Identificación de roedor II

Lab Animal Research

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Overview

< clase p = 'jove_content' > fuente: Kay Stewart, RVT, RLATG, CMAR; Valerie A. Schroeder, RVT, RLATG. Universidad de Notre Dame, en

registros de animales deben mantenerse con precisión para asegurar que la recogida de datos es correcta. Gama de registros de mantenimiento de información sobre tarjetas de jaula a tener una base de datos detallada con toda la información relevante sobre cada animal. El componente principal del mantenimiento de registros es la identificación de animales de investigación. Hay una variedad de métodos adecuados para la identificación de las ratas y ratones. Este video describe las técnicas procesales para tatuaje, colocación de microchip y los métodos de identificación temporal y también explora los beneficios de cada uno.

Cite this Video

JoVE Science Education Database. Fundamentos de la investigación de animales de laboratorio. Identificación de roedor II. JoVE, Cambridge, MA, (2017).

Principles

< clase p = 'jove_content' > el uso del tatuaje cola es beneficioso en muchos protocolos de investigación. Tatuajes de cola son ideales para un animal que debe ser reflejada en una máquina de MRI, o uno que está genéticamente predispuesto a dermatitis ulcerosa. Para una rápida identificación de un animal en una jaula, sin tener que frenar, el tatuaje de cola se visualiza fácilmente. Sin embargo, esta técnica requiere habilidad, práctica y una mano constante; también se requiere equipo especializado. 1

protocolos experimentales pueden requerir el Genotipado de los recién nacidos tan pronto como el primer día. Como resultado, es esencial que estos cachorros sean identificadas permanentemente. En esta edad joven, los pabellones de la oreja no se desarrollan lo suficiente para insertar una etiqueta de oreja, y un golpe de oído pero no se puede utilizar en ellos. En el pasado, era común para un investigador con un código de eliminación del dedo del pie para identificar a los recién nacidos. Sin embargo, esto fue estresante tanto para el animal joven y la presa y así ha sido considerado como inhumano. 2 el uso del tatuaje del dedo del pie permite que los animales a ser identificado permanentemente hasta que estén lo suficientemente grandes como para etiquetado de oreja u oreja perforando. 3

aunque el proceso para la implantación de un microchip es relativamente fácil, hay varios factores que limitan su utilidad para la identificación en los ratones. Los microchips estériles son del tamaño de un grano de arroz grande y requieren de un 10 a 12 medidor de aguja para la entrega. Por lo tanto, son muy grandes para un ratón. El costo de los microchips y el dispositivo de lectura también puede ser prohibitivo, como la vida del ratón es corto y el número de animales es generalmente extenso. Animales que están destinados a ser reflejada en una máquina de MRI no tienen implantes. Sin embargo, si hay un grupo de animales valiosos que debe ser identificado permanentemente, pueden utilizarse microchips. 4

estudios agudos que requieren animales a identificarse durante horas o algunos días, no requieren el uso de identificación permanente. Marcadores no tóxicos se hacen específicamente para colorear la piel de los animales y están disponibles en varios colores. Estos tintes de marcador pueden permanecer visibles durante varias semanas. Los marcadores pueden también utilizarse en conjunto con otros métodos fácilmente detectar animales específicos en un grupo.

Procedure

1. tatuaje cola

tatuajes cola se leen fácilmente sin la necesidad de manejar los animales.

Figure 1
figura 1. Tatuaje cola en ratones adultos

  1. preparar el equipo de tatuaje según el fabricante ' instrucciones. Se requiere una pequeña cantidad de tinta. Tinte negro puede usarse para albino ratones o ratas y colorante verde pigmentados ratones o ratas.
  2. Preparar los animales para la identificación de.
    Nota: Para minimizar la aprensión o angustia, tatuaje cola debe realizarse en una sala de procedimientos en lugar de un área de alojamiento de los animales.
    1. Restringir apropiadamente el animal para tatuar para que el movimiento es mínimo.
    2. Ratas de destete se refrenan con una taza de plástico con muescas, con el labio de la Copa asegurada bajo los tornillos en la plataforma del tatuaje y la cola que se extiende a través de la ranura.
    3. Ratones adultos pueden ser restringidos mediante un limitador de Copa, con la cola tiró tenso de la apertura y el reborde de la taza en lugar a través de una plataforma u otro dispositivo de.
    4. Limpiar la cola con una pequeña cantidad de limpiador del tejido diluido aplicada con un hisopo de algodón. Ratas adultas tienen generalmente una acumulación de la escala y los desechos de la cola que debe ser limpiada antes de aplicar el tatuaje. Un agua y jabón exfoliante de la cola eliminará la mayoría de la suciedad y los desechos. Secar la cola antes de proceder.
    5. Aplique aceite de tejido sobre la piel con un hisopo de algodón antes de tatuarse. El aceite del tejido es necesario para minimizar el daño tisular por ablandamiento de la piel y lubrica la aguja del tatuaje. Además, el aceite disuelve la suciedad no se elimina por el proceso de limpieza y evita que la tinta la coloración de la piel nontattooed.
  3. Aplicar el tatuaje.
    1. Mojar la punta de la aguja en el pigmento con el apagado de la máquina
    2. Llevar la punta de la aguja en el sitio del tatuaje con la pistola de activación por el pedal de pie.
    3. Hacer corto, incluso movimientos en una dirección. Números y letras deben tatuado de tal manera que se construyen en los segmentos con ángulos mínimos y curvas (cuando sea posible).
    4. Penetra bastante profundamente en la dermis con la aguja para el pigmento permanente deposición. Un cambio en el sonido de la aguja activado puede ayudar a discernir la profundidad de.
    5. Acercarse a la piel con la aguja en un ángulo de 90 o por deposición adecuada de pigmento.
  4. Tatuaje la limpieza y el cuidado
    1. Blot (no limpiar) el tatuaje terminado de pigmento exceso con una toalla de papel.
    2. La presencia de sangre en la toalla de papel o el tatuaje indica que el tatuaje se hizo demasiado profundo y por lo tanto es poco probable que sea permanente.
    3. Reforzar las áreas finas de caracteres del tatuaje con pigmentos adicionales. Personajes están reforzados con URL de pigmento depositado a, pero no en la parte superior, pigmento depositado ya.
    4. Para agregar pigmento adicional, sumergir la punta de la aguja en el reservorio de tinte cada dos caracteres para los ratones y todo un personaje para las ratas.
    5. Las causas de decoloración de tatuajes incluyen inadecuadas cantidades de pigmento, tatuajes hechos demasiado poco, tatuajes hechos demasiado profundamente, un ángulo inadecuado de la aguja a la piel, agujas embotadas o enganchadas se utiliza o el tatuaje que se hizo demasiado rápido.
    6. Limpiar el equipo de tatuaje después de cada uso según el fabricante ' instrucciones s.

