Name: 형광현미경을 이용한 지질 이중층 내 단일 단백질 추적 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-12-12T13:30:00.000+00:00
Duration: 8 min 39 s
Description: 학습하세요 형광현미경을 이용한 지질 이중층 내 단일 단백질 추적 방법을. 생체모방막에서 막단백질 동역학을 연구하여 수송체 조절 메커니즘을 규명할 수 있습니다.

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<table><tbody><tr><td>1/4 웨이브플레이트</td><td>토를랩</td><td>WPQ05M-633</td><td>레이저와 꼭 맞춰</td></tr><tr><td>100X 오일 대물렌즈</td><td>올림포스</td><td>12-563-659</td><td>1.45 N/A 아포크로매틱</td></tr><tr><td>16:0-18:1 PC</td><td>아반티 극지 지질</td><td>850457</td><td>POPC 인지질</td></tr><tr><td>체육 PEG2000 18:0</td><td>아반티 극지 지질</td><td>880210</td><td>암모늄 소금</td></tr><tr><td>300mm 렌즈</td><td>토를랩</td><td>AC254-300-A-ML</td><td></td></tr><tr><td>633 nm He:Ne 레이저</td><td>멜레 그리오</td><td>05-LHP-927</td><td>다른 소스나 다른 파장으로 변경할 수 있습니다</td></tr><tr><td>633nm 밴드패스 필터</td><td>크로마 테크</td><td>633/10X</td><td>사용되는 레이저와의 일치</td></tr><tr><td>655nm 롱패스 필터</td><td>크로마 테크</td><td>ET655LP</td><td>염료/레이저 파장에 맞게 바꾸세요</td></tr><tr><td>안도르 솔리스 1세</td><td>안도르&nbsp;</td><td>안도르 솔리스 1세</td><td>이미지 캡처용 소프트웨어</td></tr><tr><td>ATTO 655 &nbsp;</td><td>ATTO-TEC</td><td>서기 655년</td><td>NHS-에스터 변형, 즉 단일 분자 작업에 적합한 변형된 모든 염료를 사용할 수 있습니다. ATTO가 권장되지만 Cy5/7도 사용할 수 있습니다</td></tr><tr><td>바이오비즈 SM-2 수지</td><td>바이오래드</td><td>1523922</td><td></td></tr><tr><td>염화칼슘</td><td>밀리포어 시그마</td><td>C4901</td><td></td></tr><tr><td>카탈라제</td><td>시그마-올드리치</td><td>C3155-50MG</td><td>소 간, 수성 소액, 그리고 GE에서 유래; 30000 단위/mg</td></tr><tr><td>클로로포름</td><td>피셔 사이언티픽 &nbsp;</td><td>C547-1</td><td>HPLC 또는 분광 등급</td></tr><tr><td>콜레스테롤</td><td>시그마-올드리치</td><td>C8667-500MG</td><td></td></tr><tr><td>커버슬립</td><td>ESCO 옵틱스</td><td>R525000</td><td>25mm 쿼츠</td></tr><tr><td>이색성 빔스플리터</td><td>셈록</td><td>FF545/650-Di01-25x36</td><td>염료/레이저 파장에 맞게 바꾸세요</td></tr><tr><td>EMCCD 카메라</td><td>안도르&nbsp;</td><td>아이손 울트라 888</td><td></td></tr><tr><td>팔콘 튜브 15mL&nbsp;</td><td>그레이너 바이오-원</td><td>188261</td><td>셀레스타 세포 배양관</td></tr><tr><td>포도당 산화효소</td><td>시그마-올드리치</td><td>G2133-50KU</td><td>Aspergillus niger, VII 타입 및 ge에서 유래; 100,000 단위/g 고체 (산소 첨가 제외)</td></tr><tr><td>히트건</td><td>하버 프레이트</td><td>56434</td><td>파라필름 가열에 사용되며, 일반적으로 어떤 히트건이든 사용할 수 있습니다</td></tr><tr><td>젠장</td><td>피셔 바이오리에이전트</td><td>BP310-500</td><td></td></tr><tr><td>저자가형광 침수 오일</td><td>토를랩</td><td>모일-30</td><td></td></tr><tr><td>메토날</td><td>피셔 사이언티픽 &nbsp;</td><td>A452-1</td><td>HPLC 또는 분광 등급</td></tr><tr><td>마이크로 원심분리관</td><td>VMR</td><td>525-1126</td><td>1.5 mL &nbsp;</td></tr><tr><td>마이크로 피페터</td><td>에펜도르프</td><td></td><td>다양한; 1000 & 마이크로; L, 100 및 마이크로; L 및 10 및 마이크로; L은 제안된다</td></tr><tr><td>& Oslash; 1.5인치 렌즈 튜브</td><td>토를랩</td><td>SM1.5L10</td><td>외부 나사산은 샘플 준비를 위해 잘라낸다</td></tr><tr><td>광학 표</td><td>뉴포트</td><td>RPR 릴라이언스</td><td>타벨의 크기는 사용 가능한 공간에 따라 달라집니다</td></tr><tr><td>광학 조직</td><td>토를랩</td><td>MC-50E</td><td>다양한 부품 청소</td></tr><tr><td>파라필름</td><td>밀리포어 시그마</td><td>P7669</td><td>과정 중에 가스 자체에 형광이 발생하지 않도록 확인하세요</td></tr><tr><td>압전 액추에이터</td><td>뉴포트</td><td>PZA12</td><td></td></tr><tr><td>공압 진동 차단기</td><td>뉴포트</td><td>I-2000 시리즈</td><td>광학 테이블의 불균형을 안정화하는 데 사용되었으며,</td></tr><tr><td>냉장 욕조</td><td>피셔 사이언티픽 &nbsp;</td><td>아이소템프 3016</td><td></td></tr><tr><td>셔터 컨트롤러</td><td>토를랩</td><td>SC10</td><td>영상 소프트웨어와 연동됨</td></tr><tr><td>염화나트륨</td><td>밀리포어 시그마</td><td>S988</td><td></td></tr><tr><td>스테리톱 필터</td><td>밀리포어 시그마</td><td>S2GPT05RE</td><td></td></tr><tr><td>스위치박스 드라이버 및 컨트롤러&nbsp;</td><td>뉴포트</td><td>PZC200</td><td>스테이지 컨트롤러</td></tr><tr><td>주사기 필터</td><td>J.T. 베이커</td><td>SF01-98</td><td>PES 25mm 0.2 & 마이크로; M</td></tr><tr><td>TEC 요소</td><td>토를랩</td><td>TEC3-2.5</td><td>펠타이어 히트펌프를 샘플 홀더 및 대물렌즈 칼라에 연결하는 데 사용됩니다</td></tr><tr><td>온도 조절기</td><td>미어스테터 엔지니어링</td><td>TEC-1091</td><td></td></tr><tr><td>온도 감지기</td><td>토를랩</td><td>TH100PT</td><td></td></tr><tr><td>서미스터</td><td>토를랩</td><td>TH10K</td><td></td></tr><tr><td>튜브-O-투암기</td><td>G 생명과학</td><td>786-611</td><td>4K MWCO</td></tr><tr><td>UV 오존 클리너</td><td>노바스칸</td><td>PSDP_UV</td><td>프로 시리즈 - 디지털 &nbsp;</td></tr><tr><td>줌 옵틱스&nbsp;</td><td>토를랩</td><td>SM1NR1</td><td></td></tr></tbody></table>

