Summary
Het huidige protocol beschrijft de implantatie en evaluatie van melanoom in het muriene vaatvlies met behulp van optische coherentietomografie.
Abstract
Het opzetten van experimentele choroïdale melanoommodellen is een uitdaging in termen van het vermogen om tumoren op de juiste lokalisatie te induceren. Bovendien beperken moeilijkheden bij het observeren van posterieure choroïdale melanoom in vivo de tumorlocatie en groei-evaluatie in realtime. De hier beschreven aanpak optimaliseert technieken voor het vaststellen van choroïdaal melanoom bij muizen via een meerstaps subchoroïdale B16LS9-celinjectieprocedure. Om precisie mogelijk te maken bij het injecteren in de kleine afmetingen van de muis uvea, wordt de volledige procedure uitgevoerd onder een microscoop. Eerst wordt een conjunctivale peritomie gevormd in het dorsale-temporale gebied van het oog. Vervolgens wordt een kanaal in de subchoroïdale ruimte gecreëerd door een naald door de blootgestelde sclera te steken. Dit wordt gevolgd door het inbrengen van een stompe naald in het kanaal en de injectie van melanoomcellen in het vaatvlies. Onmiddellijk na injectie wordt niet-invasieve optische coherentietomografie (OCT) beeldvorming gebruikt om de locatie en voortgang van de tumor te bepalen. Retinale loslating wordt geëvalueerd als een voorspeller van tumorplaats en -grootte. De gepresenteerde methode maakt de reproduceerbare inductie van vaatvlies-gelokaliseerd melanoom bij muizen en de live beeldvorming van tumorgroei-evaluatie mogelijk. Als zodanig biedt het een waardevol hulpmiddel voor het bestuderen van intraoculaire tumoren.
Introduction
Uveaal melanoom (UM) is de meest voorkomende intraoculaire primaire maligniteit bij volwassenen. Ongeveer 90% van de oculaire melanomen is afkomstig van melanocyten in het vaatvliesgebied van het uveale kanaal1. UM is een belangrijke oorzaak van morbiditeit en mortaliteit, omdat naar schatting bijna 50% van de patiënten gemetastaseerde ziekte ontwikkelt, waarbij de lever de belangrijkste plaats van metastase is2. Vroege behandeling van primaire laesies kan de kans op metastasen verminderen, maar geen enkele effectieve behandeling voorkomt de vorming van metastasen3.
De standaardbehandeling van uveaal melanoom omvat bestralingstherapie, die gepaard gaat met verlies van gezichtsvermogen als gevolg van optische neuropathie, retinopathie, droge ogen syndroom en cataract. Chirurgische resectie wordt meestal uitgesteld totdat de groei van de laesie wordt herkend en gekarakteriseerd. Een dergelijke vertraging kan echter de ontwikkeling van gemetastaseerde ziekten mogelijkmaken 4. In sommige gevallen is nutteloze enucleatie vereist. Natuurlijk brengt deze radicale procedure het gezichtsvermogen in gevaar en resulteert het in dramatische esthetische achteruitgang.