2. Dedo del pie tatuaje de recién nacidos

protocolos experimentales pueden requerir el Genotipado de los recién nacidos tan pronto como el día, es esencial que estos cachorros sean identificadas permanentemente. El uso del tatuaje del dedo del pie permite que los animales a ser identificado hasta que estén lo suficientemente grandes como para etiquetado de oreja u oreja perforando.

Figure 2
figura 2. La técnica de sujeción adecuado para tatuaje de un ratón recién nacido. La lanceta tiene el tinte del verde en la punta.

  1. Refrene preweaned PUP. Cojín de
    1. taza del neonato en la mano en una gasa. Posicionar el pie entre el pulgar y el ladrón del dedo índice para exponer el dedo elegido, o los pies, para tatuar.
    2. Mantenga los pies cerca de los dedos del pie para que el dedo del pie tiene una superficie sólida detrás de él, que impide su flexión a.
    3. No overtwist la pata al colocar los pies. PUP que se refrena puede mover, pero vocalización no es necesariamente oído.
  2. Preparar el equipo.
    1. Seleccionar una lanceta animal de vara de oro de 4,5 mm.
    2. Colocar un pequeño punto de pasta de tatuaje verde sobre una superficie no porosa, papel de aluminio funciona bien.
    3. Mojar la punta de la lanceta en la pasta de tatuaje.
    4. Utilizar solamente una pequeña cantidad de pasta de.
  3. Aplicar el tatuaje.
    1. Poke la punta deseada con la lanceta de vara de oro según un código de identificación.
    2. Pinchar la piel para introducir la pasta en la piel, dejando una marca.
    3. El mismo punto meter tres veces para asegurar la penetración correcta.
    4. Evite meter tan profundamente que sangra el dedo del pie, esto puede resultar en un tatuaje más.
  4. Tatuaje la limpieza y el cuidado
    1. seque suavemente la mancha con una trapo/toalla absorbente para eliminar el exceso de pasta.
    2. No trate de limpiar el exceso de pasta de la base o cuerpo.
    3. Devolver el animal a su jaula.
    4. Cuando los cachorros lactantes están tatuados, es aconsejable también tatuaje la presa. Esto puede impedirle reaccionando de forma exagerada a la pasta en los cachorros, que podría conducir a la preparación excesiva del tatuaje.
    5. Utilice una lanceta nueva para cada camada.
    6. Los tatuajes debe verificarse en el día después del procedimiento. Rehacer el tatuaje si los puntos son débiles o no visibles. Si los puntos son visibles el día después de tatuaje, debe permanecer visibles durante toda la vida del animal.

3. Pies tatuajes de ratones y ratas adultas

cuando se tatuó una camada de recién nacidos, se recomienda que la madre también se tatuaban para que la pasta en sus cachorros es no extraña a her.

  1. Seguridad del animal.
    1. Refrenar el animal utilizando un cono de plástico o un limitador de plexiglás que permite el acceso a los pies traseros.
    2. Pie se extienden desde el dispositivo de seguridad.
    3. Posición del pie entre el pulgar y el ladrón del dedo índice para exponer el dedo elegido, o los pies, para tatuar
    4. Mantenga los pies cerca de los dedos del pie para que el dedo del pie tiene una superficie sólida detrás de él, impidiendo que el dedo del pie doblado a.
    5. No overtwist la pata al colocar los pies. Adultos que se refrenan pueden tratar de retirar el pie.
  2. Preparar el equipo.
    1. Seleccionar una lanceta animal de vara de oro de 5 mm.
    2. Colocar un pequeño punto de pasta de tatuaje verde sobre una superficie no porosa, papel de aluminio funciona bien.
    3. Mojar la punta de la lanceta en la pasta de tatuaje.
    4. Utilizar solamente una pequeña cantidad de pasta de.
  3. Aplicar el tatuaje.
    1. Poke la punta deseada con la lanceta de vara de oro según un código de identificación.
    2. Pinchar la piel para introducir la pasta en la piel, dejando una marca.
    3. El mismo punto meter tres veces para asegurar la penetración correcta.
    4. Evite meter tan profundamente que sangra el dedo del pie, esto puede resultar en un tatuaje más.
  4. Tatuaje la limpieza y el cuidado
    1. seque suavemente el lugar de un trapo/toalla absorbente para eliminar el exceso de pasta.
    2. No trate de limpiar el exceso de pasta de la base o cuerpo.
    3. Devolver el animal a su jaula.
    4. Utilice una lanceta nueva para cada animal.
    5. Los tatuajes debe verificarse en el día después del procedimiento. Rehacer el tatuaje si los puntos son débiles o no visibles. Si los puntos son visibles el día después de tatuaje, debe permanecer visibles durante toda la vida del animal.

4. el microchip

la implantación de un chip RFID es un método comúnmente utilizado para la identificación de animales.

  1. Cargar el microchip en el aplicador, o bien seleccione una jeringa precargada.
  2. Refrenar el animal utilizando un tubo de sujeción de plexiglás que permite agarrar la piel sobre los hombros.
  3. La piel, creando un bolsillo de la tienda.
  4. Coloque la aguja a través de la piel, bisel hacia arriba y paralelo a la espina dorsal y dirigido hacia la cola.
  5. Expulsar el microchip subcutáneo.
  6. Retire la aguja y pellizcar la piel cerrada en el punto de inyección. Esto evita que el microchip siguiendo la aguja de la piel. Continúe aplicando presión para proporcionar hemostasia de sangrado de la piel.
  7. Quitar el animal desde el dispositivo de sujeción y escanear el chip para confirmar el código de identificación.

