זיהוי מכרסמים II

JoVE Science Education
Lab Animal Research
A subscription to JoVE is required to view this content.  Sign in or start your free trial.
JoVE Science Education Lab Animal Research
Rodent Identification II

25,093 Views

13:46 min
April 30, 2023

Overview

מקור: קיי סטיוארט, RVT, RLATG, CMAR; ואלרי א. שרודר, אר.די.ג’י, אר-אל-ג’י. אוניברסיטת נוטרדאם, IN

רשומות בעלי חיים חייבות להישמר במדויק כדי להבטיח שאיסוף הנתונים נכון. הרשומות נעות בין שמירה על מידע על כרטיסי כלוב לבין מסד נתונים מפורט עם כל המידע הרלוונטי על כל בעל חיים. המרכיב העיקרי של תיעוד הוא זיהוי אישי של חיות מחקר. ישנן מגוון שיטות המתאימות לזיהוי עכברים וחולדות. סרטון זה מתאר את הטכניקות הפרוצדורליות לקעקוע, מיקום שבבים ושיטות זיהוי זמניות, וגם בוחן את היתרונות של כל אחד מהם.

Principles

Procedure

1. קעקוע זנב קעקועי זנב נקראים בקלות ללא צורך לטפל בחיה. איור 1. קעקוע זנב על עכברים בוגרים הכן את ציוד הקעקוע בהתאם להוראות היצרן. נדרשת כמות קטנה של דיו. צבע שחור צריך לשמש לעכברים לבקן או חולדות, וצבע ירוק לעכברים פיגמנטיים או חולדות. הכן את החיות לזיהוי.הערה: כדי למזער את החשש או המצוקה, קעקוע זנב צריך להתבצע בחדר הליך ולא באזור דיור לבעלי חיים. לרסן כראוי את החיה לקעקוע כך שהתנועה היא מינימלית. חולדות גנג מרוסנות באמצעות מחורצת מפלסטיק, כאשר שפת הכוס מאובטחת מתחת לברגים על משטח הקעקוע, והזנב מתרחב דרך החריץ. עכברים בוגרים יכולים להיות מרוסנים באמצעות מרסן, עם הזנב משך מתוח מן הפתח ואת אוגן של הכוס מוחזק במקום באמצעות פלטפורמה או מכשיר אחר. נקו את הזנב עם כמות קטנה של מנקה רקמות מדולל מוחל עם צמר גפן. חולדות מבוגרות בדרך כלל יש הצטברות של קנה מידה ופסולת על הזנב כי יש לנקות לפני החלת הקעקוע. קרצוף סבון ומים של הזנב יסיר את רוב הלכלוך והפסולת. ייבשו את הזנב היטב לפני שתמשיכו. יש למרוח שמן רקמות על העור עם ספוגית עם קצה כותנה ממש לפני הקעקוע. שמן הרקמות נחוץ כדי למזער את נזקי הרקמות על ידי ריכוך העור ושמן מחט הקעקוע. בנוסף, השמן ממיס כל לכלוך שלא הוסר על ידי תהליך הניקוי ומונע כתמי דיו של עור nontattooed. החל את הקעקוע. טובלים את קצה המחט בפיגמנט כשהמכונה כבויה. תביא את קצה המחט לאתר הקעקועים כשהאקדח מופעל על ידי דוושת הרגל. הפוך קצר, אפילו משיכות בכיוון אחד. ספרות ואותיות צריכות להיות מקועקעות באופן כזה, כך שהם בנויים במקטעים עם זוויות ועיקולים מינימליים (במידת האפשר). לחדור עמוק מספיק לתוך הדרמיס עם המחט לתצהיר פיגמנט קבוע. שינוי בצליל המחט הפעילה יכול לעזור להבחין בעומק. גש לעור עם המחט בזווית של 90o לתצהיר הולם של פיגמנט. ניקוי וטיפול לאחר קעקועים כתם (לא לנגב) את הקעקוע הושלם של פיגמנט עודף עם מגבת נייר. נוכחות של דם על הקעקוע