Name: Um sistema experimental para estudar Mecanotransdução em células do pulmão fetal (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-02-16T13:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 35 s
Description: Aprenda a isolar células epiteliais tipo II e fibroblastos de pulmão fetal de roedores para estudar mecanotransdução. Este método in vitro aplica estímulo mecânico e analisa diferenciação celular por PCR em tempo real, western blot e imunoquímica.

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Apoiado pelo NIH concessão HD052670.

1. Revestimento de placas com ECM proteínas <ol><li> Sob condições estéreis, misturar 120 ug de laminina com 12 ml de frio estéril 1X PBS por placa. </li><li> Tome Bioflex placas não tratadas e adicionar 2 ml da solução a cada poço (concentração final de laminina é 2 ug / cm 2). Alternativamente, outras proteínas de ECM podem ser utilizados, tais como colagénio-1 [10 ug / cm 2], fibronectina [5 ug / cm 2], vitronectina [0,5 ug / cm 2] ou elastina [10 ug / cm 2]. A técnica de revestimento é semelhante ao que é descrito para a laminina-revestimento. Assegure-se os poços são completamente cobertas pela solução. </li><li> Enrole as placas de plástico e colocado a 4 ° C sobre uma superfície plana durante a noite para permitir que o laminina para adsorver para o fundo dos poços. Nestas condições, as placas podem ser armazenadas durante pelo menos uma semana, mantendo a função de ECM boa. </li><li> No dia seguinte, sob condições estéreis, lavar os poços 3 vezes com PBS 1X. </li><li&gt; Adicionar 1 ml de BSA a 1% em PBS 1X a cada poço e incubar a 37 ° C durante 1 h para bloquear não-locais de ligação específicos nas membranas. </li><li> Lavam-se as placas 3 vezes com PBS 1X para remover as proteínas unadsorbed. </li><li> Manter as placas a 37 ° C em DMEM até que as células são isoladas a partir do passo 2,14. </li></ol> 2. Isolamento de células fetais de roedores pulmão do tipo II epiteliais Um dia antes de isolamento têm os copos de tela com malhas de diferentes tamanhos de nylon autoclavado e pronto. <ol><li> Obter pulmões fetais de timed-grávida mouse / rato em E17-19 da gestação. Transferir o tecido para um tubo de 50 ml cónico contendo meio DMEM e colocá-lo em gelo. </li><li> Fazer tampão de digestão num tubo cónico de 50 ml: (10 ml). Para este volume, o tecido de pulmão a partir de cerca de 20 fetos de rato / rato é usado. 8,5 ml de DMEM 0,5 ml 500mM pH 7.4 HEPES 5 mg de colagenase 1 5 mg de colagenase 1A 1 ml de galinha soro, inactivado pelo calor </li><li>Misturar bem até que todos os componentes são dissolvidos e filtrar através de um filtro de seringa de 0,2 micron dentro do capuz estéril. Colocar o tubo cónico contendo o tampão de digestão num banho de água a 37 ° C. </li><li> Remover o meio DMEM a partir do tubo cónico a partir do passo 2.1 e transferir o tecido em uma placa de Petri estéril. </li><li> Picar os pulmões bem com uma tesoura estéreis ou lâmina de barbear para fazer peças de tecido inferior a 1 mm e transferir o tecido para dentro do tubo cónico contendo o tampão de digestão de pré-aquecida a partir do passo 2.3. </li><li> Digerir o tecido pipetando cima e para baixo: 100 vezes com 10 ml de pipeta 100 vezes com 5 ml de pipeta 100 vezes com uma pipeta de Pasteur </li><li> Centrifugar o homogeneizado a 1300 rpm durante 5 minutos à temperatura ambiente. </li><li> Cuidadosamente remover o sobrenadante por aspiração e re-suspender o sedimento contendo as células em 15 ml de DMEM mais 20% de FBS. </li><li> Retire os copos de tela com 100 -, 30 - e malhas de 15 mícron de náilon e po lugarem em estéreis de 150 ml copos. </li><li> Adicionar homogenato celular a partir do passo 2,8 e sequencialmente filtrar através de 100 -, 30 -, e 15 micras copos tela de malha. </li><li> Collect agregada não filtrados células a partir da 30 - e 15 micron-malhas após várias lavagens com DMEM mais 10% FBS para facilitar a filtração de células não-epiteliais. </li><li> Descartar o filtrado a partir da malha 15 micron, que contém principalmente fibroblastos. </li><li> Purifica-se células do tipo II adicionais por incubação de células a partir do passo 2,11 em 75-cm 2 frascos para 30 min (approximatelly10 ml de suspensão de células por frasco). </li><li> Recolher o sobrenadante e centrifugar a 1300 rpm durante 5 minutos à temperatura ambiente para sedimentar as células. </li><li> Cuidadosamente remover o sobrenadante por aspiração e re-suspender o sedimento contendo as células em DMEM isento de soro. O volume de ressuspensão depende da quantidade de tecido