Figure 3
figura 3. Colocación de microchip en ratas adultas.

5. identificación temporal para los ratones

tintes no tóxicos y animales marcadores pueden utilizarse para la identificación temporal de ratones.

  1. Refrenar el ratón que la zona entre los omóplatos es accesible para las marcas en el lugar
  2. Poner un marcador, punto o raya del tinte en la piel en esta área. Esta región sirve para evitar que el animal de retirar la marca mientras aseo.
  3. Comprobar la marca periódicamente si se utiliza como identificador único para más de unos pocos días.
  4. La cola puede también usarse para duraciones cortas. Sin embargo, el animal puede quitar una marca de él mientras aseo.

6. Identificación temporal para las ratas

  1. refrenar la rata para que el área de aplicación de tinte o marcador es fácilmente accesible. En algunos casos, cuando se necesita sólo una raya o un punto, el animal no tendrá que ser refrenado pero está permitido moverse libremente en la jaula.
  2. Contención manual agarrando la cola y se mantiene tensa mientras se aplica la identificación se realiza comúnmente.
  3. Inmovilización temporal utilizando anestésicos inhalantes puede hacerse rebelde animales.
  4. Comprobar la marca periódicamente si utiliza este método como el identificador único por más de unos pocos días.

la capacidad de identificar a los animales de investigación individual es un aspecto esencial de la colección científica de conservación de registros y datos. Distinguir entre animales asegura que el tema correcto es utilizado para el procedimiento experimental previsto.

Allí es varios métodos permanentes y temporales que los científicos usan para identificar a los animales de laboratorio individual. En este video, nos ' ll discutir métodos que implican tatuajes cola de roedor adultos, recién nacido de los dedos del pie y dedos del pie adulto. Siguiente, ' ll tocan en la técnica de colocación de microchip realiza comúnmente en ratas adultas, seguidas por el método de identificación temporal universal que utiliza colorantes atóxicos.

antes de adentrarse en los protocolos de estos métodos, debe ' s revisar las consideraciones, ventajas y deficiencias de cada una de estas técnicas. Tatuaje cola es beneficioso en muchos protocolos de investigación, tales como experimentos que implican proyección de imagen de MRI o aquellos donde los animales son genéticamente predispuestos a condiciones incluyendo dermatitis ulcerosa de la piel. Otra ventaja de los tatuajes de cola es que fácilmente se visualizan sin tener que frenar manualmente el animal.

Ciertos protocolos experimentales requieren Genotipado de recién nacidos tan pronto como el día, es esencial que estos cachorros sean identificadas permanentemente. El uso del tatuaje del dedo del pie permite tales animales ser identificado hasta que estén lo suficientemente grandes como para etiquetado de oreja u oreja perforando. Es una buena idea aplicar un tatuaje similar del dedo del pie de la madre adulto para evitar que le de reacción excesiva y excesivamente acicalado su cachorro ' nuevo tatuaje s. Aunque hay varias ventajas al utilizar este método, la desventaja es que el procedimiento requiere habilidad, práctica, una mano firme y equipo especializado.

El siguiente método de identificación permanente bajo consideración es el microchip. Aunque, implantación de microchips es un proceso relativamente fácil, hay varios factores que limitan su utilidad. En primer lugar, estos chips son aproximadamente del tamaño de un grano de arroz grande y requieren un 10-12 medidor de aguja para la implantación, que es demasiado grande para un ratón, lo que limita el método a ratas adultas. En segundo lugar, microchips son caros y por lo tanto no son ideales para la identificación de gran número de animales. Por último, los microchips no pueden utilizarse en los experimentos con MRI. Sin embargo, si hay un grupo de animales valiosos como criador de animales con la genética única que debe ser identificado permanentemente, microchips se pueden utilizar.

El último método que nos ' ll discutir es la identificación temporal uso de marcadores no tóxicos. Los marcadores no tóxicos están hechos para colorear la piel de los animales de investigación. Este método es ideal para estudios a corto plazo que requieren identificar animales por sólo unas horas o días, aunque los tintes pueden permanecer visibles durante varias semanas. Algunos investigadores utilizan estos marcadores en conjunto con otros métodos de identificación fácilmente detectar animales específicos en un grupo.

ahora que hemos discutido a fondo, dejar que ' s aprender los procedimientos, a partir de cola tatuajes. Aquí, demostramos el procedimiento en ratones adultos, pero el mismo puede ser aplicado para destete y ratas adultas.

Para reducir al mínimo cualquier temor o angustia a los animales, tatuajes de cola se deben realizar en la sala de procedimientos en lugar de en el área de alojamiento de los animales. Antes de aplicar el tatuaje, refrena el ratón utilizando a un limitador de Copa, con la cola tensada de la apertura. El reborde de la taza se lleva a cabo en lugar a través de una plataforma de vidrio especial. A continuación, limpie la cola con una pequeña cantidad de tejido diluido limpiador en un hisopo de algodón. Este paso es importante para eliminar cualquier acumulación de la escala y los desechos que puedan interferir con el tatuaje. A continuación, aplique aceite de tejido en la piel de la cola con otra torunda. Esto minimiza el daño tisular por ablandamiento de la piel y proporciona lubricación para la aguja del tatuaje. Además, el aceite disuelve la suciedad que no se elimina por el proceso de limpieza y evita que la tinta de coloración en la piel no tatuada. Ahora te ' re listo para aplicar el tatuaje de.

Mientras la máquina está apagado, sumergir la punta de la aguja del tatuaje, que es una lanceta o aguja hipodérmica, el pigmento. A continuación, activar la pistola con el pedal, asentar el tatuaje en la cola y llevar la punta de la aguja en el sitio del tatuaje. Acercarse a la piel con la aguja en un ángulo de 90° y penetrar profundamente bastante en la dermis que permanentemente se deposita el pigmento. Un cambio en el sonido de la aguja activada puede ayudar a discernir la profundidad. Hacer trazos cortos incluso en una sola dirección, formando números y letras. Tratar de ustedse mínimas curvas y ángulos al aplicar el tatuaje de.