Er zijn veel inspanningen geleverd aan het ontwikkelen van experimentele modellen om uveaal melanoom te bestuderen. Preklinische diermodellen die een nauwkeurige beoordeling van deze maligniteit mogelijk maken, zijn essentieel voor het onderzoeken van nieuwe diagnostische en therapeutische strategieën voor uveaal melanoom. Experimentele diermodellen van oculair melanoom zijn voornamelijk gebaseerd op de inenting van tumorcellen bij muizen, ratten en konijnen 5,6. Muismodellen zijn kosteneffectief en worden veel gebruikt voor melanoomstudies vanwege hun snelle reproductiesnelheid en hoge genoomgelijkenis met mensen. De murine cutane melanoom cellijn B16 wordt vaak gebruikt om C57BL6-muizen te enten en syngenetische tumoren te induceren. Bij gebruik van dit model om uveaal melanoom te induceren, moeten tumordragende ogen meestal 7-14 dagen na inenting worden geënucleeerd. Verder is B16 een zeer invasief model. De immuunbevoorrechte aard van het oog ondersteunt metastase en metastasen kunnen meestal 3-4 weken na inenting van tumorcellen worden gedetecteerd. Subculturen van de oorspronkelijke B16-lijn vertonen verschillende metastatische eigenschappen6. De Queens melanoomlijn heeft bijvoorbeeld een hoge metastatische snelheidvan 7,8. De B16LS9-cellijn heeft dendritische celmorfologie en is afgeleid van levermetastasen van C57BL / 6-muizen geïnjecteerd met de ouderlijke cutane melanoomlijn B16F19. Wanneer ze in het achterste compartiment van het oog worden geïnjecteerd, bleken deze cellen intraoculaire tumoren te vormen, die histologisch lijken op menselijk uveaal melanoom en leverspecifieke metastasen vormen in C57BL / 6, maar niet Balb / C, muizen10,11,12. Genetisch worden de cellen gekenmerkt door een hogere expressie van het c-met proto-oncogen, dat fungeert als een cellulaire receptor voor hepatocytengroeifactor13. B16F10, de10e passage van de ouderlijke B16, daarentegen metastaseert voornamelijk naar de longen wanneer intraoculair14. Zowel B16F10 als B16LS9 zijn gepigmenteerd12.
Verschillende belangrijke uitdagingen beperken het succes van murine uveale melanoommodellen. Ten eerste kan tumorcelreflux leiden tot extraoculair of subconjunctivaal melanoom. Ten tweede is de tumorgroei na intraoculaire inenting van melanoomcellen vaak zeer variabel, wat problemen oplevert bij het evalueren van de behandeling en voortgang. Een andere grote moeilijkheid is het beperkte vermogen om tumorgroei in vivo te volgen. Hoewel bioluminescente beeldvorming, zoals van luciferase tot expressie brengende tumoren, vaak wordt gebruikt om de groei van oculaire tumorente controleren 15,16, kan het geen informatie geven over de intraoculaire locatie van de tumor. Daarom wordt de evaluatie van de tumor meestal uitgevoerd na enucleatie van het oog10,17. Dit beperkt het vermogen om tumorprogressie en respons op behandelingen uitgebreid te karakteriseren aanzienlijk. Een andere belangrijke hindernis bij het bestuderen van uveaal melanoom is de moeilijkheid om laesies bij gepigmenteerde muizen te volgen. Nieuwe benaderingen, die deze moeilijkheden overwinnen, zijn nodig om het onderzoek naar uveaal melanoom in diermodellen te bevorderen.
Optische coherentietomografie (OCT) biedt onderscheidende mogelijkheden om diep in de verschillende delen van het oog in hoge resolutie te beelden, wat ongeëvenaard is door andere methoden, waaronder echografie18,19. OCT-beeldvorming is gebruikt in diermodellen om verschillende oogziekten te bestuderen20. Onlangs werd OCT-beeldvorming aangetoond als niet-invasief middel om intraoculaire tumorgroei te evalueren21. Het hier beschreven protocol toont de implantatie van melanoomcellen in het muriene vaatvlies en het gebruik van OCT om intraoculaire tumorlokalisatie en -grootte te voorspellen op het moment van celinenting.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
De experimenten in het protocol zijn goedgekeurd door de Israëlische Nationale Raad voor Dierproeven en voldoen aan de ARVO-verklaring voor het gebruik van dieren in oogheelkundig en visieonderzoek. Vrouwelijke C57BL/6-muizen, in de leeftijd van 8-10 weken, werden gebruikt voor deze studie en werden blootgesteld aan 12/12 uur licht-donkercycli. De dieren werden verkregen uit een commerciële bron (zie tabel met materialen).
1. Celkweek
- Kweek B16LS9-cellen in RPMI 1640-medium, aangevuld met 10% foetaal runderserum, 2 mM L-glutamine, 1 mM natriumpyruvaat, 25 mM HEPES, 1% essentieel vitaminemengsel, 200 U / ml penicilline en 200 mg / ml streptomycine (zie materiaaltabel), in een bevochtigde 37 °C-incubator met 5% CO2.