processado. Aproximadamente, nós chapa do equivalente de células obtido a partir de um feto em cada poço (2 ml), a fim de achieve entre 60-70% de confluência no dia seguinte. </li><li> Suspensão placa da célula em Bioflex seis poços pré-revestidos com laminina ou fibronectina. </li></ol> 3. Isolamento de fibroblastos de pulmão de feto de roedores <ol><li> Siga os mesmos passos descritos acima para o tipo de isolamento das células II até 2,11. </li><li> Tome-se o filtrado a partir da malha 15-micron (sem lavagem anterior; volume aproximado é de 10-15 ml) e da placa em 75 cm de 2 a 37 ° C durante 30-60 min para permitir que os fibroblastos de aderir. </li><li> Aspirar o supernantant e substituir com DMEM isento de soro e incubar durante a noite. </li><li> No dia seguinte, a colheita das células com 0,25% (peso / vol) de tripsina em 0,4 mM de EDTA e da placa-as em placas Bioflex pré-revestidas com fibronectina. </li></ol> 4. Sistema experimental para proporcionar a estimulação mecânica para as células do pulmão <ol><li> De sementes as células (cerca de 50% confluentes) em placas de cultura de Bioflex em DMEM isento de soro (2 ml / poço) e deixá-los anexar e SPREanúncio por pelo menos 6h antes dos experimentos. Em geral nosso laboratório mantém células em cultura por cerca de 24 horas antes de aplicar tensão mecânica. Se um número específico de células são necessárias para as experiências, após isolamento, as células do tipo II são mantidas em DMEM isento de soro de 75-cm 2 frascos e no dia seguinte, as células são tripsinizadas, contadas e então semeadas. </li><li> No dia seguinte, os meios são substituídos com fresco DMEM isento de soro (2 ml / poço) e as placas Bioflex são montados numa Unidade Strain Flexcell FX-5000. Monocamadas não deve ser maior do que 80% confluente antes do início das experiências. </li><li> Estirpe Equibiaxial é aplicada às membranas. O regime de tensão varia dependendo de simulação de forças mecânicas in vivo (ver discussão). </li><li> Células cultivadas em não-esticado membranas cultivadas em paralelo são utilizados como controlos. </li><li> No final dos ensaios, as monocamadas pode ser processada para analisar as mudanças na expressão de genes (por exemplo C de proteína surfactante)por abundância de proteínas em tempo real-PCR, por Western blot, etc Além disso, as monocamadas pode ser fixado para experiências imunocitoquímica. Para esta técnica, após a fixação, as membranas de silastic são cortados a partir das placas e montadas em lâminas de vidro usando 10-20 ul de água como agente de montagem antes permeabilização e incubação com anticorpos. Sobrenadante pode também ser usado para investigar a presença de factores de crescimento, citocinas, etc </li></ol> 5. Os resultados representativos A Figura 1 ea Figura 2 mostram representativos contraste de fase fotografias de E18 fetais de rato células de tipo II isolado utilizando a técnica descrita no presente manuscrito. A Figura 3 demonstra que a esforços mecânicos induz a diferenciação de células de tipo II fetais epiteliais utilizando surfactante proteína C, como um marcador. <img src="/files/ftp_upload/3543/3543fig1.jpg" /> Figura 1. Repfotografia de contraste de fase representativa tirada logo após o isolamento mostrando a aparência agregado de células fetais do tipo II. <img src="/files/ftp_upload/3543/3543fig2.jpg" /> Figura 2. E18 células de tipo II fetais epiteliais foram isolados como descrito aqui e plaqueadas em placas de Bioflex revestidas com laminina. Fotografia foi tirada no dia seguinte após não esticados as células foram fixadas em paraformaldeído. A pureza das células foi determinada ser de 90 ± 5% por análise microscópica da morfologia das células epiteliais e imunocoloração para SP-C. <img src="/files/ftp_upload/3543/3543fig3.jpg" /> Figura 3. Células de tipo II Fetal epiteliais foram expostas a estirpe cíclico de 5% a 40 ciclos / min durante 16 h. Um blot) Northern de surfactante de proteína C (SP-C) a expressão do mRNA que mostra que a estirpe tipo induz a diferenciação das células II utilizando diferentes substratos ECM . Sinais + / - representam a exposição ou não streinar, respectivamente. Os dados são apresentados como média + / - SEM, n = 3; * P &lt;0,05 B) imagens de fluorescência imunocitoquímica demonstrando níveis de proteína SP-C (verde) em células de tipo II fetais expostos ou não (controle) a uma tensão mecânica.. Os núcleos foram contrastadas com DAPI (azul). Bar, 10 uM. C) Os resultados de Western blot de três experiências que mostram que estiramento mecânico aumenta SP-C da proteína. N = 3; * P &lt;0,05.