Agregar pigmento adicional, sumergir la punta de la aguja en el recipiente de tinte para cada personajes de uno-dos para los ratones y todo un personaje para las ratas. Secar el tatuaje terminado con papel toalla para quitar exceso del pigmento. La presencia de sangre en la toalla de papel o el tatuaje indica que el tatuaje se hizo demasiado profundo y por lo tanto es poco probable que sea permanente. Reforzar personajes delgados con pigmento adicional mediante la colocación de la aguja paralelo a, no en la parte superior, el pigmento ya depositado. Limpie el equipo de tatuaje después de cada uso y deben utilizarse una aguja nueva o esterilizada y un suministro fresco de tinta entre jaulas para evitar la transmisión de la enfermedad.

a continuación, vamos a aprender cómo aplicar tatuajes del dedo del pie a los recién nacidos y adultos. Aquí le mostraremos el procedimiento en ratones, pero los pasos son aplicables para las ratas.

Los recién nacidos están tatuados en los dedos de los pies como el tailbones no están osificadas y la longitud de la cola es demasiado pequeña. También crece la cola, la piel se estire y los números pueden convertirse en ilegible, débil y distorsionada. Empezar colocando un poco de pasta de tatuaje verde sobre una superficie no porosa como papel de aluminio. A continuación, la taza el cachorro destetado previamente en tu mano con una gasa. Coloque el pie entre el pulgar y la tutela de su dedo índice al descubierto los dedos solicitados para tatuar. Mantenga los pies cerca de los dedos del pie para que el dedo seleccionado tiene una superficie sólida detrás de él para impedir el doblez lejos.

Ahora, sumerja la punta de la lanceta de 4,5 mm en la pasta de tatuaje. Luego, meter el dedo deseado según el código determinado. Para asegurar la penetración adecuada, meter el mismo lugar tres veces. Penetrar en la piel lo suficiente para que la pasta deja una marca, pero evite meter tan profundamente la sangra del dedo del pie. Suavemente seque el nuevo tatuaje con la gasa para retirar cualquier exceso tatuaje pasta y devolver el animal a su jaula. Utilice una lanceta nueva para la próxima camada. Un día después del procedimiento, comprobar que el tatuaje sea visible.

Cuando los cachorros lactantes están tatuados, es aconsejable también tatuaje la presa. Esto puede evitar que le de reacciones exageradas y excesivamente acicalado su cachorro ' s tatuajes. Para aplicar un tatuaje del dedo del pie a un adulto, una vez más, el primer lugar una pequeña mancha de pasta de tatuaje verde sobre una lámina de aluminio. Entonces, refrenar el animal utilizando un cono de plástico o un limitador de plexiglás que permite el acceso a las patas traseras. Extender el pie desde el dispositivo de sujeción y colocar el pie entre el pulgar y la tutela de su dedo índice al descubierto los dedos solicitados para tatuajes.

Ahora, sumerja la punta de la lanceta de 5mm en la pasta de tatuaje. Y, como antes, aplicar el tatuaje por meter y pinchar la piel del dedo del pie deseado por lo menos tres veces para asegurar la penetración correcta. A continuación, suavemente borra el tatuaje para quitar cualquier exceso de pasta y devolver el animal a su jaula. Como con los recién nacidos, verificar el tatuaje un día después del procedimiento. Si la marca es visible al día siguiente tatuaje, debe permanecer visible para el animal ' vida s. Si es débil o no es visible, entonces rehacer el tatuaje como se describe anteriormente.

el siguiente método de identificación que nos ' ll discutir consiste en implantar microchips en roedores. El chip utilizado para el etiquetado de animales de laboratorio es un chip de identificación por Radio frecuencia o RFID. Generalmente, el chip está precargado en agujas, que luego pueden ser colocadas en el aplicador. Para la inserción de la viruta, utilice un tubo de plexiglás para refrenar el animal asegurándose de que todavía puede agarrar la piel sobre los hombros. En primer lugar, la tienda la piel para crear un bolsillo. Luego coloque la aguja a través de la piel, bisel hacia arriba, paralelo a la columna vertebral y dirigido hacia la cola. Expulse el microchip subcutáneo y retire la aguja. Pellizcar la piel cerrada en el sitio de la inyección para evitar que el chip siguiendo la aguja de la piel. Continúe aplicando presión para proporcionar hemostasia de sangrado de la piel. Retire el animal desde el dispositivo de sujeción y escanear el chip usando el lector proporcionado por el fabricante para confirmar el código de identificación.

por último, dejar que ' s aprender a aplicar tintes temporales a los roedores para su identificación. Que ' s inicio con ratones. En primer lugar, restringir el animal tal que la zona entre los omóplatos es accesible. Esta parte del cuerpo está a salvo de la preparación. Coloque un punto o una raya del tinte en la piel en esta zona y colocar la espalda del animal en su jaula.

Para las ratas, refrenar el animal manualmente sujetándola por la cola y manteniéndola tensa. Esto asegura que el área de aplicación de tinte es fácilmente accesible, que podría ser la cabeza, hombros o cadera. Coloque un punto o una raya del tinte en la piel. A veces es posible aplicar tinte no tóxico sin refrenar el animal. Compruebe las marcas de estos animales periódicamente, especialmente si están utilizando como identificador único para más de unos pocos días.

ahora que hemos repasado los procedimientos de estos métodos de identificación diferentes, que ' s ver cómo los científicos están usando en diferentes estudios hoy.

El uso de roedores en los experimentos de comportamiento es bastante común. Aquí, los investigadores usaron la cola tatuajes para marcar los animales permanentemente y luego los observó durante varios días en un ambiente de hogar jaula artificialmente construido. Los datos obtenidos revelaron diferencias en los comportamientos, como la distancia se movió, entre el control y los animales de experimentación, durante un período de 10 días post cirugía.

En otro experimento de comportamiento, los investigadores realizaron el tatuaje del dedo del pie en recién nacidos y los colocó en una caja de grabación con micrófonos especiales para grabamos vocalizaciones ultrasónicas. El propósito de este experimento fue observar las diferencias en la llamada tarifa, es decir número de vocalizaciones por minuto, en el tipo salvaje y ratones deficientes Shank2--un modelo de autismo-sobre 12 días neonatal período y adulto campana.