- Oogst de cellen voor injectie bij 70% -80% samenvloeiing.
2. Voorbereiding van dieren
- Bereid een verdovingsmengsel van ketamine (75 mg/kg lichaamsgewicht) en medetomidine (0,5 mg/kg lichaamsgewicht). Verdoof de muizen door het verdovingsmengsel intraperitoneaal in een enkele injectie te injecteren.
- Breng topische oftalmische verdoving oxybuprocaïne (0,4%) aan op beide ogen.
- Verwijd de muispupillen door topisch tropicamide toe te passen (0,5%).
3. Het creëren van een conjunctivale peritomie en sclerale tractus in de sub-choroïdale ruimte
- Breng 1,4% hydroxyethylcellulose (zie materiaaltabel) aan als smeermiddel voor beide ogen om uitdroging te voorkomen. Breng 0,5% tropicamide aan op het rechteroog.
- Observeer het geopereerde oog van de muis onder een operatiemicroscoop (zie Materiaaltabel). Houd de oogleden open met een steriele intraoculaire tang.
- Houd met behulp van een intraoculaire tang het supero-temporale limbale bindvlies vast en trek naar een infra-nasale positie22. Beveilig deze positie door deze gedurende de hele procedure vast te houden (figuur 1A).
- Maak met behulp van een naaldpunt van 30 G een kleine (1-2 mm) conjunctivale peritomie in het dorsale-temporale gebied, ongeveer 1-2 mm achter de limbus.
OPMERKING: Het gebruik van fijnere naalden kan overmatige punctie voorkomen en een betere precisie van de tumorlocatie mogelijk maken. - Verwijder overtollige Tenon's capsule uit de opening van de peritomie.
OPMERKING: Tenon's capsule is een laag dicht bindweefsel dat de bol van het oogomringt 22. - Steek op deze locatie de naaldpunt in om door de sclera te dringen. Maak een excisie om een kanaal in de subchoroïdale ruimte te creëren totdat de bruine kleur van het vaatvlies verschijnt door de blootgestelde witte stof van de sclera (figuur 1B).
Figuur 1: Inenting van tumorcellen . (A) Het superotemporale limbale bindvlies wordt vastgehouden met behulp van een intraoculaire tang en naar een infra-nasale positie getrokken. (B) De punt van een naald van 30 G wordt ingebracht om door de sclera te dringen en excisie wordt gemaakt om een spoor in de subchoroïdale ruimte te creëren. (C) Een spuit gevuld met cellen en gemonteerd met een naald van 32 G wordt in de rups ingebracht en de cellen worden geïnjecteerd. Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.
4. Inenting van melanoomcellen
- Resuspendeer 70.000 B16LS9-cellen in 2 μL PBS. Dit bedrag wordt geschat per oog.
- Laad de cellen in een steriele glazen Hamilton-spuit van 10 μL (zie materiaaltabel) gemonteerd met een stompe naald van 32 G die in een hoek van 45° is gedraaid.
- Steek de geladen naald van de spuit ongeveer 2 mm in de baan die in stap 3 is gemaakt.
- Injecteer 2 μL celsuspensie.
- Houd de naald na injectie 2-3 s op zijn plaats totdat alle vloeistof is verdwenen.
- Verwijder de naald door deze voorzichtig en langzaam uit te trekken om lekkage uit de baan te voorkomen (figuur 1C).
OPMERKINGEN: Het aanpassen van de snelheid en kracht van injectie kan het patroon van tumorontwikkeling beïnvloeden. Er wordt voorgesteld dat deze parameters worden gekalibreerd door individuen die experimenteren om de juiste kracht en snelheid te identificeren. In voorlopige experimenten werden in totaal 70.000 cellen bepaald. Aangezien er echter variaties kunnen zijn in celkweektypen of batches of tussen muizenstammen, is kalibratie van dit aantal noodzakelijk.