<ol><li>Sanchez-Esteban, J., Tsai, S. W., Sang, J., Qin, J., Torday, J. S., Rubin, L. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+mechanical+forces+on+lung-specific+gene+expression%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Med.+Sci%22%5BJournal%5D)">Effects of mechanical forces on lung-specific gene expression.</a> Am. J. Med. Sci. 316, 200-204 (1998).</li>
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<li>Lee, H. S., Wang, Y., Maciejewski, B. S., Esho, K., Fulton, C., Sharma, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interleukin-10+protects+cultured+fetal+rat+type+II+epithelial+cells+from+injury+induced+by+mechanical+stretch%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Lung.+Cell.+Mol.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Interleukin-10 protects cultured fetal rat type II epithelial cells from injury induced by mechanical stretch.</a> Am. J. Physiol. Lung. Cell. Mol. Physiol. 294, L225-L232 (2008).</li>
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<li>Kitterman, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effects+of+mechanical+forces+on+fetal+lung+growth%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+Perinatol%22%5BJournal%5D)">The effects of mechanical forces on fetal lung growth.</a> Clin. Perinatol. 23, 727-740 (1996).</li>
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<li>Harding, R., Liggins, G. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Changes+in+thoracic+dimensions+induced+by+breathing+movements+in+fetal+sheep%5BTitle%5D)+AND+%22Reprod.+Fertil.+Dev%22%5BJournal%5D)">Changes in thoracic dimensions induced by breathing movements in fetal sheep.</a> Reprod. Fertil. Dev. 8, 117-124 (1996).</li>
</ol>

Não há conflitos de interesse declarados.

Neste artigo, nós descrevemos um método para isolar as células fetais do tipo II epiteliais e fibroblastos e expô-los a estimulação mecânica usando o aparelho Strain Flexcell. Usámos esta técnica para avaliar a diferenciação de células epiteliais 1,2 e para estudar receptor e vias de sinalização activados por estiramento 3-9. Além disso, este método também pode ser usado para investigar as respostas das células induzidas por lesão mecânica 10,11. O procedimento baseia-se a digestão do te...

<table><tbody><tr><td>DMEM</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D5648</td><td></td></tr><tr><td>HEPES</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H3375</td><td></td></tr><tr><td>Colagenase 1</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C0130</td><td></td></tr><tr><td>Colagenase 1A</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C9891</td><td></td></tr><tr><td>Soro de galinha</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C5405</td><td></td></tr><tr><td>Copos de peneira</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>CD1-1KT</td><td></td></tr><tr><td>Filtros de seringa</td><td>Fisher Scientific</td><td>09-754-25</td><td></td></tr><tr><td>Malha de náilon de 100 mícrons</td><td>Small Parts, Inc.</td><td>CMN-100-D</td><td></td></tr><tr><td>Malha de 30 mícrons</td><td>Small Parts, Inc.</td><td>CMN-30-D</td><td></td></tr><tr><td>Malha de 15 mícrons</td><td>Dynamic Aqua-Supply Ltd.</td><td>NTX15</td><td></td></tr><tr><td>Laminina</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>L2020</td><td></td></tr><tr><td>Colágeno-1</td><td>Collagen Biomed</td><td>PC0701</td><td></td></tr><tr><td>Fibronectina</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>F1141</td><td></td></tr><tr><td>Vitronectina</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>V-0132</td><td></td></tr><tr><td>Elastina</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>E-6402</td><td></td></tr><tr><td>Placa Bioflex</td><td>Flexcell International</td><td>BF-3001U</td><td>Não revestida</td></tr><tr><td>Unidade de Tensão Flexcell</td><td>Flexcell International</td><td>FX-5000</td><td></td></tr></tbody></table>