Por último, como comentamos anteriormente, el uso de tinte no tóxico es un medio eficaz para marcar los animales para los experimentos a corto plazo. Aquí, los científicos estaban interesados en la expresión transitoria de una proteína del plasma. Marcaron los animales con los marcadores temporales, inyectado por vía intravenosa el ADN plásmido y recoge la muestra de sangre dos días más tarde para determinar la expresión de la proteína usando la técnica de inmunoblot.

te ' ve a Miró JoVE ' Introducción s tatuajes, colocación de microchip y los métodos de identificación temporal para las ratas y ratones de laboratorio. Identificación de los animales es un componente principal del mantenimiento de registros en la investigación. Por lo tanto, al elegir el método de identificación, muchos factores deben deliberados. Esto incluye el nivel de molestias a los animales, la facilidad de la técnica, las necesidades experimentales y finalmente el costo asociado con el método. Como siempre, gracias por ver!

Summary

la hora de elegir el método de identificación, deben ser deliberados de muchos factores. Cada técnica tiene ventajas y desventajas que deben ser considerados en relación con las necesidades experimentales. Mientras que los costos deben ser sopesados junto con otros factores, la facilidad de la técnica y el nivel de molestias a los animales deben ser las consideraciones primarias. 4,5

References

  1. Robinson, V., Morton, D.B., Anderson, D., Carver, J.F.A., Francis, R.J., Hubrecht, R., Jenkins, E., Mathers, K.E., Raymond, R., Rosewell, I., Wallace, J., and Wells, D.J. 2003. Refinement and reduction in production of genetically modified mice. Laboratory Animals. 37:S1-S50.
  2. Schaefer, D.C., Asner, I.N., Seifert, B., Bürki, K., and Cinelli, P. 2010. Analysis of physiological and behavioural parameters in mice after toe clipping as newborns. Laboratory Animals. 44:7-13
  3. Castelhano-Carlos, M.J., Sousa, N., Ohl, F., and Baumans, V. 2010. Identification methods in newborn C57BL/6 mice: a developmental and behavioural evaluation. Laboratory Animals. 44: 88-103.
  4. Danneman, P.J., Suckow, M.A., and Brayton, C.F. 2013. The laboratory mouse. Second edition. New York, NY: CRC Press.
  5. Institute for the Laboratory Animal Research. 2011. Guide for the care and use of laboratory animals, 8th ed. Washington (DC): National Academies Press.

1. tatuaje cola

tatuajes cola se leen fácilmente sin la necesidad de manejar los animales.

Figure 1
figura 1. Tatuaje cola en ratones adultos

  1. preparar el equipo de tatuaje según el fabricante ' instrucciones. Se requiere una pequeña cantidad de tinta. Tinte negro puede usarse para albino ratones o ratas y colorante verde pigmentados ratones o ratas.
  2. Preparar los animales para la identificación de.
    Nota: Para minimizar la aprensión o angustia, tatuaje cola debe realizarse en una sala de procedimientos en lugar de un área de alojamiento de los animales.
    1. Restringir apropiadamente el animal para tatuar para que el movimiento es mínimo.
    2. Ratas de destete se refrenan con una taza de plástico con muescas, con el labio de la Copa asegurada bajo los tornillos en la plataforma del tatuaje y la cola que se extiende a través de la ranura.
    3. Ratones adultos pueden ser restringidos mediante un limitador de Copa, con la cola tiró tenso de la apertura y el reborde de la taza en lugar a través de una plataforma u otro dispositivo de.
    4. Limpiar la cola con una pequeña cantidad de limpiador del tejido diluido aplicada con un hisopo de algodón. Ratas adultas tienen generalmente una acumulación de la escala y los desechos de la cola que debe ser limpiada antes de aplicar el tatuaje. Un agua y jabón exfoliante de la cola eliminará la mayoría de la suciedad y los desechos. Secar la cola antes de proceder.
    5. Aplique aceite de tejido sobre la piel con un hisopo de algodón antes de tatuarse. El aceite del tejido es necesario para minimizar el daño tisular por ablandamiento de la piel y lubrica la aguja del tatuaje. Además, el aceite disuelve la suciedad no se elimina por el proceso de limpieza y evita que la tinta la coloración de la piel nontattooed.
  3. Aplicar el tatuaje.
    1. Mojar la punta de la aguja en el pigmento con el apagado de la máquina
    2. Llevar la punta de la aguja en el sitio del tatuaje con la pistola de activación por el pedal de pie.
    3. Hacer corto, incluso movimientos en una dirección. Números y letras deben tatuado de tal manera que se construyen en los segmentos con ángulos mínimos y curvas (cuando sea posible).
    4. Penetra bastante profundamente en la dermis con la aguja para el pigmento permanente deposición. Un cambio en el sonido de la aguja activado puede ayudar a discernir la profundidad de.
    5. Acercarse a la piel con la aguja en un ángulo de 90 o por deposición adecuada de pigmento.
  4. Tatuaje la limpieza y el cuidado
    1. Blot (no limpiar) el tatuaje terminado de pigmento exceso con una toalla de papel.
    2. La presencia de sangre en la toalla de papel o el tatuaje indica que el tatuaje se hizo demasiado profundo y por lo tanto es poco probable que sea permanente.
    3. Reforzar las áreas finas de caracteres del tatuaje con pigmentos adicionales. Personajes están reforzados con URL de pigmento depositado a, pero no en la parte superior, pigmento depositado ya.
    4. Para agregar pigmento adicional, sumergir la punta de la aguja en el reservorio de tinte cada dos caracteres para los ratones y todo un personaje para las ratas.
    5. Las causas de decoloración de tatuajes incluyen inadecuadas cantidades de pigmento, tatuajes hechos demasiado poco, tatuajes hechos demasiado profundamente, un ángulo inadecuado de la aguja a la piel, agujas embotadas o enganchadas se utiliza o el tatuaje que se hizo demasiado rápido.
    6. Limpiar el equipo de tatuaje después de cada uso según el fabricante ' instrucciones s.

2. Dedo del pie tatuaje de recién nacidos

protocolos experimentales pueden requerir el Genotipado de los recién nacidos tan pronto como el día, es esencial que estos cachorros sean identificadas permanentemente. El uso del tatuaje del dedo del pie permite que los animales a ser identificado hasta que estén lo suficientemente grandes como para etiquetado de oreja u oreja perforando.

