기위한 간단하고 신속한 실험 절차를 설명한다. 절차는 특별한 동물 훈련을 필요로하지 않고, 최대 10 일 동안 실온에서 저장 귀에서 배양 섬유 아세포의 생성을 위해 사용될 수있다.

마우스 귀와 꼬리 조직에서 생성 차 섬유 아세포 배양

마우스 oocytes의 microinjection는 일반적인 transgenesis ( 즉, transgenes의 무작위 통합) 및 CRISPR 매개 유전자 타겟팅 모두에 일반적으로 사용됩니다. 이 프로토콜은 품질 관리 및 유전자 타이핑 전략에 중점을두고 마이크로 인젝션의 최신 개발 상황을 검토합니다.

난 모세포의 미세 주입을 통한 유전자 조작 마우스의 생성

우리는 유전자 변형 쥐의 배양된 세포에 람다 선택 cII 돌연변이 분석 결과 또는 해당 동물의 화학/물리적 에이전트 처리에 대 한 상세한 프로토콜을 설명 합니다. 이 접근은 변이 포유류 세포에서 발암 물질의 테스트를 위한 널리 사용 되었습니다.

선택 하는 람다 cII 돌연변이 탐지 시스템

여기, 선물이 빠르게 다운스트림 대규모 병렬 RNA 시퀀싱 신선 또는 냉동 조직에서 높은-품질 핵을 분리 하는 프로토콜. 우리는 세제-기계 및 소형 기계 조직 장애 및 셀 세포 옵션을 둘 다 핵의 격리에 대 한 사용할 수 있습니다를 포함 합니다.

대규모 병렬 단일 핵 RNA 시퀀싱에 대 한 성인 척수 핵의 절연

본 프로토콜은 Gja1에서 전장 Connexin43 생성을 유지하지만 더 작은 GJA1-20k 내부 번역 이소형의 번역을 방지하는 단일 M213L 돌연변이를 기술한다.

전장 단백질의 발현을 유지하면서 mRNA로부터 내부 번역 개시 부위의 제거

이 프로토콜은 자가면역 질환 발병 중 쥐 장내 미생물 변화를 분석하기 위한 간단하고 비용 효율적인 DNA 분리 방법을 제공합니다.

간단하고 비용 효율적인 DNA 분리 방법을 사용한 루푸스 경향 마우스의 분변 미생물 역학 분석

우리는 유전자 조작 마우스 모델에서 발생하는 종양과 해당 인간 종양 유형에서 발생하는 종양의 치료 표적을 식별하고 비교하기 위해 게놈 분석 및 기능적 게놈 스크리닝을 활용하는 종간 비교 종양유전체학 접근 방식을 개발했습니다.

악성 말초 신경초 종양의 마우스 모델에서 치료 표적을 식별하기 위한 유전자 프로파일링 및 게놈 규모 드롭아웃 스크리닝

배우세요 생후 10일 된 마우스 새끼의 꼬리 생검을 통해 게놈 DNA를 분리하는 방법을. 오염 방지와 개체 식별 기법을 포함하여 정확한 유전자 분석을 위한 표준 절차를 익힐 수 있습니다.

마우스 뒷면에서 게놈 DNA의 분리

더 많은 동영상 탐색