um sistema experimental para estudar mecanotransdução em células do pulmão fetal

An Experimental System to Study Mechanotransduction in Fetal Lung Cells

Forças mecânicas geradas in utero pelos repetitivos movimentos como de respiração e pela distensão líquido são essenciais para o desenvolvimento do pulmão normal. Um componente-chave do desenvolvimento do pulmão é a diferenciação de células alveolares do tipo II epiteliais, a principal fonte de surfactante pulmonar. Estas células também participar na homeostase de fluido no lúmen alveolar, de defesa do hospedeiro, e reparação de lesão. Além disso, as células do pulmão distais do parênquima pode ser directamente exposta ao estiramento exagerada durante a ventilação mecânica após o nascimento. No entanto, os mecanismos precisos moleculares e celulares, através da qual as células do pulmão detectam estímulos mecânicos para influenciar o desenvolvimento do pulmão e para promover a lesão pulmonar não são completamente compreendidos. Aqui, nós proporcionar um método simples e de alta pureza para isolar células de tipo II e de fibroblastos a partir de pulmões de roedores fetais. Em seguida, nós descrevemos um sistema in vitro, A Unidade de Strain Flexcell, para proporcionar a estimulação mecânica para células fetais, simulando forças mecânicas emdesenvolvimento pulmonar fetal ou lesão pulmonar. Este sistema experimental fornece uma excelente ferramenta para investigar os mecanismos moleculares e celulares em células de pulmão de feto expostos a esticar. Usando essa abordagem, nosso laboratório identificou vários receptores e proteínas sinalizadoras que participam mecanotransdução no desenvolvimento do pulmão fetal e lesão pulmonar.

Forças mecânicas desempenham um papel chave no desenvolvimento de pulmão e lesão pulmonar. Aqui, nós descrevemos um método para isolar roedores fetais de pulmão de células do tipo II epiteliais e fibroblastos e expô-los a estimulação mecânica utilizando um<em&gt; In vitro</em&gt; Sistema.

Um sistema experimental para estudar Mecanotransdução em células do pulmão fetal

As forças mecânicas geradas in utero por movimentos repetitivos semelhantes à respiração e pela distensão fluida são fundamentais para o desenvolvimento pulmonar normal. Um elemento-chave...