או מגבת הנייר מצביעה על כך הקעקוע נעשה עמוק מדי, ולכן לא סביר להיות קבוע. לחזק אזורים דקים של דמויות קעקוע עם פיגמנט נוסף. הדמויות מחוזקות בפיגמנט המופקד במקביל לפיגמנט שכבר הופקד, אך לא על גבי הפיגמנט שכבר הופקד. כדי להוסיף פיגמנט נוסף, לטבול את קצה המחט לתוך מאגר הצבע עבור כל שני תווים עבור עכברים וכל תו אחד עבור חולדות. הסיבות לקעקועים דוהים כוללות כמויות לא מספקות של פיגמנט, קעקועים רדודים מדי, קעקועים שנעשו עמוק מדי, זווית לא הולמת של המחט לעור, מחטים קהות או מכורות בשימוש, או הקעקוע שנעשה מהר מדי. לנקות ביסודיות את ציוד הקעקוע לאחר כל שימוש על פי הוראות היצרן. 2. קעקוע בוהן של יילודים פרוטוקולים ניסיוניים יכולים לדרוש genotyping של יילודים כבר ביום הראשון, מה שהופך את זה חיוני כי גורים אלה להיות מזוהה לצמיתות. השימוש בקעקוע בוהן מאפשר לבעלי החיים להיות מזוהים עד שהם גדולים מספיק עבור תיוג אוזניים או אגרוף באוזן. איור 2. טכניקת האיפוק המתאימה לקעקוע עכבר ניאון. לרומח יש את הצבע הירוק על הקצה. לרסן גורים מרוסנים. הניאון ביד על כרית גזה. מקם את כף הרגל בין האגודל לבין הנוכל של האצבע המורה כדי לחשוף את הבוהן הנבחרת, או בהונות, לקעקוע. החזק את כף הרגל קרוב לבהונות כך שהבוהן יש משטח מוצק מאחוריו, מניעתו להתכופף. אין לתגרות את הרגל בעת מיקום כף הרגל. גורים מאופקים עשויים להתנועע, אך לא נשמע בהכרח קול. הכינו את הציוד. בחר רומח בעלי חיים גולדן רוד 4.5 מ”מ. מניחים נקודה קטנה של משחת קעקוע ירוק על משטח לא נקבובי; רדיד אלומיניום עובד טוב. טובלים רק את קצה הרומח במשחה לקעקועים. השתמש בכמות קטנה בלבד של הדבקה. החל את הקעקוע. תקע את הבוהן הרצויה עם הרומח גולדן רוד על פי קוד זיהוי. לנקב את העור כדי להציג את הדבק לתוך העור, משאיר סימן. תדקור את אותה נקודה שלוש פעמים כדי להבטיח חדירה נכונה. הימנע לחטט כל כך עמוק כי בוהן מדממת; זה יכול לגרום לקעקוע חלש יותר. ניקוי וטיפול לאחר קעקועים מכותים בעדינות את המקום עם מגבת/מגבת סופגת להסרת הדבק עודף. אין לנסות לנקות עודף הדבק מהרגל או מהגוף. החזירו את החיה לכלוב שלה. כאשר גורים מניקה מקועקעים, מומלץ גם לקעקע את הסכר. זה עשוי למנוע ממנה מתגובה מוגזמת הדבק על הגורים, אשר יכול להוביל טיפוח מוגזם של הקעקוע. השתמש lancet חדש לכל המלטה. הקעקועים צריכים להיות מאומתים ביום שלאחר ההליך. בצעו מחדש את הקעקוע אם הנקודות חלשות או לא נראות לעין. אם הנקודות גלויות יום לאחר הקעקוע, הם צריכים להישאר גלויים לכל החיים של החיה. 3. קעקוע בוהן של חולדות ועכברים בוגרים כאשר המלטה של יילודים מקועקעת, מוצע כי האם גם להיות מקועקע, כך הדבק על גוריה אינו זר לה. איפוק של החיה. לרסן את החיה באמצעות חרוט פלסטיק או מרסן פרספקס המאפשר גישה לרגליים האחוריות. תרחיב את הרגל ממכשיר האיפוק. מקם את כף הרגל בין האגודל