형광현미경을 이용한 지질 이중층 내 단일 단백질 추적

Tracking Single Proteins in Lipid Bilayers Using Fluorescence Microscopy

Direct observation is a fundamental method for scientific discovery and understanding. Time-lapse single-molecule fluorescence imaging allows the ...

tracking-single-proteins-lipid-bilayers-using-fluorescence

Research

연구

JoVE Journal

Biochemistry

생화학

이 프로토콜은 전반사 형광 현미경을 사용하여 살아있는 세포 표면의 단일 수용체를 시각화 및 추적하여 수용체 측면 이동성, 수용체 복합체의 크기를 분석하고 일시적인 수용체-수용체 상호 작용을 시각화하는 방법을 설명합니다. 이 프로토콜은 다른 막 단백질로 확장될 수 있습니다.

단일 분자 형광 현미경에 의한 수용체 역학의 고해상도 시공간 분석

원형질막 단백질과 지질의 공간 분포와 시간 역학은 생물학에서 뜨거운 주제입니다. 여기서 이 문제는 개념적으로 동일한 단일 입자 추적의 물리량을 제공하지만 작은 분자 레이블과 표준 현미경 설정을 사용하는 시공간 이미지 변동 분석을 통해 해결됩니다.

상용 현미경에서 라이브 세포막에 분자 확산 법률에 빠른 형광 이미징

우리는 고해상도 현미경 운모지지 지질 이중층을 제조하는 방법을 제시한다. 운모는 원자 규모에서 투명하고 평면이지만, 거의 때문에 어려움을 처리하는 영상에서 사용되지; 우리의 준비는 운모 시트도 증착 결과 및 이중층의 제조에 사용되는 물질을 감소시킨다.