O objetivo deste procedimento é descrever um sistema experimental para estudar a transdução mecânica em células pulmonares fetais. Isso é realizado por meio da codificação de placas de cultura com proteínas da matriz extracelular. Em seguida, são isoladas células epiteliais tipo II do pulmão fetal de camundongo, seguido pelo isolamento de fibroblastos fetais de camundongo.O passo final descreve um sistema in vitro para fornecer estimulação mecânica a células pulmonares. Em última análise, podem ser obtidos resultados que mostram um aumento na diferenciação de células do tipo dois por meio de PCR em tempo real, western blot e imagens de imunoquímica por fluorescência. Esses métodos podem ajudar a responder perguntas fundamentais no campo da transdução mecano, como o desenvolvimento pulmonar fetal e lesão pulmonar.Demonstrando o procedimento estará Julian gu, um técnico do meu laboratório. Enquanto trabalhamos em uma cabine de fluxo laminar sob condições estéreis, preparamos 120 microgramas de laminina com 12 mililitros de PBS 1X frio e estéril por placa. Outras proteínas da matriz extracelular podem ser usadas para revestimento. Consulte o protocolo escrito para obter detalhes, em seguida, pegue uma placa BioFlex não tratada e adicione dois mililitros da solução de laminina a cada poço, obtendo uma concentração final de dois microgramas por centímetro quadrado.Certifique-se de que os poços estejam completamente cobertos pela solução. Cubra totalmente a placa com filme plástico e coloque sobre uma superfície plana em um ambiente de quatro graus Celsius durante a noite para permitir que o laminado seja absorvido ao fundo dos poços. As placas revestidas podem ser armazenadas nessas condições por pelo menos uma semana, mantendo boa função de matriz extracelular no dia seguinte.Em condições estéreis, lave as placas três vezes com um XPBS. Em seguida, adicione um mililitro de 1% BSA em um XPBS a cada poço. Incube por uma hora a 37 graus Celsius para bloquear os sítios de ligação não específicos nas membranas.Em seguida, lave novamente as cavidades três vezes com um XPBS. Para remover as proteínas não absorvidas, adicione um mililitro de DMEM a cada cavidade da placa. Em seguida, armazene a placa a 37 graus Celsius até que os pneumócitos tipo II de pulmão de roedor fetal sejam isolados e estejam prontos para semeadura.No dia anterior ao início do procedimento de isolamento celular, monte os copos com peneiras de malhas de náilon de 130 e 15 mícrons e esterilize-os por autoclavação. Autoclave também o mesmo número de bicos de vidro de 150 mililitros no dia do cultivo. Obtenha pulmões fetais de camundongo prenhe com tempo gestacional definido no dia E 17 a 19 da gestação.Transfira o tecido para um tubo de centrífuga de 50 mililitros contendo meio DMEA e coloque-o sobre gelo. Prepare um tampão de digestão fresco em um tubo de centrífuga de 50 mililitros de acordo com a receita no protocolo escrito. E, enquanto trabalha em uma cabine de fluxo laminar, esterilize por filtração através de um filtro de seringa de 0,2 mícron.10 mililitros deste tampão são suficientes para o tecido pulmonar obtido de aproximadamente 20 fetos de camundongo. Coloque o tubo cônico contendo o tampão de digestão em banho-maria a 37 graus Celsius. Asse o dium do tubo cônico contendo o tecido pulmonar fetal e transfira o tecido para uma placa de Petri estéril usando tesoura estéril ou lâmina de barbear, picando o tecido em pedaços com menos de um milímetro de tamanho.Em seguida, transfira o tecido para o tubo cônico contendo o tampão de digestão pré-aquecido. Depois, auxilie mecanicamente a digestão do tecido pipetando a suspensão de células pulmonares fetais para cima e para baixo cem vezes com pipetas de tamanho de abertura decrescente. Após a conclusão do processo de digestão, centrifugue o homogeneizado a 1.300 RPM durante cinco minutos à temperatura ambiente.Em seguida, remova cuidadosamente o sobrenadante por aspiração e ressuspenda o pellet contendo as células em 15 mililitros de DMEM acrescido de 20% de FBS. Depois, pegue os copos de peneira com malhas de náilon de 130 e 15 mícrons e coloque-os sobre os béqueres estéreis de 150 mililitros. Pipete o homogenato celular sobre a malha de 100 mícrons.Colete o filtrado e pipete-o sobre a malha de 30 mícrons. Lave a malha de 30 mícrons várias vezes com DMEM fresco mais 10% de FBS. A maioria das células do tipo dois se aglomera e não passa através da malha.Essas lavagens removem células não epiteliais que podem estar aderidas aos agregados. Aplique o filtrado da malha de 30 mícrons ao copo de tela de 15 mícrons. Novamente, lave várias vezes como antes.Esta etapa recruta as células do tipo dois que podem ter passado pela malha de 30 mícrons. Colete as células agregadas não filtradas das malhas de 30 e 15 mícrons para enriquecimento adicional de células do tipo dois. Retenha o filtrado da malha de 15 mícrons se for necessário cultivar fibroblastos pulmonares de roedores fetais.Caso contrário, descarte