לנוכל של האצבע המורה כדי לחשוף את הבוהן הנבחרת, או בהונות, לקעקוע החזק את כף הרגל קרוב לבהונות כך שהבוהן יש משטח מוצק מאחוריו, מניעת בוהן להתכופף. אין לתגרות את הרגל בעת מיקום כף הרגל. מבוגרים מרוסנים עשויים לנסות למשוך את כף הרגל. הכינו את הציוד. בחר רומח בעלי חיים גולדן רוד 5 מ”מ. מניחים נקודה קטנה של משחת קעקוע ירוק על משטח לא נקבובי; רדיד אלומיניום עובד טוב. טובלים רק את קצה הרומח במשחה לקעקועים. השתמש בכמות קטנה בלבד של הדבקה. החל את הקעקוע. תקע את הבוהן הרצויה עם הרומח גולדן רוד על פי קוד זיהוי. לנקב את העור כדי להציג את הדבק לתוך העור, משאיר סימן. תדקור את אותה נקודה שלוש פעמים כדי להבטיח חדירה נכונה. הימנע לחטט כל כך עמוק כי בוהן מדממת; זה יכול לגרום לקעקוע חלש יותר. ניקוי וטיפול לאחר קעקועים מכתימים בעדינות את הנקודה על מגבת/מגבת סופגת כדי להסיר עודף הדבק. אין לנסות לנקות עודף הדבק מהרגל או מהגוף. החזירו את החיה לכלוב שלה. השתמש lancet חדש לכל חיה. הקעקועים צריכים להיות מאומתים ביום שלאחר ההליך. בצעו מחדש את הקעקוע אם הנקודות חלשות או לא נראות לעין. אם הנקודות גלויות יום לאחר הקעקוע, הם צריכים להישאר גלויים לכל החיים של החיה. 4. שבבים זעירים ההשתלה של שבב RFID היא שיטה נפוצה לזיהוי בעלי חיים. טענו את השבב לתוך ההחלמה, או בחרו מזרק טעון מראש. לרסן את החיה באמצעות צינור ריסון פרספקס המאפשר אחיזה של העור על הכתפיים. אוהל העור, יצירת כיס. מניחים את המחט דרך העור, משופעים ומקבילים לעמוד השדרה, ומפנים אותה לכיוון הזנב. פלט את השבב בתת עור. למשוך את המחט ולצבוט את העור סגור בנקודת ההזרקה. זה מונע השבב מלעקוב אחר המחט מתוך העור. המשך להפעיל לחץ כדי לספק hemostasis עבור כל דימום בעור. הסר את החיה ממכשיר האיפוק ולסרוק את השבב כדי לאשר את קוד הזיהוי. איור 3. מיקום שבבים בחולדות בוגרות. 5. זיהוי זמני לעכברים צבעים לא טוקסיקיים וסמנים בעלי חיים יכולים לשמש לזיהוי זמני של עכברים. ריסנו את העכבר כך שהאזור שבין השכם נגיש לסימונים על הפרווה. הנח סמן, נקודה או פס של צבע על הפרווה באזור זה. אזור זה משמש כדי למנוע את החיה להסיר את הסימון בזמן הטיפוח. בדוק את הסימון מעת לעת אם אתה משתמש בו כמזהה היחיד במשך יותר מכמה ימים. הזנב יכול לשמש גם עבור משכי זמן קצרים. עם זאת, החיה עשויה להסיר ממנה סימן בזמן הטיפוח. 6. זיהוי זמני לחולדות ריסנו את החולדה כך שהאזור ליישום צבע או סימון יהיה נגיש בקלות. במקרים מסוימים, כאשר יש צורך רק פס או נקודה, החיה לא תצטרך להיות מרוסנת אבל מותר לנוע בחופשיות בכלוב. איפוק ידני על ידי אחיזת הזנב והחזקתו מתוחה בעת החלת הזיהוי נעשה בדרך כלל. אימוביליזציה זמנית באמצעות הרדמה משאיפה יכולה להיעשות עבור בעלי חיים שבירים. בדוק את הסימון מעת לעת אם אתה משתמש בשיטה זו כמזהה היחיד במשך יותר מכמה ימים.