5. Beoordeling van de locatie van de injectie
- Observeer het geïnjecteerde oog door OCT-scans onmiddellijk na melanoomcelinenting om het uiterlijk van netvliesloslating (RD), retinale schade en / of cellen bij het glasvocht23 te identificeren.
OPMERKINGEN: Breng tropicamide, oxybuprocaïne en ethylcellulose indien nodig opnieuw aan. - Classificeer op basis van de OCT-scans uit stap 5.1 de RD-patronen21 volgens: (1) lokale RD-one site van RD; (2) lekkage in het glasachtig observerend celmateriaal in het glasvocht; (3) uitgebreid RD-meerdere locaties van RD.
- Voorspel de tumorlokalisatie op basis van: (1) lokale RD-verwachte choroïdale tumoren; (2) lekkage in de glasvocht-verwachte tumoren in het glasvocht; (3) uitgebreide RD-verwachte variabele en gedispergeerde tumoren (figuur 2).
OPMERKING: Alleen muizen met lokale RD (ongeveer 50%) zullen naar verwachting tumoren ontwikkelen die beperkt zijn tot het vaatvlies.
6. Tumorgrootte voorspellen op basis van RD-hoogte
- Meet de hoogte van lokaal RD in de OCT-scans met behulp van een OCT-segmentatie-/analysesoftware (zie materiaaltabel) en classificeer volgens de volgende groepen: klein = <300 μm; gemiddeld = 300-400 μm; groot = >400 μm.
- Beoordeel het volume dat de tumoren naar verwachting binnen 5 dagen na injectie zullen bereiken volgens de volgende criteria:
Een kleine RD-hoogte wordt meestal waargenomen bij kleine tumoren (tumorvolume variërend van 0,0059 mm 3 tot 0,07 mm 3 met een gemiddeld volume van 0,027 ± 0,005 mm3).
Een gemiddelde RD-hoogte wordt gevonden in zowel kleine als middelgrote tumoren (tumorvolume variërend van 0,015 mm 3 tot 0,15 mm 3 met een gemiddeld volume van 0,056 ± 0,016 mm3).
Een grote RD-hoogte wordt geassocieerd met een breed scala aan tumorvolumes tot 0,36 mm3.
OPMERKING: Het bereik van verwachte tumorgroottes werd verkregen uit de vorige resultaten en verdeeld in drie groepen kleine, middelgrote en grote tumoren.
7. Postoperatieve procedures
- Breng oftalmische ofloxacine 0,3% topisch aan.
- Keer de anesthesie om door atipamezoolhydrochloride (3 mg/kg) subcutaan te injecteren.
- Injecteer buprenorfine (0,05 mg/kg lichaamsgewicht) tweemaal daags gedurende 3 dagen subcutaan om de pijn en het lijden van dieren te verminderen.
- Evalueer 5 dagen na injectie van melanoomcellen de tumorgrootte door de onderstaande stappen te volgen.
- Verdoof de muizen zoals beschreven in stap 2.1. Breng tropicamide aan (0,5%).
- Onderzoek de ogen door longitudinale en sagittale OCT-scans en gebruik OCT-segmentatie / analysesoftware om tumorvolume en lokalisatie te meten.
- Bereken het tumorvolume met behulp van de formule24: V = a*b*c*6/π (a, b en c = respectievelijk lengte, breedte en hoogte).
- Onderzoek de tumorgrootte elke 2-3 dagen zoals beschreven in stap 7.4.1-7.4.3.
OPMERKING: De procedure moet worden geoptimaliseerd als u verschillende muisstammen of cellijnen gebruikt.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Ogen werden via OCT onderzocht onmiddellijk na injectie van de B16LS9-cellen. Lokale netvliesloslating werd waargenomen na injectie. De muizen vertoonden drie patronen van RD: brandpunt (figuur 2, bovenste paneel), lekkage naar het glasvocht (figuur 2, middenpaneel) en verlengd RD (figuur 2, onderste paneel). Verlengde RD wordt waarschijnlijk veroorzaakt door schade door de injectie. Er was een verband tussen het patroon van RD onmiddellijk na injectie en de lokalisatie van de tumoren 5-7 dagen na injectie. Zoals aangetoond in figuur 2, was focale RD geassocieerd met tumorcelgroei die beperkt was tot het vaatvlies. Observatie van cellen in het glasvocht na injectie bij dieren met focale RD wees echter op tumorgroei in de vitreale holte naast het vaatvlies. Ten slotte, wanneer uitgebreide RD, of RD op meerdere plaatsen, werd waargenomen na injectie, werden tumoren verspreid over het vaatvlies en glasachtig na 5 dagen. Eerdere studies toonden aan dat de karakterisering van tumoren door OCT volledig correleerde met het histologisch onderzoek21.