este filtrado. Em seguida, purifique a população de células epiteliais do tipo dois adicionando meio e incubando as células não filtradas provenientes dos copos com malhas de 30 e 15 mícrons em um frasco de cultura de tecidos de 75 centímetros quadrados durante 30 minutos; após essa incubação, centrifugue o sobrenadante como antes, despreze o sobrenadante, ressuspenda o pellet em dois mililitros de DMEM livre de soro e, em seguida, pipete um mililitro da suspensão celular em cada poço de placas BioFlex de seis poços revestidas com laminina. Neste ponto, as células aparecem em agregados quando observadas ao microscópio. Incube a placa em uma estufa de cultura de tecidos ajustada a 37 graus Celsius e 5% de dióxido de carbono. Uma incubação de 24 horas é ideal, sendo necessária uma incubação mínima de seis horas.Antes de iniciar os experimentos de tensão mecânica, colete o filtrado da malha de 15 mícrons e transfira para um frasco de cultura de tecidos de 75 centímetros quadrados a 37 graus Celsius por 30 a 60 minutos para permitir a adesão dos fibroblastos, aspire e descarte o sobrenadante. Em seguida, substitua o volume no frasco por DMEM sem soro e incube durante a noite. No dia seguinte, recolha as células com tripsina 0,25% em EDTA 0,4 milimolar e plaque-as em placas BioFlex revestidas com fibronectina, incubando em uma estufa de cultura de tecidos ajustada a 37 graus Celsius e 5% de dióxido de carbono, idealmente por 24 horas antes de iniciar os experimentos de tensão mecânica.É necessário um período mínimo de incubação de seis horas se um número específico de células for exigido para os experimentos. As células do tipo dois são mantidas em frascos de DMEM sem soro de 75 centímetros quadrados após o isolamento, e no dia seguinte as células são tripsinizadas, contadas e então semeadas. A monocamada não deve apresentar confluência superior a 80% antes do início dos experimentos. No dia do experimento de estimulação mecânica, o meio de cultura celular é substituído por dois mililitros de DMEM fresco sem soro por poço, e a placa é então montada em uma unidade de tensão Flexcell FX 5,000.Em seguida, aplique deformação biaxial EQU às membranas. O regime de deformação varia conforme a simulação das forças mecânicas in vivo. Conforme discutido no protocolo escrito, células cultivadas em membranas não esticadas por ST.Os cultivados em paralelo são usados como controles para o experimento. Ao final do experimento, as monocamadas podem ser processadas para analisar alterações na expressão gênica por PCR em tempo real ou alterações na abundância de proteínas por western blot. Além disso, as monocamadas podem ser fixadas para experimentos de imunoquímica com esta técnica.Após a fixação, as membranas são recortadas das placas e montadas em lâminas de vidro utilizando de 10 a 20 microlitros de água como agente de montagem antes da permeabilização e incubação com anticorpos. Os dados obtidos no experimento também podem ser utilizados para investigar a presença de substâncias liberadas, como fatores de crescimento ou citocinas. Esta imagem mostra células epiteliais fetais do tipo dois, fixadas com parmal, isoladas conforme este protocolo e semeadas em placas BioFlex revestidas com laminina.As células foram fixadas e a fotografia foi tirada. No dia seguinte ao do plaqueamento das células sem estiramento não-ST. A pureza das células foi determinada como sendo 90 mais ou menos 5% por meio de análise microscópica da morfologia das células epiteliais e imunomarcação para a proteína C do surfactante. As figuras a seguir apresentam dados de células epiteliais fetais tipo II que foram expostas a uma tensão cíclica de 5% a 40 ciclos por minuto durante 16 horas.Este blot norte de expressão de mRNA da proteína C do surfactante ilustra que a tração induz a diferenciação de células do tipo dois utilizando diferentes substratos de matriz extracelular. Os sinais de mais e menos representam, respectivamente, exposição ou ausência de exposição à tração. Os dados de expressão são apresentados no histograma como média mais ou menos erro padrão da média (SEM), com N igual a três, e o asterisco indica um valor de P inferior a 0,05.Essas imagens de imunoquímica por fluorescência mostram os níveis da proteína C do surfactante em verde. Em células fetais do tipo II não expostas à tensão mecânica à esquerda e expostas à tensão mecânica à direita, os núcleos foram contra-esticados com DAPI, que aparece em azul. Este histograma quantifica os resultados de western blot de três experimentos, demonstrando que o estiramento mecânico aumenta os níveis da proteína C do surfactante.Neste experimento, N é igual a três e o asterisco indica um valor de P inferior a 0,05. Após assistir a este vídeo, você deverá ter uma boa compreensão de como acelerar células pulmonares fetais e expô-las a estiramento mecânico.

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Bioengineering

Bioengenharia

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