Applications and Summary

בעת בחירת שיטת הזיהוי המתאימה, יש לדון בגורמים רבים. לכל טכניקה יש יתרונות וחסרונות שיש לקחת בחשבון ביחס לצרכים ניסיוניים. בעוד העלויות חייבות להישקל יחד עם גורמים אחרים, הקלות של הטכניקה ואת רמת אי הנוחות לבעלי החיים צריך להיות השיקולים העיקריים. 4,5

References

  1. Robinson, V., Morton, D.B., Anderson, D., Carver, J.F.A., Francis, R.J., Hubrecht, R., Jenkins, E., Mathers, K.E., Raymond, R., Rosewell, I., Wallace, J., and Wells, D.J. 2003. Refinement and reduction in production of genetically modified mice. Laboratory Animals. 37:S1-S50.
  2. Schaefer, D.C., Asner, I.N., Seifert, B., Bürki, K., and Cinelli, P. 2010. Analysis of physiological and behavioural parameters in mice after toe clipping as newborns. Laboratory Animals. 44:7-13
  3. Castelhano-Carlos, M.J., Sousa, N., Ohl, F., and Baumans, V. 2010. Identification methods in newborn C57BL/6 mice: a developmental and behavioural evaluation. Laboratory Animals. 44: 88-103.
  4. Danneman, P.J., Suckow, M.A., and Brayton, C.F. 2013. The laboratory mouse. Second edition. New York, NY: CRC Press.
  5. Institute for the Laboratory Animal Research. 2011. Guide for the care and use of laboratory animals, 8th ed. Washington (DC): National Academies Press.