Figuur 2: OCT-gebaseerde voorspelling van tumorgroei na sub-choroïdale celinjectie. In totaal werden 7 × 104 B16LS9-cellen in 2 μL PBS geïnjecteerd in de subchoroïde ruimte van de muisogen. De injectieplaats werd gevisualiseerd door OCT en fundus beeldvorming onmiddellijk na celinjectie (links). Onderbroken lijnen geven de detectie aan van focale RD (boven), celmateriaal aan het glasvocht (midden) en verlengd RD (onder). Aan de rechterkant geven stippellijnen de tumormassa 5 dagen na injectie aan. Deze figuur is overgenomen uit Zaks et al.21. Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.
Het bereik van tumorgroottes geïnduceerd in dit model kan worden onderverdeeld in klein, middelgroot en groot (figuur 3). De hoogte van het RD na injectie was geassocieerd met de tumorgrootte 5 dagen na injectie, zoals gemeten door de horizontale en verticale OCT-scans (figuur 4). De RD-hoogten geassocieerd met de tumorgroottes zijn weergegeven in tabel 1.
Figuur 3: Tumorgrootte bepalen. Tumorgroei werd geëvalueerd door OCT-scans (links) en real-time camerabeeld van de fundus (rechts) 5-7 dagen na inenting. Getoond worden representatieve beelden van kleine, middelgrote en grote tumoren. Deze figuur is overgenomen uit Zaks et al.21. Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.
Figuur 4: Classificatie van tumorgrootte op basis van OCT live imaging. Tumoren werden geïnduceerd door sub-choroïdale injectie van 7 × 104 B16LS9-cellen. De tumorgroei werd onmiddellijk en 5 dagen na injectie geëvalueerd in levende OCT-beeldvorming. (A) Een representatieve OCT-meting van RD-hoogte na injectie (dag 0, links, gele lijn geeft hoogte aan), tumorhoogte en -breedte in een horizontale OCT-scan (dag 5, middelste, gele lijnen geven hoogte en breedte aan) en een H&E-gekleurde oogsectie (rechts). Inzet: fundusafbeelding van het RD-gebied. (B) Het bereik van geïnduceerde tumorgroottes werd verdeeld in drie groepen. Tumorvolumemetingen van muizen die klein (S, n = 15), medium (M, n = 9) of groot (L, n = 7) RD onmiddellijk na celinjectie presenteerden, worden weergegeven. *p < 0,05. Deze figuur is overgenomen uit Zaks et al.21. Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.