Figure 2
figura 2. La técnica de sujeción adecuado para tatuaje de un ratón recién nacido. La lanceta tiene el tinte del verde en la punta.

  1. Refrene preweaned PUP. Cojín de
    1. taza del neonato en la mano en una gasa. Posicionar el pie entre el pulgar y el ladrón del dedo índice para exponer el dedo elegido, o los pies, para tatuar.
    2. Mantenga los pies cerca de los dedos del pie para que el dedo del pie tiene una superficie sólida detrás de él, que impide su flexión a.
    3. No overtwist la pata al colocar los pies. PUP que se refrena puede mover, pero vocalización no es necesariamente oído.
  2. Preparar el equipo.
    1. Seleccionar una lanceta animal de vara de oro de 4,5 mm.
    2. Colocar un pequeño punto de pasta de tatuaje verde sobre una superficie no porosa, papel de aluminio funciona bien.
    3. Mojar la punta de la lanceta en la pasta de tatuaje.
    4. Utilizar solamente una pequeña cantidad de pasta de.
  3. Aplicar el tatuaje.
    1. Poke la punta deseada con la lanceta de vara de oro según un código de identificación.
    2. Pinchar la piel para introducir la pasta en la piel, dejando una marca.
    3. El mismo punto meter tres veces para asegurar la penetración correcta.
    4. Evite meter tan profundamente que sangra el dedo del pie, esto puede resultar en un tatuaje más.
  4. Tatuaje la limpieza y el cuidado
    1. seque suavemente la mancha con una trapo/toalla absorbente para eliminar el exceso de pasta.
    2. No trate de limpiar el exceso de pasta de la base o cuerpo.
    3. Devolver el animal a su jaula.
    4. Cuando los cachorros lactantes están tatuados, es aconsejable también tatuaje la presa. Esto puede impedirle reaccionando de forma exagerada a la pasta en los cachorros, que podría conducir a la preparación excesiva del tatuaje.
    5. Utilice una lanceta nueva para cada camada.
    6. Los tatuajes debe verificarse en el día después del procedimiento. Rehacer el tatuaje si los puntos son débiles o no visibles. Si los puntos son visibles el día después de tatuaje, debe permanecer visibles durante toda la vida del animal.

3. Pies tatuajes de ratones y ratas adultas

cuando se tatuó una camada de recién nacidos, se recomienda que la madre también se tatuaban para que la pasta en sus cachorros es no extraña a her.

  1. Seguridad del animal.
    1. Refrenar el animal utilizando un cono de plástico o un limitador de plexiglás que permite el acceso a los pies traseros.
    2. Pie se extienden desde el dispositivo de seguridad.
    3. Posición del pie entre el pulgar y el ladrón del dedo índice para exponer el dedo elegido, o los pies, para tatuar
    4. Mantenga los pies cerca de los dedos del pie para que el dedo del pie tiene una superficie sólida detrás de él, impidiendo que el dedo del pie doblado a.
    5. No overtwist la pata al colocar los pies. Adultos que se refrenan pueden tratar de retirar el pie.
  2. Preparar el equipo.
    1. Seleccionar una lanceta animal de vara de oro de 5 mm.
    2. Colocar un pequeño punto de pasta de tatuaje verde sobre una superficie no porosa, papel de aluminio funciona bien.
    3. Mojar la punta de la lanceta en la pasta de tatuaje.
    4. Utilizar solamente una pequeña cantidad de pasta de.
  3. Aplicar el tatuaje.
    1. Poke la punta deseada con la lanceta de vara de oro según un código de identificación.
    2. Pinchar la piel para introducir la pasta en la piel, dejando una marca.
    3. El mismo punto meter tres veces para asegurar la penetración correcta.
    4. Evite meter tan profundamente que sangra el dedo del pie, esto puede resultar en un tatuaje más.
  4. Tatuaje la limpieza y el cuidado
    1. seque suavemente el lugar de un trapo/toalla absorbente para eliminar el exceso de pasta.
    2. No trate de limpiar el exceso de pasta de la base o cuerpo.
    3. Devolver el animal a su jaula.
    4. Utilice una lanceta nueva para cada animal.
    5. Los tatuajes debe verificarse en el día después del procedimiento. Rehacer el tatuaje si los puntos son débiles o no visibles. Si los puntos son visibles el día después de tatuaje, debe permanecer visibles durante toda la vida del animal.

4. el microchip

la implantación de un chip RFID es un método comúnmente utilizado para la identificación de animales.

  1. Cargar el microchip en el aplicador, o bien seleccione una jeringa precargada.
  2. Refrenar el animal utilizando un tubo de sujeción de plexiglás que permite agarrar la piel sobre los hombros.
  3. La piel, creando un bolsillo de la tienda.
  4. Coloque la aguja a través de la piel, bisel hacia arriba y paralelo a la espina dorsal y dirigido hacia la cola.
  5. Expulsar el microchip subcutáneo.
  6. Retire la aguja y pellizcar la piel cerrada en el punto de inyección. Esto evita que el microchip siguiendo la aguja de la piel. Continúe aplicando presión para proporcionar hemostasia de sangrado de la piel.
  7. Quitar el animal desde el dispositivo de sujeción y escanear el chip para confirmar el código de identificación.

Figure 3
figura 3. Colocación de microchip en ratas adultas.

5. identificación temporal para los ratones

tintes no tóxicos y animales marcadores pueden utilizarse para la identificación temporal de ratones.

  1. Refrenar el ratón que la zona entre los omóplatos es accesible para las marcas en el lugar
  2. Poner un marcador, punto o raya del tinte en la piel en esta área. Esta región sirve para evitar que el animal de retirar la marca mientras aseo.
  3. Comprobar la marca periódicamente si se utiliza como identificador único para más de unos pocos días.
  4. La cola puede también usarse para duraciones cortas. Sin embargo, el animal puede quitar una marca de él mientras aseo.

