마우스 뒷면에서 게놈 DNA의 분리

이것은 10일 된 새끼 쥐인데 저는 꼬리 생검을 할 것이고 그 다음에는 꼬리에서 게놈 DNA를 추출할 것입니다. 제가 할 일은 꼬리를 약 3mm 정도 잘라낸 다음 꼬리 조각을 에이노르 튜브에 넣고 에이노르 튜브를 드라이아이스 위에 올려놓는 것입니다. 이제 한 마우스에서 다른 마우스로 오염되는 것을 피하기 위해 저는 보통 마지막으로 자른 부분에 면도날을 표시합니다.

그렇게 하면 다음 쥐를 위해 깨끗한 면도날을 사용하여 다음 꼬리 생검을 할 수 있습니다. 새끼에 있는 다른 쥐를 구별하려면 쥐를 식별할 수 있는 방법이 필요합니다. 그렇게 하는 한 가지 방법은 여기에 표시된 귀 구멍 펀처를 사용하여 귀에 구멍을 뚫

마우스의 목덜미를 부드럽게 잡고 뒤집어 손가락 사이에 꼬리를 끼웁니다. 다른 손으로 귓구멍 구멍을 뚫고 마우스의 귀를 빠르게 잘라냅니다. 얼마나 고통스럽지 않았나요?

자, 이제 이 einor 튜브에 꼬리 조각이 몇 개 있는 것을 볼 수 있고 이제 그들이 소화하는 데 도움이 되는 솔루션을 추가하겠습니다. 먼저 720마이크로리터의 STE 용액을 추가한 다음 30마이크로리터의 단백질을 추가할 것입니다. 에이스 K.So 소화하기 전에 자른 꼬리 부분을 보여드리겠습니다.

이제 꼬리 조각을 55도 가열 블록에 놓을 것입니다. 많은 프로토콜은 55도에서 연속 모션 흔들기를 요구하지만 꼬리 조각을 소용돌이칠 것이기 때문에 내 목적에는 필요하지 않습니다. 이제 2초 동안 꼬리 조각을 소용돌이치겠습니다.

하나 둘. 소용돌이 후 아이노르 튜브 내부에 무엇이 남아 있는지 보시면 꼬리 조각이 완전히 용해되어 섭씨 70도에서 5분 동안 단백질 분해 효소 K가 활성화되는 것을 볼 수 있습니다. 얼음에 5분간 담금질합니다.

마이크로 원심분리기에서 꼬리 조각을 최고 속도로 10분 동안 회전시킵니다. 이 마이크로 분리기에서는, 전속력은 13, 000 분당 회전수입니다. 소화 꼬리가 회전하는 동안 일부 einor 튜브에 750마이크로리터의 이소프로판올을 채웁니다.

소화된 꼬리를 회전시킨 후 머리카락과 소화되지 않은 물질은 튜브 디캔트 바닥에 펠릿을 형성합니다. 이소프로판올 DNA가 들어 있는 einor 튜브에 소화된 물질인 STE와 proteinase K를 포함하는 용액이 용액에서 나오기 시작하고, 유령 같고 깃털처럼 나타나고, 바로 그 거품 주위를 헤엄치고 있는 것은 쥐의 꼬리에서 분리된 게놈 DNA입니다. 이소프로판올과 STE 용액을 혼합한 후 게놈 DNA가 용액에서 나오고 바로 여기 이 작은 공이 나타나 침전된 게놈 DNA를 마이크로 원심분리기에서 전속력으로 5분 동안 회전시킵니다.

튜브의 맨 아래에는 펠릿 모양의 게놈 DNA가 있습니다. 이제 튜브 내부의 용액을 흡인하고 게놈 DNA 펠릿만 남겨 두겠습니다. 다른 튜브를 흡입할 때마다 파이프를 교체합니다.

이 흡인기 끝에 있는 애완 동물 팁. STE와 이소프로판올을 흡인한 후 70% 에탄올 1ml를 첨가하여 게놈 DNA 펠릿을 세척합니다. 게놈 DNA 펠릿은 일반적으로 마이크로 퍼지 튜브의 측면에 부착되어 70% 에탄올로 철저히 세척하기 어렵기 때문에 여기에 있는 마이크로 퍼지 튜브 랙을 가로질러 긁어모아야 합니다.

그렇게 할 수 있습니다. 자, 여기 펠릿화되어 70% 에탄올로 세척된 후의 게놈 DNA를 살펴보겠습니다. 이것을 다시 5분 동안 최고 속도로 회전시킨 다음 세척 후 게놈 DNA 펠릿을 70% 에탄올 스핀다운으로 흡인할 것입니다.

70% 에탄올을 전속력으로 5분 동안 가열하여 70% 에탄올을 흡인하고 DNA를 5분 동안 건조시킵니다. 튜브 바닥에 있는 게놈 DNA 펠릿을 보시면 원하는 만큼 건조합니다. 그래서 저는 쥐 꼬리에서 게놈 DNA 알갱이를 건조시켰고, 이제 pH 8에서 100마이크로리터의 40밀리몰 트리스를 추가할 것입니다.

그래서 저는 게놈 DNA를 섭씨 50도에서 얻었고, 거기서 그것은 실온을 추가하는 것보다 더 빨리 용액으로 들어갈 것입니다. 50도에서 약 한 시간 정도 후에 어떤 마우스가 내 이식 유전자에 양성인지 실제로 파악하기 위해 PCR 반응을 실행하고 싶을 때까지 얼리거나 4도로 둡니다.