| RD hoogte | Tumorvolume |
| <300 μm (klein) | 0,0059 mm 3 tot 0,07 mm 3 (gemiddeld 0,027 ± 0,005 mm3) |
| 300-400 μm (gemiddeld) | 0,015 mm 3 tot 0,15 mm 3 (gemiddeld 0,056 ± 0,016 mm3) |
| > 400 μm (groot) | 0,05 mm 3 tot 0,36 mm 3 (gemiddeld 0,017 ± 0,06 mm3) |
Tabel 1: De bijbehorende RD-hoogtes met de tumorgrootte.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Uveaal melanoom is een verwoestende ziekte waarvoor nieuwe therapeutische benaderingen hard nodig zijn. Onderzoek naar uveaal melanoom en mogelijke behandelingen wordt echter beperkt door de technische uitdagingen van uveaal melanoom diermodellen 1,25. Oculaire tumoren, die worden geïnduceerd door intraoculaire injectie van kankercellen, zijn zeer variabel in zowel lokalisatie als grootte, waarschijnlijk vanwege de kleine afmetingen van het muizenoog. Een dergelijke variabiliteit is een obstakel voor de uitgebreide evaluatie van tumorprogressie. De experimentele benadering die hierin wordt beschreven, maakt het mogelijk om intraoculaire tumorlokalisatie en voorspelde grootte onmiddellijk na subchoroïdale B16LS9 melanoomcelinjectie te beoordelen, op basis van live OCT-beeldvorming21. In de loop der jaren heeft de ontwikkeling van live beeldvormingstechnieken voordelen opgeleverd in kankeronderzoek door het mogelijk te maken tumorprogressie te volgen tijdens experimenten, niet alleen op vooraf gedefinieerde eindpunten. Dergelijke methoden omvatten bijvoorbeeld bioluminescente beeldvorming met behulp van reportercellen, waarmee de locatie van tumoren en metastasen in levende dieren kan worden gevolgd, inclusief het identificeren van oculaire tumoren16. Een andere geavanceerde methode is fotoakoestische beeldvorming, die beeldvorming met hoge resolutie van cellen mogelijk maakt en melanoomcellen onderscheidt van gezonde cellen26,27. Het duidelijke voordeel van OCT is echter het vermogen om de intraoculaire locatie van tumoren te identificeren en hun grootte bij levende dieren te evalueren.
Het hier beschreven protocol toont de intraoculaire inenting van melanoomcellen door een peritomie en een kanaal in de subchoroïdale ruimte te vormen, gevolgd door het voorzichtig inbrengen van een stompe naald in de punt van het kanaal en celinjectie. Dit elimineert overmatige punctie en stuurt de locatie van celinenting. De injectie induceert netvliesloslating, die de lokalisatie en grootte van de tumor weerspiegelt die zal worden ontwikkeld. Onze observaties suggereren dat tumoren gevormd op de positie van een lokale RD de neiging hebben om focaal te zijn, en hun grootte komt overeen met de hoogte van de RD na injectie. Daarentegen resulteren meerdere RD's, of het detecteren van cellen aan het glasvocht na injectie, meestal in gedispergeerde tumoren21.
Het is aannemelijk dat focale RD weerspiegelt dat de injectie de meeste cellen op een bepaalde locatie heeft verdicht, waardoor de vorming van een gelokaliseerde tumor mogelijk is. Aan de andere kant impliceren meerdere RD-locaties dat de injectie verschillende locaties op het netvlies bereikte, waardoor de kans groter werd dat tumorcellen op tal van plaatsen werden geïmplanteerd en verspreide tumoren vormden.
Het evalueren van de lokalisatie en voorspelde tumorgrootte vroeg na injectie is vooral belangrijk bij het beoordelen van tumorprogressies, zoals het onderzoeken van het effect van specifieke factoren of mogelijke behandelingen. Vroege bepaling kan de opname van een homogene studiegroep mogelijk maken, waardoor de reproduceerbaarheid van het model wordt verbeterd, waardoor de nauwkeurigheid van het onderzoek wordt verbeterd en waardevolle tijd en kosten worden bespaard. Verder, omdat OCT-beeldvorming van intraoculaire tumoren nauwkeurige informatie biedt over zowel de locatie als de grootte van tumoren bij levende dieren, kunnen muizen worden gevolgd voor langetermijnexperimenten, bijvoorbeeld om metastasen te evalueren. Een andere moeilijkheid in muismodellen van melanoom is dat muispigmentatie, zoals bij C57BL / 6-muizen, vaak de analyse van gepigmenteerde tumoren beperkt. Daarom is een ander voordeel van OCT-beeldvorming dat het onafhankelijk is van pigmentatie en kan worden toegepast op gepigmenteerde muizen of laesies.