Transcript

1. קעקוע זנב קעקועי זנב נקראים בקלות ללא צורך לטפל בחיה. איור 1. קעקוע זנב על עכברים בוגרים הכן את ציוד הקעקוע בהתאם להוראות היצרן. נדרשת כמות קטנה של דיו. צבע שחור צריך לשמש לעכברים לבקן או חולדות, וצבע ירוק לעכברים פיגמנטיים או חולדות. הכן את החיות לזיהוי.הערה: כדי למזער את החשש או המצוקה, קעקוע זנב צריך להתבצע בחדר הליך ולא באזור דיור לבעלי חיים. לרסן כראוי את החיה לקעקוע כך שהתנועה היא מינימלית. חולדות גנג מרוסנות באמצעות מחורצת מפלסטיק, כאשר שפת הכוס מאובטחת מתחת לברגים על משטח הקעקוע, והזנב מתרחב דרך החריץ. עכברים בוגרים יכולים להיות מרוסנים באמצעות מרסן, עם הזנב משך מתוח מן הפתח ואת אוגן של הכוס מוחזק במקום באמצעות פלטפורמה או מכשיר אחר. נקו את הזנב עם כמות קטנה של מנקה רקמות מדולל מוחל עם צמר גפן. חולדות מבוגרות בדרך כלל יש הצטברות של קנה מידה ופסולת על הזנב כי יש לנקות לפני החלת הקעקוע. קרצוף סבון ומים של הזנב יסיר את רוב הלכלוך והפסולת. ייבשו את הזנב היטב לפני שתמשיכו. יש למרוח שמן רקמות על העור עם ספוגית עם קצה כותנה ממש לפני הקעקוע. שמן הרקמות נחוץ כדי למזער את נזקי הרקמות על ידי ריכוך העור ושמן מחט הקעקוע. בנוסף, השמן ממיס כל לכלוך שלא הוסר על ידי תהליך הניקוי ומונע כתמי דיו של עור nontattooed. החל את הקעקוע. טובלים את קצה המחט בפיגמנט כשהמכונה כבויה. תביא את קצה המחט לאתר הקעקועים כשהאקדח מופעל על ידי דוושת הרגל. הפוך קצר, אפילו משיכות בכיוון אחד. ספרות ואותיות צריכות להיות מקועקעות באופן כזה, כך שהם בנויים במקטעים עם זוויות ועיקולים מינימליים (במידת האפשר). לחדור עמוק מספיק לתוך הדרמיס עם המחט לתצהיר פיגמנט קבוע. שינוי בצליל המחט הפעילה יכול לעזור להבחין בעומק. גש לעור עם המחט בזווית של 90o לתצהיר הולם של פיגמנט. ניקוי וטיפול לאחר קעקועים כתם (לא לנגב) את הקעקוע הושלם של פיגמנט עודף עם מגבת נייר. נוכחות של דם על הקעקוע או מגבת הנייר מצביעה על כך הקעקוע נעשה עמוק מדי, ולכן לא סביר להיות קבוע. לחזק אזורים דקים של דמויות קעקוע עם פיגמנט נוסף. הדמויות מחוזקות בפיגמנט המופקד במקביל לפיגמנט שכבר הופקד, אך לא על גבי הפיגמנט שכבר הופקד. כדי להוסיף פיגמנט נוסף, לטבול את קצה המחט לתוך מאגר הצבע עבור כל שני תווים עבור עכברים וכל תו אחד עבור חולדות. הסיבות לקעקועים דוהים כוללות כמויות לא מספקות של פיגמנט, קעקועים רדודים מדי, קעקועים שנעשו עמוק מדי, זווית לא הולמת של המחט לעור, מחטים קהות או מכורות בשימוש, או הקעקוע שנעשה מהר מדי. לנקות ביסודיות את ציוד הקעקוע לאחר כל שימוש על פי הוראות היצרן. 2. קעקוע בוהן של יילודים פרוטוקולים ניסיוניים יכולים לדרוש genotyping של יילודים כבר ביום הראשון, מה שהופך את זה חיוני כי גורים אלה להיות מזוהה לצמיתות. השימוש בקעקוע בוהן מאפשר לבעלי החיים להיות מזוהים עד שהם גדולים מספיק עבור תיוג אוזניים או אגרוף באוזן. איור 2. טכניקת האיפוק המתאימה לקעקוע עכבר ניאון. לרומח יש את הצבע הירוק על הקצה. לרסן גורים מרוסנים. הניאון ביד על כרית גזה. מקם את כף הרגל בין האגודל לבין הנוכל של האצבע המורה כדי לחשוף את הבוהן הנבחרת, או בהונות, לקעקוע. החזק את כף הרגל קרוב לבהונות כך שהבוהן יש משטח מוצק מאחוריו, מניעתו להתכופף. אין לתגרות את הרגל בעת מיקום כף הרגל. גורים מאופקים עשויים להתנועע, אך לא נשמע בהכרח קול. הכינו את הציוד. בחר רומח בעלי חיים גולדן רוד 4.5 מ”מ. מניחים נקודה קטנה של משחת קעקוע ירוק על משטח לא נקבובי; רדיד אלומיניום עובד טוב. טובלים רק את קצה הרומח במשחה לקעקועים. השתמש בכמות קטנה בלבד של הדבקה. החל את הקעקוע. תקע את הבוהן הרצויה עם הרומח גולדן רוד על פי קוד זיהוי. לנקב את העור כדי להציג את הדבק לתוך העור, משאיר סימן. תדקור את אותה נקודה שלוש פעמים כדי להבטיח חדירה נכונה. הימנע