6. Identificación temporal para las ratas

  1. refrenar la rata para que el área de aplicación de tinte o marcador es fácilmente accesible. En algunos casos, cuando se necesita sólo una raya o un punto, el animal no tendrá que ser refrenado pero está permitido moverse libremente en la jaula.
  2. Contención manual agarrando la cola y se mantiene tensa mientras se aplica la identificación se realiza comúnmente.
  3. Inmovilización temporal utilizando anestésicos inhalantes puede hacerse rebelde animales.
  4. Comprobar la marca periódicamente si utiliza este método como el identificador único por más de unos pocos días.

la capacidad de identificar a los animales de investigación individual es un aspecto esencial de la colección científica de conservación de registros y datos. Distinguir entre animales asegura que el tema correcto es utilizado para el procedimiento experimental previsto.

Allí es varios métodos permanentes y temporales que los científicos usan para identificar a los animales de laboratorio individual. En este video, nos ' ll discutir métodos que implican tatuajes cola de roedor adultos, recién nacido de los dedos del pie y dedos del pie adulto. Siguiente, ' ll tocan en la técnica de colocación de microchip realiza comúnmente en ratas adultas, seguidas por el método de identificación temporal universal que utiliza colorantes atóxicos.

antes de adentrarse en los protocolos de estos métodos, debe ' s revisar las consideraciones, ventajas y deficiencias de cada una de estas técnicas. Tatuaje cola es beneficioso en muchos protocolos de investigación, tales como experimentos que implican proyección de imagen de MRI o aquellos donde los animales son genéticamente predispuestos a condiciones incluyendo dermatitis ulcerosa de la piel. Otra ventaja de los tatuajes de cola es que fácilmente se visualizan sin tener que frenar manualmente el animal.

Ciertos protocolos experimentales requieren Genotipado de recién nacidos tan pronto como el día, es esencial que estos cachorros sean identificadas permanentemente. El uso del tatuaje del dedo del pie permite tales animales ser identificado hasta que estén lo suficientemente grandes como para etiquetado de oreja u oreja perforando. Es una buena idea aplicar un tatuaje similar del dedo del pie de la madre adulto para evitar que le de reacción excesiva y excesivamente acicalado su cachorro ' nuevo tatuaje s. Aunque hay varias ventajas al utilizar este método, la desventaja es que el procedimiento requiere habilidad, práctica, una mano firme y equipo especializado.

El siguiente método de identificación permanente bajo consideración es el microchip. Aunque, implantación de microchips es un proceso relativamente fácil, hay varios factores que limitan su utilidad. En primer lugar, estos chips son aproximadamente del tamaño de un grano de arroz grande y requieren un 10-12 medidor de aguja para la implantación, que es demasiado grande para un ratón, lo que limita el método a ratas adultas. En segundo lugar, microchips son caros y por lo tanto no son ideales para la identificación de gran número de animales. Por último, los microchips no pueden utilizarse en los experimentos con MRI. Sin embargo, si hay un grupo de animales valiosos como criador de animales con la genética única que debe ser identificado permanentemente, microchips se pueden utilizar.

El último método que nos ' ll discutir es la identificación temporal uso de marcadores no tóxicos. Los marcadores no tóxicos están hechos para colorear la piel de los animales de investigación. Este método es ideal para estudios a corto plazo que requieren identificar animales por sólo unas horas o días, aunque los tintes pueden permanecer visibles durante varias semanas. Algunos investigadores utilizan estos marcadores en conjunto con otros métodos de identificación fácilmente detectar animales específicos en un grupo.

ahora que hemos discutido a fondo, dejar que ' s aprender los procedimientos, a partir de cola tatuajes. Aquí, demostramos el procedimiento en ratones adultos, pero el mismo puede ser aplicado para destete y ratas adultas.

Para reducir al mínimo cualquier temor o angustia a los animales, tatuajes de cola se deben realizar en la sala de procedimientos en lugar de en el área de alojamiento de los animales. Antes de aplicar el tatuaje, refrena el ratón utilizando a un limitador de Copa, con la cola tensada de la apertura. El reborde de la taza se lleva a cabo en lugar a través de una plataforma de vidrio especial. A continuación, limpie la cola con una pequeña cantidad de tejido diluido limpiador en un hisopo de algodón. Este paso es importante para eliminar cualquier acumulación de la escala y los desechos que puedan interferir con el tatuaje. A continuación, aplique aceite de tejido en la piel de la cola con otra torunda. Esto minimiza el daño tisular por ablandamiento de la piel y proporciona lubricación para la aguja del tatuaje. Además, el aceite disuelve la suciedad que no se elimina por el proceso de limpieza y evita que la tinta de coloración en la piel no tatuada. Ahora te ' re listo para aplicar el tatuaje de.

Mientras la máquina está apagado, sumergir la punta de la aguja del tatuaje, que es una lanceta o aguja hipodérmica, el pigmento. A continuación, activar la pistola con el pedal, asentar el tatuaje en la cola y llevar la punta de la aguja en el sitio del tatuaje. Acercarse a la piel con la aguja en un ángulo de 90° y penetrar profundamente bastante en la dermis que permanentemente se deposita el pigmento. Un cambio en el sonido de la aguja activada puede ayudar a discernir la profundidad. Hacer trazos cortos incluso en una sola dirección, formando números y letras. Tratar de ustedse mínimas curvas y ángulos al aplicar el tatuaje de.

Agregar pigmento adicional, sumergir la punta de la aguja en el recipiente de tinte para cada personajes de uno-dos para los ratones y todo un personaje para las ratas. Secar el tatuaje terminado con papel toalla para quitar exceso del pigmento. La presencia de sangre en la toalla de papel o el tatuaje indica que el tatuaje se hizo demasiado profundo y por lo tanto es poco probable que sea permanente. Reforzar personajes delgados con pigmento adicional mediante la colocación de la aguja paralelo a, no en la parte superior, el pigmento ya depositado. Limpie el equipo de tatuaje después de cada uso y deben utilizarse una aguja nueva o esterilizada y un suministro fresco de tinta entre jaulas para evitar la transmisión de la enfermedad.

a continuación, vamos a aprender cómo aplicar tatuajes del dedo del pie a los recién nacidos y adultos. Aquí le mostraremos el procedimiento en ratones, pero los pasos son aplicables para las ratas.