Opgemerkt moet worden dat verschillende parameters, zoals de muizenstam, cellijn of injectietechniek, de tumorinitiatie en -groei kunnen beïnvloeden. Daarom wordt optimalisatie van het model voor specifieke stammen of cellen geadviseerd. Er moet ook rekening mee worden gehouden dat secundaire cataracten zich in de loop van de tijdkunnen ontwikkelen 1, waardoor het vermogen om OCT te gebruiken wordt beperkt. Hoewel het onwaarschijnlijk is dat dit zal gebeuren in het korte tijdsbestek dat hierin wordt beschreven, moet men overwegen de groepsgrootte te vergroten als langere experimenten worden uitgevoerd om de uitsluiting van cataractogen mogelijk te maken.
Samenvattend maakt het beschreven protocol gebruik van een gemeenschappelijk model van B16LS9-melanoom, beoordeeld door live OCT-beeldvorming, om een reproduceerbaar model te ontwikkelen voor het evalueren van choroïdale tumoren bij levende dieren. Deze aanpak kan worden gebruikt voor toekomstige studies naar de onderliggende mechanismen van uveaal melanoom, nieuwe experimentele modellen en mogelijke nieuwe therapieën.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Marcovich A.L.: Steba Biotech (P), Yeda Weizmann (P), EyeYon Medical (C, P), Mor Isum (P). c) = adviseur; (P) = Octrooi. Alle andere auteurs hebben geen tegenstrijdige belangen.
Acknowledgments
Deze studie werd gedeeltelijk ondersteund door subsidie 1304/20 van de Israel Science Foundation (ISF), Israël, voor Arie Marcovich. We danken Shahar Ish-Shalom en Ady Yosipovich, van de afdeling Pathologie, Kaplan Medical Center, Rehovot, Israël, voor histologische analyse.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 10 μL glass syringe (Hamilton Co., Bonaduz, Switzerland) | Hamilton | 721711 | |
| 30 G needles | BD Microbalance | 2025-01 | |
| Atipamezole hydrochloride | Orion Phrma | ||
| B16LS9 cells | from Hans Grossniklaus USA | ||
| Buprenorphine | richter pharma | 102047 | |
| C57BL/6 female mice | Envigo | ||
| Essential vitamin mixture | satorius | 01-025-1A | |
| Fetal bovine serum | rhenium | 10270106 | |
| HEPES | satorius | 03-025-1B | |
| Hydroxyethylcellulose 1.4% eye drops | Fisher Pharmaceutical | 390862 | |
| InSight OCT segmentation software | Phoenix Micron, Inc | ||
| Ketamine | bremer pharma GMBH (medimarket) | 17889 | |
| L-glutamine | satorius | 03-020-1B | |
| Medetomidine | zoetis (vetmarket) | 102532 | |
| Ofloxacin 0.3% eye drops | allergan | E92170 | |
| Optical coherence tomography | Phoenix Micron, Inc | ||
| Oxybuprocaine 0.4% | Fisher Pharmaceutical | 393050 | |
| Penicillin-streptomycin-amphoteracin | satorius | 03-033-1B | |
| Phosphate buffered saline (PBS) | satorius | 02-023-1a | |
| RPMI cell media | satorius | 01-104-1A | |
| Sodium pyruvate | satorius | 03-042-1B | |
| Surgical microscope | Zeiss | OPMI-6 CFC | |
| Tropicamide 0.5% | Fisher Pharmaceutical | 390723 |
References
- Jager, M. J., et al.
- Bustamante, P., Piquet, L., Landreville, S., Burnier, J. V. Uveal melanoma pathobiology: Metastasis to the liver. Seminars in Cancer Biology. 71, Academic Press. 65-85 (2021).
- Damato, B. Ocular treatment of choroidal melanoma in relation to the prevention of metastatic death-A personal view. Progress in Retinal and Eye Research. 66, 187-199 (2018).
- Jouhi, S., et al. The small fatal choroidal melanoma study. A survey by the European Ophthalmic Oncology Group. American Journal of Ophthalmology. 202, 100-108 (2019).
- Cao, J., Jager, M. J. Animal eye models for uveal melanoma. Ocular Oncology and Pathology. 1 (3), 141-150 (2015).
- Uner, O. E., Gandrakota, N., Azarcon, C. P., Grossniklaus, H. E.
