Le test MTT est un test simple et reproductible colorimétriques pour l'évaluation de la viabilité cellulaire basé sur la réduction du MTT jaune et la production d'eau formazan violet insoluble. Ici, la viabilité des cellules MCF-7 sur le traitement des nanogenomedicine a été évalué.
Abstract
La cytotoxicité de l'nanogenomedicine futuristes (par exemple, petits ARN interférents et antisens) peuvent entraver son développement clinique. Parmi ces derniers, la médecine fondée sur les gènes et / ou son transporteur peut susciter une toxicité cellulaire. Pour l'évaluation de la cytotoxicité telle, une méthodologie commune est largement tributaire de l'utilisation de la 3 – (4, 5-diméthyl-2-thiazolyl) -2, 5-diphényl-2H-tétrazolium (MTT) qui a été largement utilisé comme une approche colorimétrique basé sur l'activité des enzymes déshydrogénases mitochondriales dans les cellules. Dans cette enquête, cellules MCF-7 ont été inoculés dans plaque de 96 puits et à 50% de confluence, ils ont été traités avec nanopolyplexes différents et soumis à des test MTT après 24 heures. Eau MTT solubles jaune est métabolisé par les cellules métaboliquement actives pour le formazan violet insoluble dans l'eau, qui est encore dissous dans du tampon pH diméthylsulfoxyde et Sornson s 10.5. Le produit résultant peut être quantifiée par spectrophotométrie en utilisant un lecteur de plaque à 570 nm.
Protocol
MCF-7 semis en plaque de 96 puits: Cellules MCF-7 ont été cultivées dans 25 t-ballon dans un milieu contenant Medium Eagle modifié par Dulbecco (DMEM), 10% de FBS, 100 U / ml de pénicilline et 100 pg / ml de streptomycine à 37 ° C avec 5% de CO 2, 95% air et l'humidité complète. Une fois atteint ~ 90% de confluence, ils ont été détachés en utilisant 0,05% de trypsine / EDTA et comptées par les moyens de bleu trypan et hémocytomètre. Ces cellules ont ensuite été…
Discussion
Le test MTT est réputé être une méthode souple et donc la viabilité des cellules peut être évaluée sur divers traitements. La production de formazan résultante semble être proportionnelle au niveau du métabolisme énergétique des cellules. Par conséquent, il est possible de mesurer les cellules métaboliquement actives même en l'absence de prolifération cellulaire. La quantité de formazan produite est proportionnelle à la quantité de MTT dans le milieu d'incubation. Alors, la concentration de M…
Acknowledgements
Les auteurs tiennent à remercier technologie des cellules souches et Shahid Ghazi entreprises Tabriz, respectivement, pour fournir de l'eau DMEM sans rouge de phénol et stériles pour l'injection comme cadeaux.
Ahmadian, S., Barar, J., Saei, A. A., Fakhree, M. A. A., Omidi, Y. Cellular Toxicity of Nanogenomedicine in MCF-7 Cell Line: MTT assay. J. Vis. Exp. (26), e1191, doi:10.3791/1191 (2009).