Los recién nacidos están tatuados en los dedos de los pies como el tailbones no están osificadas y la longitud de la cola es demasiado pequeña. También crece la cola, la piel se estire y los números pueden convertirse en ilegible, débil y distorsionada. Empezar colocando un poco de pasta de tatuaje verde sobre una superficie no porosa como papel de aluminio. A continuación, la taza el cachorro destetado previamente en tu mano con una gasa. Coloque el pie entre el pulgar y la tutela de su dedo índice al descubierto los dedos solicitados para tatuar. Mantenga los pies cerca de los dedos del pie para que el dedo seleccionado tiene una superficie sólida detrás de él para impedir el doblez lejos.

Ahora, sumerja la punta de la lanceta de 4,5 mm en la pasta de tatuaje. Luego, meter el dedo deseado según el código determinado. Para asegurar la penetración adecuada, meter el mismo lugar tres veces. Penetrar en la piel lo suficiente para que la pasta deja una marca, pero evite meter tan profundamente la sangra del dedo del pie. Suavemente seque el nuevo tatuaje con la gasa para retirar cualquier exceso tatuaje pasta y devolver el animal a su jaula. Utilice una lanceta nueva para la próxima camada. Un día después del procedimiento, comprobar que el tatuaje sea visible.

Cuando los cachorros lactantes están tatuados, es aconsejable también tatuaje la presa. Esto puede evitar que le de reacciones exageradas y excesivamente acicalado su cachorro ' s tatuajes. Para aplicar un tatuaje del dedo del pie a un adulto, una vez más, el primer lugar una pequeña mancha de pasta de tatuaje verde sobre una lámina de aluminio. Entonces, refrenar el animal utilizando un cono de plástico o un limitador de plexiglás que permite el acceso a las patas traseras. Extender el pie desde el dispositivo de sujeción y colocar el pie entre el pulgar y la tutela de su dedo índice al descubierto los dedos solicitados para tatuajes.

Ahora, sumerja la punta de la lanceta de 5mm en la pasta de tatuaje. Y, como antes, aplicar el tatuaje por meter y pinchar la piel del dedo del pie deseado por lo menos tres veces para asegurar la penetración correcta. A continuación, suavemente borra el tatuaje para quitar cualquier exceso de pasta y devolver el animal a su jaula. Como con los recién nacidos, verificar el tatuaje un día después del procedimiento. Si la marca es visible al día siguiente tatuaje, debe permanecer visible para el animal ' vida s. Si es débil o no es visible, entonces rehacer el tatuaje como se describe anteriormente.

el siguiente método de identificación que nos ' ll discutir consiste en implantar microchips en roedores. El chip utilizado para el etiquetado de animales de laboratorio es un chip de identificación por Radio frecuencia o RFID. Generalmente, el chip está precargado en agujas, que luego pueden ser colocadas en el aplicador. Para la inserción de la viruta, utilice un tubo de plexiglás para refrenar el animal asegurándose de que todavía puede agarrar la piel sobre los hombros. En primer lugar, la tienda la piel para crear un bolsillo. Luego coloque la aguja a través de la piel, bisel hacia arriba, paralelo a la columna vertebral y dirigido hacia la cola. Expulse el microchip subcutáneo y retire la aguja. Pellizcar la piel cerrada en el sitio de la inyección para evitar que el chip siguiendo la aguja de la piel. Continúe aplicando presión para proporcionar hemostasia de sangrado de la piel. Retire el animal desde el dispositivo de sujeción y escanear el chip usando el lector proporcionado por el fabricante para confirmar el código de identificación.

por último, dejar que ' s aprender a aplicar tintes temporales a los roedores para su identificación. Que ' s inicio con ratones. En primer lugar, restringir el animal tal que la zona entre los omóplatos es accesible. Esta parte del cuerpo está a salvo de la preparación. Coloque un punto o una raya del tinte en la piel en esta zona y colocar la espalda del animal en su jaula.

Para las ratas, refrenar el animal manualmente sujetándola por la cola y manteniéndola tensa. Esto asegura que el área de aplicación de tinte es fácilmente accesible, que podría ser la cabeza, hombros o cadera. Coloque un punto o una raya del tinte en la piel. A veces es posible aplicar tinte no tóxico sin refrenar el animal. Compruebe las marcas de estos animales periódicamente, especialmente si están utilizando como identificador único para más de unos pocos días.

ahora que hemos repasado los procedimientos de estos métodos de identificación diferentes, que ' s ver cómo los científicos están usando en diferentes estudios hoy.

El uso de roedores en los experimentos de comportamiento es bastante común. Aquí, los investigadores usaron la cola tatuajes para marcar los animales permanentemente y luego los observó durante varios días en un ambiente de hogar jaula artificialmente construido. Los datos obtenidos revelaron diferencias en los comportamientos, como la distancia se movió, entre el control y los animales de experimentación, durante un período de 10 días post cirugía.

En otro experimento de comportamiento, los investigadores realizaron el tatuaje del dedo del pie en recién nacidos y los colocó en una caja de grabación con micrófonos especiales para grabamos vocalizaciones ultrasónicas. El propósito de este experimento fue observar las diferencias en la llamada tarifa, es decir número de vocalizaciones por minuto, en el tipo salvaje y ratones deficientes Shank2--un modelo de autismo-sobre 12 días neonatal período y adulto campana.

Por último, como comentamos anteriormente, el uso de tinte no tóxico es un medio eficaz para marcar los animales para los experimentos a corto plazo. Aquí, los científicos estaban interesados en la expresión transitoria de una proteína del plasma. Marcaron los animales con los marcadores temporales, inyectado por vía intravenosa el ADN plásmido y recoge la muestra de sangre dos días más tarde para determinar la expresión de la proteína usando la técnica de inmunoblot.

te ' ve a Miró JoVE ' Introducción s tatuajes, colocación de microchip y los métodos de identificación temporal para las ratas y ratones de laboratorio. Identificación de los animales es un componente principal del mantenimiento de registros en la investigación. Por lo tanto, al elegir el método de identificación, muchos factores deben deliberados. Esto incluye el nivel de molestias a los animales, la facilidad de la técnica, las necesidades experimentales y finalmente el costo asociado con el método. Como siempre, gracias por ver!

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