- Yang, H., Dithmar, S., Grossniklaus, H. E. Interferon alpha 2b decreases hepatic micrometastasis in a murine model of ocular melanoma by activation of intrinsic hepatic natural killer cells. Investigative Ophthalmology & Visual Science. 45 (7), 2056-2064 (2004).
- Yang, H., Grossniklaus, H. E. Combined immunologic and anti-angiogenic therapy reduces hepatic micrometastases in a murine ocular melanoma model. Current Eye Research. 31 (6), 557-562 (2006).
- Rusciano, D., Lorenzoni, P., Burger, M. M.
- Diaz, C. E., Rusciano, D., Dithmar, S., Grossniklaus, H. E. B16LS9 melanoma cells spread to the liver from the murine ocular posterior compartment (PC). Current Eye Research. 18 (2), 125-129 (1999).
- Rusciano, D., Lorenzoni, P., Burger, M. M.
- Ashur-Fabian, O., et al. Tetrac delayed the onset of ocular melanoma in an orthotopic mouse model. Frontiers in Endocrinology. 12, 632335 (2019).
- Elia, G., et al. Mechanisms regulating c-met overexpression in liver-metastatic B16-LS9 melanoma cells. Journal of Cellular Biochemistry. 81 (3), 477-487 (2001).
- Harning, R., Szalay, Z. Ocular metastasis of in vivo and in vitro derived syngeneic murine melanoma. Investigative Ophthalmology & Visual Science. 28 (9), 1599-1604 (1987).
- Ezra-Elia, R., et al. Can an in vivo imaging system be used to determine localization and biodistribution of AAV5-mediated gene expression following subretinal and intravitreal delivery in mice. Experimental Eye Research. 176, 227-234 (2018).
- Notting, I. C., et al. Whole-body bioluminescent imaging of human uveal melanoma in a new mouse model of local tumor growth and metastasis. Investigative Ophthalmology & Visual Science. 46 (5), 1581-1587 (2005).
- Yang, H., et al. In-vivo xenograft murine human uveal melanoma model develops hepatic micrometastases. Melanoma Research. 18 (2), 95-103 (2008).
- Murthy, R. K., Haji, S., Sambhav, K., Grover, S., Chalam, K. V. Clinical applications of spectral domain optical coherence tomography in retinal diseases. Biomedical Journal. 39 (2), 107-120 (2016).
- Drexler, W., et al. Ultrahigh-resolution ophthalmic optical coherence tomography. Nature Medicine. 7 (4), 502-507 (2001).
- Ochakovski, G. A., Fischer, M. D. Phenotyping of mouse models with OCT. Methods in Molecular Biology. 1834, 285-291 (2019).
- Zaks, O., et al. In-vivo imaging for assessing tumor growth in mouse models of ocular melanoma. Experimental Eye Research. 204, 108431 (2021).
- Brar, V. S. American Academy of Ophthalmology 2022-2023 BCSC. 2. Fundamentals and principles of ophthalmology. , (2022).
- Duker, J. S., Waheed, N. K., Goldman, D. Handbook of Retinal OCT: Optical Coherence Tomography, 2nd Edition. , Elsevier Health Sciences. (2021).
- Tomayko, M. M., Reynolds, C. P. Determination of subcutaneous tumor size in athymic (nude) mice. Cancer Chemotherapy and Pharmacology. 24 (3), 148-154 (1989).
- Richards, J. R., Yoo, J. H., Shin, D., Odelberg, S. J. Mouse models of uveal melanoma: Strengths, weaknesses, and future directions. Pigment Cell & Melanoma Research. 33 (2), 264 (2020).
- Chen, R., et al. Photoacoustic molecular imaging-escorted adipose photodynamic-browning synergy for fighting obesity with virus-like complexes. Nature Nanotechnology. 16 (4), 455-465 (2021).
- Yu, Q., et al. Label-free visualization of early cancer hepatic micrometastasis and intraoperative image-guided surgery by photoacoustic imaging. Journal of Nuclear Medicine. 61 (7), 1079-1085 (2020).
