De MTT assay is een eenvoudige en reproduceerbare colorimetrische assay voor de evaluatie van de levensvatbaarheid van de cel op basis van vermindering van de geel MTT en de productie van water oplosbare paarse formazan. Hier heeft de levensvatbaarheid van MCF-7 cellen na behandeling van nanogenomedicine geëvalueerd.
Abstract
Cytotoxiciteit van de futuristische nanogenomedicine (bijvoorbeeld short interfering RNA en antisense) kunnen belemmeren haar klinische ontwikkeling. Van deze kunnen de gen-gebaseerde geneeskunde en / of de drager ervan te lokken cellulaire toxiciteit. Voor de beoordeling van deze cytotoxiciteit, een gemeenschappelijke methodologie is grotendeels afhankelijk van gebruik van de 3 – (4, 5-dimethyl-2-thiazolyl) -2, 5-difenyl-2H-tetrazolium bromide (MTT) test die veelvuldig gebruikt als een colorimetrische aanpak, gebaseerd op de activiteit van de mitochondriale dehydrogenase enzymen in de cellen. In dit huidige onderzoek werden MCF-7 cellen geïnoculeerd in 96-wells plaat en op 50% confluentie ze werden behandeld met verschillende nanopolyplexes en onderworpen aan test na 24 uur MTT. Water oplosbaar geel MTT wordt gemetaboliseerd door het metabool actieve cellen aan het water onoplosbare paarse formazan, die verder wordt opgelost in buffer dimethylsulfoxide en Sornson s pH 10,5. Het resulterende product kan worden gekwantificeerd door spectrofotometrie met behulp van een plaat reader bij 570 nm.
Protocol
MCF-7 zaaien in 96-well plaat: MCF-7 cellen werden gekweekt in 25 t-kolf in medium dat Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DMEM), 10% FBS, 100 U / ml penicilline en 100 ug / ml streptomycine bij 37 ° C met 5% CO 2, 95% lucht en compleet vochtigheid. Eenmaal bereikt, ~ 90% confluentie, werden ze losgemaakt met behulp van 0,05% trypsine / EDTA en geteld door middel van trypan blauw en hemocytometer. Deze cellen werden vervolgens geresuspendeerd bij een concentratie van 4 × 1…
Discussion
De MTT test wordt beschouwd als een veelzijdige methode te zijn en derhalve de levensvatbaarheid van de cellen kunnen worden geëvalueerd op verschillende behandelingen. De productie van de resulterende formazan lijkt te zijn in verhouding tot het niveau van de energiestofwisseling in de cellen. Daarom is het mogelijk om het metabolisch geactiveerde cellen te meten, zelfs in de afwezigheid van celproliferatie. De hoeveelheid formazan geproduceerd is evenredig met de hoeveelheid van MTT in de incubatie-medium. Terwijl de…
Acknowledgements
De auteurs willen graag Stem Cell Technology en Shahid Ghazi Tabriz bedrijven respectievelijk erkennen voor het leveren van DMEM zonder fenol rood en steriel water voor injectie als cadeau.
Ahmadian, S., Barar, J., Saei, A. A., Fakhree, M. A. A., Omidi, Y. Cellular Toxicity of Nanogenomedicine in MCF-7 Cell Line: MTT assay. J. Vis. Exp. (26), e1191, doi:10.3791/1191 (2009).