운모의 준비 고해상도 광학 현미경 이미징 지질 이중층 지원

단백질 기능화 평면 유리 지지 지질 이중층의 준비, 내 단백질 이동성 측정 및 단백질 밀도 측정이 여기에 나와 있습니다. 노이즈를 줄인 내부 전반사(Total Internal Reflection) 현미경을 구축하기 위한 로드맵이 요약되어 있으며, 이를 통해 높은 시공간 해상도로 단일 이중층 상주 형광 색소를 시각화할 수 있습니다.

평면에 단일 분자 형광 현미경은 이중층 지원

여기, 우리는 단일 분자 감도와 ~ 15 밀리 초 시간 해상도와 편광 TIRFM를 사용하여 리포좀과 미세 유체 채널에 지원 이중층 사이에 하나의 SNARE 매개 융합 이벤트를 감지하는 프로토콜을 제시한다. 지질 용해성화물 분리를 동시에 검출 할 수있다. 리포좀의 크기, 지질 확산과 융합 기공 특성을 측정한다.

편광 TIRF 현미경에 의해 감시 미세 유동 흐름 전지에 닿는 지원 이중층 단일 테오의 SNARE 매개 퓨전

여기, 우리는 확산 계수, 형광 현미경 검사 법에 의해 감지 하는 단일 입자의 모션 및 클러스터 크기의 종류의 정량적 인 평가 허용 하는 이미지 분석을 추적 하는 단일 입자에 대 한 프로토콜을 제시.

확산의 분석 및 형광 현미경 검사 법에 의해 수용 체 막의 클러스터 크기에 대 한 프로토콜을 처리 하는 이미지

3D 단일 분자 국소화 현미경 검사법은 살아있는 세균 세포에서 형광표지된 단백질의 공간 위치 및 운동 궤적을 조사하는 데 사용됩니다. 본원에 기재된 실험 및 데이터 분석 프로토콜은 풀화된 단일 분자 궤적에 기초하여 세포성 단백질의 널리 퍼진 확산 거동을 결정한다.

단일 분자 추적 현미경 검사법 - 세포화 분자의 확산 상태를 결정하는 도구

이 프로토콜은 분자 질량의 동시 조사 및 지질 막과 상호 작용하는 거대 분자의 확산 거동을 가능하게하는 iSCAT 기반 이미지 처리 및 단일 입자 추적 접근법을 설명합니다. 샘플 준비, 질량 대비 변환, 영화 수집 및 사후 처리에 대한 단계별 지침이 잠재적 인 함정을 방지하기위한 지침과 함께 제공됩니다.

막과 관련된 거대분자 역학을 특성화하기 위한 질량 민감성 입자 추적

무세포 재구성은 세포 골격 어셈블리를 이해하는 핵심 도구였으며, 지난 십 년 동안의 연구는 최소한의 시스템에서 셉틴 역학을 연구하는 접근법을 확립했습니다. 여기에 제시된 것은 서로 다른 막 맥락에서 셉틴 어셈블리를 관찰하는 세 가지 보완적인 방법입니다 : 평면 이중층, 구형 지지대 및 막대 지지대.

생체 물리학 적 특성과 기능을 연구하기 위해 멤브레인에서 Septin 어셈블리의 재구성

여기에서는 단일 분자 전반사 형광(smTIRF) 현미경을 사용하여 인공 군집 지질 막에서 단일 분자의 결합, 이동성 및 조립을 수행하고 분석하는 프로토콜이 제시됩니다.

단일 분자 확산 및 폴리머가 밀집된 지질 막에서의 조립

이 프로토콜은 TIRF 현미경을 사용하여 개별 이온 채널을 추적하고 지지된 지질막에서 그 활성을 결정하여 측면 막 이동과 채널 기능 간의 상호 작용을 정의하는 방법을 설명합니다. 멤브레인을 준비하고, 데이터를 기록하고, 결과를 분석하는 방법을 설명합니다.

TIRF(Total Internal Reflection Fluorescence) 현미경을 사용한 지질 이중층의 측면 이동성 및 이온 채널 활성에 대한 단일 분자 이미징

학습하세요 형광현미경을 이용한 지질 이중층 내 단일 단백질 추적 방법을. 생체모방막에서 막단백질 동역학을 연구하여 수송체 조절 메커니즘을 규명할 수 있습니다.

형광현미경을 이용한 지질 이중층 내 단일 단백질 추적

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