לחטט כל כך עמוק כי בוהן מדממת; זה יכול לגרום לקעקוע חלש יותר. ניקוי וטיפול לאחר קעקועים מכותים בעדינות את המקום עם מגבת/מגבת סופגת להסרת הדבק עודף. אין לנסות לנקות עודף הדבק מהרגל או מהגוף. החזירו את החיה לכלוב שלה. כאשר גורים מניקה מקועקעים, מומלץ גם לקעקע את הסכר. זה עשוי למנוע ממנה מתגובה מוגזמת הדבק על הגורים, אשר יכול להוביל טיפוח מוגזם של הקעקוע. השתמש lancet חדש לכל המלטה. הקעקועים צריכים להיות מאומתים ביום שלאחר ההליך. בצעו מחדש את הקעקוע אם הנקודות חלשות או לא נראות לעין. אם הנקודות גלויות יום לאחר הקעקוע, הם צריכים להישאר גלויים לכל החיים של החיה. 3. קעקוע בוהן של חולדות ועכברים בוגרים כאשר המלטה של יילודים מקועקעת, מוצע כי האם גם להיות מקועקע, כך הדבק על גוריה אינו זר לה. איפוק של החיה. לרסן את החיה באמצעות חרוט פלסטיק או מרסן פרספקס המאפשר גישה לרגליים האחוריות. תרחיב את הרגל ממכשיר האיפוק. מקם את כף הרגל בין האגודל לנוכל של האצבע המורה כדי לחשוף את הבוהן הנבחרת, או בהונות, לקעקוע החזק את כף הרגל קרוב לבהונות כך שהבוהן יש משטח מוצק מאחוריו, מניעת בוהן להתכופף. אין לתגרות את הרגל בעת מיקום כף הרגל. מבוגרים מרוסנים עשויים לנסות למשוך את כף הרגל. הכינו את הציוד. בחר רומח בעלי חיים גולדן רוד 5 מ”מ. מניחים נקודה קטנה של משחת קעקוע ירוק על משטח לא נקבובי; רדיד אלומיניום עובד טוב. טובלים רק את קצה הרומח במשחה לקעקועים. השתמש בכמות קטנה בלבד של הדבקה. החל את הקעקוע. תקע את הבוהן הרצויה עם הרומח גולדן רוד על פי קוד זיהוי. לנקב את העור כדי להציג את הדבק לתוך העור, משאיר סימן. תדקור את אותה נקודה שלוש פעמים כדי להבטיח חדירה נכונה. הימנע לחטט כל כך עמוק כי בוהן מדממת; זה יכול לגרום לקעקוע חלש יותר. ניקוי וטיפול לאחר קעקועים מכתימים בעדינות את הנקודה על מגבת/מגבת סופגת כדי להסיר עודף הדבק. אין לנסות לנקות עודף הדבק מהרגל או מהגוף. החזירו את החיה לכלוב שלה. השתמש lancet חדש לכל חיה. הקעקועים צריכים להיות מאומתים ביום שלאחר ההליך. בצעו מחדש את הקעקוע אם הנקודות חלשות או לא נראות לעין. אם הנקודות גלויות יום לאחר הקעקוע, הם צריכים להישאר גלויים לכל החיים של החיה. 4. שבבים זעירים ההשתלה של שבב RFID היא שיטה נפוצה לזיהוי בעלי חיים. טענו את השבב לתוך ההחלמה, או בחרו מזרק טעון מראש. לרסן את החיה באמצעות צינור ריסון פרספקס המאפשר אחיזה של העור על הכתפיים. אוהל העור, יצירת כיס. מניחים את המחט דרך העור, משופעים ומקבילים לעמוד השדרה, ומפנים אותה לכיוון הזנב. פלט את השבב בתת עור. למשוך את המחט ולצבוט את העור סגור בנקודת ההזרקה. זה מונע השבב מלעקוב אחר המחט מתוך העור. המשך להפעיל לחץ כדי לספק hemostasis עבור כל דימום בעור. הסר את החיה ממכשיר האיפוק ולסרוק את השבב כדי לאשר את קוד הזיהוי. איור 3. מיקום שבבים בחולדות בוגרות. 5. זיהוי זמני לעכברים צבעים לא טוקסיקיים וסמנים בעלי חיים יכולים לשמש לזיהוי זמני של עכברים. ריסנו את העכבר כך שהאזור שבין השכם נגיש לסימונים על הפרווה. הנח סמן, נקודה או פס של צבע על הפרווה באזור זה. אזור זה משמש כדי למנוע את החיה להסיר את הסימון בזמן הטיפוח. בדוק את הסימון מעת לעת אם אתה משתמש בו כמזהה היחיד במשך יותר מכמה ימים. הזנב יכול לשמש גם עבור משכי זמן קצרים. עם זאת, החיה עשויה להסיר ממנה סימן בזמן הטיפוח. 6. זיהוי זמני לחולדות ריסנו את החולדה כך שהאזור ליישום צבע או סימון יהיה נגיש בקלות. במקרים מסוימים, כאשר יש צורך רק פס או נקודה, החיה לא תצטרך להיות מרוסנת אבל מותר לנוע בחופשיות בכלוב. איפוק ידני על ידי אחיזת הזנב והחזקתו מתוחה בעת החלת הזיהוי נעשה בדרך כלל. אימוביליזציה זמנית באמצעות הרדמה משאיפה יכולה להיעשות עבור בעלי חיים שבירים. בדוק את הסימון מעת לעת אם אתה משתמש בשיטה זו כמזהה היחיד במשך יותר מכמה ימים.